用于巴尔得-别德尔综合征的基因治疗制造技术

提供一种用于治疗与巴尔得

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于巴尔得
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别德尔综合征的基因治疗


[0001]本专利技术涉及用于治疗巴尔得
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别德尔综合征(Bardet
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Biedl Syndrome)的基因治疗载体。特别地，本专利技术涉及与巴尔得
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别德尔综合征相关的视网膜变性的治疗。

技术介绍

[0002]巴尔得
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别德尔综合征(Bardet
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Biedl Syndrome，BBS)是常染色体隐性遗疾患，并且与早发性失明、严重肥胖、复杂的内分泌功能障碍、认知受损和肾衰竭相关。先天患有遗传性巴尔得
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别德尔综合征的患者会经历一系列使人衰弱的医学问题，其中一些限制寿命。受影响的儿童由于在眼后部(视网膜)的光敏细胞衰竭而最终通常会在其第一个十年开始失明。在生命的第一年内，他们将增长大量体重，这如果不加以控制的话将会进展为危及生命的肥胖、糖尿病和高血压。许多患者在其生命中的某个时刻也会发生肾衰竭(其可需要透析治疗和/或肾移植)，并且大多数患者会出现某种形式的学习困难。这些问题在一起将影响成人患者独立生活的能力，并且大多数人失业。即使提早诊断出来，基于症状的治疗也只会处理无法预防的并发症诸如视网膜变性和饮食措施难以控制的肥胖。
[0003]迄今为止，已经发现有22种基因是BBS致病的。这些基因产物中的许多在多亚基复合物中相互作用。例如，许多这些蛋白质形成称为BBSome的复合物。认为BBSome介导蛋白质运输至初级纤毛(primary cilium)。在BBS患者中最常见的突变基因是BBS1。42％的BBS患者发生BBS1基因突变。已在患有BBS的人中鉴定出超过30种的在BBS1基因中的突变。人BBS1基因位于11号染色体的长(q)臂上第13位。BBS1基因中的突变可能影响纤毛的正常形成和功能。这些细胞结构中的缺陷破坏发育过程中重要的化学信号传导途径，并且导致感官知觉异常。人BBS1基因包括17个外显子并且跨越约23kb。大多数BBS1基因突变是错义或终止突变，并且最常见的突变在蛋白质第390位用氨基酸精氨酸置换氨基酸甲硫氨酸(Met390Arg或M390R)。M390R突变占所有BBS1突变的约80％。
[0004]BBS的视网膜变性是快速进行性的并且对视力具有毁灭性，通常20岁前引起引起法定盲。BBS在青少年中还表现为夜盲症和眼震颤。
[0005]到目前为止，已经在小鼠模型中尝试使用视网膜下注射基因治疗载体来治疗眼的视网膜病变。该方法记载在Seo et al.,Invest Ophthalmol Vis Sci.54(9):6118
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32(2013)中，其中在鸡β肌动蛋白启动子的控制下使用AAV2/5载体递送小鼠Bbsl基因。然而，这项研究表明，BBS1蛋白的过表达对小鼠的视网膜有毒。该作者指出，这可能是因为过量的蛋白质不能掺入到正常的蛋白质复合物中，并且在细胞中是游离的，与其他蛋白质相互作用并阻碍它们的正常功能或它们的正常运输。一种蛋白质组分的过量可能会破坏正常的BBSome组装。因此，这项研究表明，野生型(WT)BBS1蛋白在小鼠中的表达并不一定能恢复正常功能。

技术实现思路

[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种用于治疗与巴尔得
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别德尔综合征(BBS)相关的
视网膜变性的载体，其中该载体包括可操作地连接至BBS1基因的启动子，其中该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子，并且其中所述载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。
[0007]载体用于治疗与巴尔得
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别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性。特别地，BBS是由BBS1基因突变引起的。因此，该载体引起的BBS1基因的表达提供了对BBS的治疗。
[0008]载体包括BBS1基因。BBS1基因编码功能性BBS1蛋白。BBS1基因优选编码人蛋白质，例如野生型人蛋白质。在BBS患者中，它是在BBS1蛋白中的突变，其导致它的功能的不完全。这种突变的BBS1蛋白是BBS发作和相关的视网膜变性的原因。
[0009]BBS1基因编码的功能性BBS1蛋白优选不包括在野生型蛋白中不存在的另外的氨基酸。任何另外的氨基酸都可能干扰蛋白质的正常功能。例如，优选的是，功能性蛋白质不包括荧光蛋白诸如绿色荧光蛋白(GFP)或mCherry，或者标签诸如FLAG标签或多组氨酸标签。
[0010]在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少72％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少74％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少76％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少78％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在特定实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少80％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少82％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少84％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少85％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少86％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少88％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在其他实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少90％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少92％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在许多实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少94％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在各种实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少95％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在某些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少96％序列同一性，并且编码功能性BBS1蛋白。在一些实施方式中，BBS1基因具有SEQ ID NO.1的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗与巴尔得
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别德尔综合征(BBS)相关的视网膜变性的载体，其中所述载体包括可操作地连接至BBS1基因的启动子，其中该启动子选自视紫红质激酶(RK)启动子、巨细胞病毒即早期(CMV)启动子和CAG启动子，并且其中所述载体选自AAV2/8载体、AAV2/7m8载体和AAV9载体。2.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子。3.根据权利要求2所述的载体，其中，所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子。4.根据权利要求3所述的载体，其中，所述视紫红质激酶(RK)启动子具有SEQ ID NO.7的序列。5.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子。6.根据权利要求5所述的载体，其中，所述巨细胞病毒即早期(CMV)启动子具有选自SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6的序列。7.根据权利要求1所述的载体，其中，所述启动子是CAG启动子。8.根据权利要求7所述的载体，其中，所述CAG启动子具有选自SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4的序列。9.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV2/8载体。10.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV2/7m8载体。11.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述载体是AAV9载体。12.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因编码具有SEQ ID NO.2的蛋白质序列或与其具有80％序列同一性的功能性人BBS1蛋白。13.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因编码野生型人BBS1蛋白。14.根据前述权利要求中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQID NO.1的核苷酸序列或与其具有至少70％序列同一性，并且编码功能性人BBS1蛋白。15.根据权利要求14所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列。16.根据权利要求1至14中任一项所述的载体，其中所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8或9的核苷酸序列。17.根据权利要求1所述的载体，其中：1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子；2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子；或3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是人视紫红质激酶(RK)启动子。18.根据权利要求1所述的载体，其中：1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子；2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早期(CMV)启动子；或3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是巨细胞病毒即早
期(CMV)启动子。19.根据权利要求1所述的载体，其中：1)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子；2)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.8的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子；或3)所述BBS1基因具有SEQ ID NO.9的核苷酸序列，以及所述启动子是CAG启动子。20.根据权利要求1所述的载体，其中：1)所述载体是AAV2/8载体，所述启动子是视紫红质激酶(RK)启动子，以及所述BBS1基因编码...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普，
申请(专利权)人：UCL商业有限公司，
类型：发明
国别省市：