以葛根为基质的茯苓发酵制备方法技术

本发明专利技术涉及一种发酵制备工艺，具体为一种以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，包含如下步骤：步骤1：溶解葛根药材粉；步骤2：利用葡萄糖、酵母膏、磷酸氢二钾、玉米粉、蒸馏水制备培养基并杀菌，将茯苓菌株接种于培养基上活化；步骤3：葛根基质灭菌，接种茯苓菌株并发酵；步骤4：发酵后的液体烘干，加入甲醇溶液中超声萃取，离心，取上清液。本发明专利技术将具有协同作用的葛根及茯苓进行发酵，研制出可产生增强疗效的最佳药对组合，并发现经过发酵后，总黄酮及葛根素含量均有所提高。含量均有所提高。含量均有所提高。

【技术实现步骤摘要】
以葛根为基质的茯苓发酵制备方法


[0001]本专利技术涉及一种发酵制备工艺，具体为一种以葛根为基质的茯苓发酵制备方法。

技术介绍

[0002]根据国际糖尿病联盟（IDF）2019年新发布的第9版糖尿病概览（Diabetes Atlas）显示2019年全球20～79岁人群中约4.63亿患有糖尿病。糖尿病属于中医所述“消渴”的范畴。中医药治疗糖尿病有着久远的历史，经过几千年的临床实践，积累了大量宝贵的经验，形成了独特的学术体系。
[0003]葛根，性甘凉，有辛凉解肌、升阳运脾、生津止渴之功，早在《神农本草经》即有记载“葛根，味甘平，主消渴，身大热，呕吐，诸痹，起阴气，解诸毒。”其重视葛根对消渴的治疗作用，故列之于首，并明确治疗消渴可通过升发脾胃清气及生津的方法。历代用葛根来治疗消渴病的方剂也不乏其例，常与芦根、天花粉、知母配伍。如孙思邈《千金翼方》中的葛根丸即是以葛根为主药的治消渴方；张锡纯的《医学衷中参西录》中的玉液汤配伍葛根来治疗消渴。葛根升阳运脾，可扶助脾胃运化功能，将饮食物转化为水谷精微（包括血糖等），布散至五脏六腑，四肢百骸，这也是其治疗消渴的重要机理之一。
[0004]中药葛根的主要功效成分为黄酮、香豆素、皂苷和多糖等，在抗糖尿病方面，尤以葛根素研究最多。葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的异黄酮活性成分，其化学名称为4，7
‑
二羟基
‑8‑
C
‑
β
‑
D
‑
葡萄糖基异黄酮。临床与实验研究已证实葛根素既有降糖降脂的作用，又有改善微循环及调节血管内皮细胞舒缩功能的作用[1]。葛根素治疗T2DM，可增强胰岛素敏感性，减缓高胰岛素血症的发生，改善IR。以往的文献多数以探讨葛根素改善IR为主，其改善IR的可能基质为：
①
通过下调糖原合成酶激酶
‑
3(GSK
‑
3)及上调蛋白激酶B(PKB)等影响胰岛素信号转导而增加胰岛素敏感性；
②
通过调节葡萄糖转运体4（Glucose transporter 4，GLUT4）的表达及转位来增加胰岛素敏感性；
③
通过骨骼肌纤维组成成分的变化来增加胰岛素敏感性。近年来有文献针对葛根素保护胰岛β细胞的作用及基质进行了探讨，其作用机理为可以促进胰岛β细胞增殖、生长，并减少凋亡，增强胰岛β细胞的抗氧化能力，保护胰岛β细胞功能，使受损胰岛细胞得以修复并恢复功能。我们在前期也对葛根进行了一系列的研究，发现其针对糖尿病容易出现的“痰浊”证候有缓解作用，药理学研究发现葛根提取物葛根素具有降血糖、提高胰岛素受体的敏感性等作用。
[0005]茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，味甘、淡，性平，归心脾肾经，有利水渗湿，补脾建中，安心宁神之功效,有很强的药用和食用价值，既是中药，又属于药用真菌。《神农本草经》中将茯苓归为药中上品，有“久服安魂魄，养神，不饥”的作用。祖国医学中用茯苓治疗消渴由来已久，西汉刘向撰写的《别录》中提到茯苓可以"止消渴，
……
开胸腑，调脏气，伐肾邪，长阴,益气力，保神守中。”《太平圣惠方》中的白茯苓丸，将白茯苓与黄连、人参、熟地等药物配伍，用以治疗“消中之后，胃热入肾，消烁肾脂，令肾枯燥”的“肾消”。药理学研究发现茯苓主要活性成分是三萜类和多糖。近年来，亦有大量文献报道茯苓在糖尿病治疗方面的应用，并有实验证明茯苓多糖具有降血糖和抗脂质过氧化作用。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，通过将具有协同作用的葛根及茯苓进行发酵，研制出可产生增强疗效的最佳药对组合，其总黄酮及葛根素含量均有所提高。
[0007]本专利技术采用如下
技术实现思路
：一种以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，包含如下步骤：步骤1：葛根基质的制备：利用粉碎机将葛根饮片进行粉碎，然后通过60目筛筛选药材粉末。分析天平称取葛根药材粉末10g放于250mL锥形瓶中，同时加入50mL蒸馏水溶解，备用。
