抗体药物、制备方法及细胞培养基技术

本申请公开了一种抗体药物、制备方法及细胞培养基，制备方法包括将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体药物；其中，调节剂包括组分a和组分b，组分a包括Mn

【技术实现步骤摘要】
抗体药物、制备方法及细胞培养基


[0001]本申请属于抗体药物
，具体涉及一种抗体药物、制备方法及细胞培养基。

技术介绍

[0002]在抗体药物的开发过程中，往往需要和原研药保持较为一致的产品质量要求。糖基化修饰作为抗体关键质量属性之一，需要控制在与原研药物较为相似的水平。而糖基化修饰中G0F、Man5、G1F、G2F作为主要糖型影响着糖谱的比例，因此在抗体药物的开发过程中要尽量保证占比较多的主要糖型比例和原研药一致。
[0003]在抗体药物工艺开发过程中，当G0F含量偏低时，要做到与原研药一致水平，常采用以下方法：1、优化细胞培养基成分，如降低培养基中Mn
2+
、尿苷以及半乳糖等可能促进半乳糖基化修饰化学成分的含量，从而抑制半乳糖基化修饰，最终起到增加G0F含量的作用，但该方法对于使用商业化培养基的平台来说，是不现实的；2、提高培养过程中NH
4+
水平，即使高尔基体中pH提高，导致其中糖基化修饰酶活性的降低，从而抑制糖基化成熟的修饰过程，导致半乳糖基化修饰降低，G0F含量升高，但随之带来的是Man5水平也会升高，高Man5含量使抗体在人体中的清除速率增加，从而影响到抗体药物的药代动力学和药效动力学参数，同时NH
4+
水平增加对细胞的生长也会有影响；3、改变细胞培养过程中的工艺参数，如降低细胞培养的溶氧水平、升高培养过程的pH、降低培养过程中的培养温度；但该方法可能对细胞的生长和目标抗体的产量产生影响，同时也可能对抗体的其他关键质量属性产生影响，如电荷异质性方面。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种抗体药物、制备方法及细胞培养基，以解决现有技术中在抗体药物工艺开发过程中，提高抗体药物G0F糖型含量的方法存在缺陷的技术问题。
[0005]为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：提供一种抗体药物的制备方法，包括：将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体药物；其中，所述调节剂由组分a和组分b组成，所述组分a由锰盐溶液组成，所述组分b由N
‑
乙酰葡萄糖胺溶液组成；所述抗体药物的G0F糖型比例大于70%。
[0006]在一个或多个实施方式中，所述组分a中Mn
2+
的摩尔浓度为2~10μM，所述组分b中N
‑
乙酰葡萄糖胺的摩尔浓度为5~40mM，所述调节剂中组分a和组分b的体积比为1：（5~20）。
[0007]在一个或多个实施方式中，所述组分a的总添加体积与所述基础培养基的体积比为（1~2）：2000。
[0008]在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第3、4或5天和第5、6或7天分两次添加至反应体系中。
[0009]在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第4天和第6天分两次添加至反应体系中。
[0010]在一个或多个实施方式中，所述流加培养基分别在培养的第3、5、7天分三次添加至反应体系中。
[0011]为了实现上述目的，本申请采用的另一个技术方案是：提供一种采用上述任一实施方式所述的制备方法制备得到的抗体药物。
[0012]在一个或多个实施方式中，所述抗体药物的G0F糖型比例大于70%。
[0013]为了实现上述目的，本申请采用的又一个技术方案是：提供一种细胞培养基，包括基础培养基、流加培养基和调节剂，所述调节剂由组分a和组分b组成，所述组分a由锰盐溶液组成，所述组分b由N
‑
乙酰葡萄糖胺溶液组成。
[0014]在一个或多个实施方式中，所述组分a中Mn
2+
的摩尔浓度为2~10μM，所述组分b中N
‑
乙酰葡萄糖胺的摩尔浓度为5~40mM，所述调节剂中组分a和组分b的体积比为1：（5~20）。
[0015]区别于现有技术，本申请的有益效果是：本申请抗体药物的制备方法在细胞培养过程中分批添加包括Mn