[0008]步骤2：茯苓菌株的活化：分析天平精密称取葡萄糖1.000g、酵母膏0.250g、磷酸氢二钾0.375g、玉米粉0.500g，加入蒸馏水溶解于250mL锥形瓶中。该培养基置于121℃立式加压蒸气灭菌器中2h灭菌，待灭菌锅气压降至常压之后，打开灭菌锅，将培养基取出并冷却。经浓度为75%乙醇消毒后，打开紫外灯照射30min，进行无菌操作。调配浓度为2
×
106cfu/ml茯苓菌株液20
‑
30
µ
l，接种在培养基上。培养基4层纱布和两层报纸封口，用粗棉线扎紧，在温度为28℃、转速为150r/min的摇床上活化四天，无光照，得到液态的活化茯苓菌株。
[0009]步骤3：以葛根为基质的茯苓发酵：葛根基质置于121℃高压灭菌锅中灭菌2h，将其置于超净工作台中备用。待基质冷却后，用移液枪精密移入相应容量的活化茯苓菌株。剩余的活化茯苓菌株高温灭活后弃掉，将接种后的葛根基质用4层纱布和两层报纸封口并置于温度为28℃、转速为150r/min的摇床上发酵，无光照。所有实验设定三组平行样品。
[0010]步骤4：发酵样品处理：将发酵后的液体完全倒入蒸发皿中，置于烘干机中并设置温度60℃，完全干燥后取出，收集干燥物，称重后用研钵研细，低温干燥环境保存，备用。用分析天平称取1g发酵粉末于离心管中，加入10毫升浓度为70%的甲醇溶解于离心管内，超声波清洗器中超声萃取30分钟后，放离心机中离心20分钟，取上清液即为萃取液。再利用紫外分光光度计测定样品中的总黄酮含量。
[0011]本专利技术将具有协同作用的葛根及茯苓进行发酵，研制出可产生增强疗效的最佳药对组合，并发现经过发酵后，总黄酮及葛根素含量均有所提高。
附图说明
[0012]图1为本专利技术中葛根基质加水量对总黄酮含量的影响曲线图；图2为本专利技术中茯苓菌株接种量对总黄酮含量的影响曲线图；图3为本专利技术中发酵天数对总黄酮含量的影响。
具体实施方式
[0013]一种以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，包含如下步骤：步骤1：葛根基质的制备：利用粉碎机将葛根饮片进行粉碎，然后通过60目筛筛选药材粉末。分析天平称取
葛根药材粉末10g放于250mL锥形瓶中，同时加入50mL蒸馏水溶解，备用。
[0014]步骤2：茯苓菌株的活化：分析天平精密称取葡萄糖1.000g、酵母膏0.250g、磷酸氢二钾0.375g、玉米粉0.500g，加入蒸馏水溶解于250mL锥形瓶中。该培养基置于121℃立式加压蒸气灭菌器中2h灭菌，待灭菌锅气压降至常压之后，打开灭菌锅，将培养基取出并冷却。经浓度为75%乙醇消毒后，打开紫外灯照射30min，进行无菌操作。调配浓度为2
×
106cfu/ml茯苓菌株液20
‑
30
µ
l，接种在培养基上，本专利技术采用的茯苓菌株为：拉丁学名：Wolfiporia cocos，中文译名：茯苓菌，保藏编号：5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，其特征是：包含如下步骤：步骤1，葛根基质的制备：将葛根饮片粉碎，溶于蒸馏水中备用；步骤2，茯苓菌株的活化：取葡萄糖、酵母膏、磷酸氢二钾、玉米粉溶于蒸馏水中，并置于121℃立式加压蒸气灭菌器中2h灭菌，灭菌后冷却，经乙醇消毒后，用紫外灯照射30min，将茯苓菌株接种在培养基上，培养基封口，在温度为28℃、转速为150r/min的摇床上活化四天，无光照，得到活化茯苓菌株；步骤3，以葛根为基质的茯苓发酵：步骤1获得的葛根基质置于121℃高压灭菌锅中灭菌2h，基质冷却后，移入活化茯苓菌株，接种后的葛根基质封口并置于温度为28℃、转速为150r/min的摇床上发酵，无光照，得到活化茯苓菌株；步骤4，发酵样品处理：将步骤3所得发酵后的液体烘干，收集干燥物，研细；将发酵粉末置于离心管中，加入甲醇溶解，超声萃取30min后，离心20min，取上清液即为萃取液。2.根据权利要求1所述的以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，其特征是：所述步骤1中，葛根饮片粉碎后，通过60目筛筛选药材粉末，称取葛根药材粉末10g放于250mL锥形瓶中，同时加入50mL蒸馏水溶解，备用；所述步骤2中，称取葡萄糖1.000g、酵母膏0.250g、磷酸氢二钾0.375g、玉米粉0.500g，加40
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120mL蒸馏水溶解于250mL锥形瓶中。3.根据权利要求2所述的以葛根为基质的茯苓发酵制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李津，雷晓蕾，闫世琛，王永辉，陈燕清，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：