2+
和N
‑
乙酰葡萄糖胺的调节剂，能够显著提高产物抗体中的G0F糖型占比，并显著降低产物抗体中的Man 5糖型占比，相对于培养过程中未添加调节剂的抗体，G0F的占比相对于对比例1提高了18.3%，Man5占比相对于对比例1降低了26.5%，从而有助于保证抗体药物的糖型比例和原研药一致，并降低抗体在人体中的清除速率；本申请抗体药物的制备方法无需改变细胞培养的工艺参数，不会对细胞的生长、目标抗体的产量以及其他关键质量属性产生影响；本申请的细胞培养基应用至抗体药物生产过程中时，能够显著提高产物抗体中的G0F糖型占比，并显著降低产物抗体中的Man 5糖型占比。有助于保证抗体药物的糖型比例和原研药一致，并降低抗体在人体中的清除速率。
附图说明
[0016]图1是本申请抗体药物的制备方法一实施方式的流程示意图；图2是糖基化修饰示意图。
具体实施方式
[0017]以下将结合各实施方式对本申请进行详细描述。但该等实施方式并不限制本申请，本领域的普通技术人员根据该等实施方式所做出的结构、方法、或功能上的变换均包含在本申请的保护范围内。
[0018]糖基化修饰作为抗体关键质量属性之一，为了保证抗体药物与原研药具有一致的产品质量，需要将仿制药与原研药的糖型比例控制在较为相似的水平。
[0019]糖基化修饰中G0F、Man5、G1F、G2F作为主要糖型影响着糖谱的比例，因此在抗体药物物的开发过程中要尽量保证占比较多的主要糖型如G0F、G1F和G2F比例和原研药一致。
[0020]目前在抗体药物工艺开发过程中，当G0F含量偏高时，可通过在细胞培养过程中添加适量的Mn
2+
，尿苷和半乳糖等调节剂促进G0F糖型向G1F和G2F糖型转变，从而可以将G0F降低至原研药水平；而当G0F含量偏低时，却难有有效的手段来提高G0F含量。
[0021]如
技术介绍
所示，现有技术中提高G0F含量的方法存在较多的缺陷，为了解决该问题，申请人开发了一种抗体药物的制备方法，该方法能够有效提高抗体药物中G0F含量，同时能够降低Man 5含量，从而降低抗体在人体中的清除速率。另外，该制备方法无需改变细胞培养的工艺参数，不会对细胞的生长、目标抗体的产量以及其他关键质量属性产生影响。
[0022]具体地，请参阅图1，图1是本申请抗体药物的制备方法一实施方式的流程示意图。
[0023]该制备方法包括：S100、将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂。
[0024]其中，调节剂包括组分a和组分b，组分a包括Mn
2+
，组分b包括N
‑
乙酰葡萄糖胺。
[0025]具体地，本实施方式对基础培养基和流加培养基的选择不做限定，可根据融合细胞的种类选择任何适配的商用培养基，能够保证细胞的稳定培养、增殖即可实现本实施方式的效果。
[0026]在培养过程中添本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体药物的制备方法，其特征在于，包括：将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体药物；其中，所述调节剂由组分a和组分b组成，所述组分a由锰盐溶液组成，所述组分b由N
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乙酰葡萄糖胺溶液组成；所述抗体药物的G0F糖型比例大于70%。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述组分a中Mn
2+
的摩尔浓度为2~10μM，所述组分b中N
‑
乙酰葡萄糖胺的摩尔浓度为5~40mM，所述调节剂中组分a和组分b的体积比为1：（5~20）。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述组分a的总添加体积与所述基础培养基的体积比为（1~2）：2000。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述调节剂分...

【专利技术属性】
技术研发人员：邝志威，谭洪志，刘刚，潘正骅，朱一翔，
申请(专利权)人：康日百奥生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：