β2-微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒及其检测方法技术

本申请提供一种β2

【技术实现步骤摘要】
β2‑
微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于体外诊断免疫层析检测领域，涉及β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒及其检测方法，具体地说是一种利用荧光免疫层析的技术原理实现定量检测人血清中β2
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微球蛋白含量。

技术介绍

[0002]β2
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微球蛋白是由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种小分子球蛋白，分子质量为11800，由99个氨基酸组成的单链多肽。它是细胞表面人白细胞抗原(HLA)的β链(轻链)部分，分子内含一对二硫键，不含糖，与免疫球蛋白稳定区的结构相似。广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。正常人β2
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微球蛋白的合成率及从细胞膜上的释放量相当恒定，β2
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微球蛋白可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收，并在肾小管上皮细胞中分解破坏，故而正常情况下β2
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微球蛋白的排出是很微量的，血清β2
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微球蛋白的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况。
[0003]肾移植患者血中β2
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微球蛋白明显增高，提示机体发生排斥反应，因β2
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微球蛋白合成加速，虽肾清除增多，而血β2—微球蛋白仍增高。一般在移植后2～3天血β2—微球蛋白上升至高峰，随后逐渐下降。肾移植后连续测定血、尿β2—微球蛋白可作为肾小球和肾小管病变的敏感指标；β2
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微球蛋白也可衡量糖尿病患者轻度肾功能减退和疗效观察的一项简便、精确而又敏感的方法，其测定在临床上有多种价值。
[0004]目前常见检测β2
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微球蛋白的方法，如：化学发光法/酶联免疫法/免疫增强比浊法/胶体金法，均存在灵敏度低、检测时间长、过程复杂、检测成本高的缺点，这不仅困扰着诊断环节，也存在于康复环节，没有精准的诊断难以有精准的治疗，因此如何精准地筛查病例，是亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种特异性好、灵敏度高、结果准确且稳定的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒。
[0006]本专利技术提供技术方案如下：一种β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，包括试剂卡和稀释液，所述试剂卡包括PVC板以及依次设于所述PVC板上的样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸，所述NC膜上设有检测线和质控线；
[0007]检测线上包被有β2
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MG单克隆抗体，包被浓度为0.8
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1.2mg/ml；
[0008]质控线上包被有鸡IgY抗体，包被浓度为0.8
‑
1.2mg/ml；
[0009]结合垫上喷涂有荧光微球标记的抗体溶液，荧光微球标记的抗体溶液具体为含有荧光微球标记的另一结合位点β2
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MG抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体混合。
[0010]优选的，标记用荧光微球为南京微测生物公司粒径为300nm的Eu
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荧光纳米微球。
[0011]优选的，β2
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MG标记抗体的标记量为10μg，羊抗鸡IgY标记抗体标记量为16μg。
[0012]优选的，标记抗体溶液喷量为4
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6μL/cm。
[0013]优选的，包被工作液喷量为0.8
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1.2μL/cm。
[0014]优选的，结合垫上荧光微球标记的另一结合位点β2
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MG抗体中，荧光微球与β2
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MG抗体的投料比为20:1。
[0015]优选的，结合垫上荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体中，荧光微球与羊抗鸡IgY抗体的投料比为25:2。
[0016]优选的，荧光微球标记β2
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MG标记抗体，步骤如下：
[0017]a.取2mL离心管加入标记缓冲液MES 1mL；取混匀固含量为1％的荧光微球20μL于标记缓冲液中，再次涡旋混匀；
[0018]b.加入标记活化液100μL混匀，旋转混匀反应30min；
[0019]c.进行离心30min，离心转速为10000rpm/min；弃去上清液，加入标记缓冲液1000μL，超声；
[0020]d.加入β2
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MG标记抗体10μg混匀，旋转混匀反应30min；
[0021]e.加入标记封闭液100μL后超声，旋转混匀反应2h；
[0022]f.离心30min；弃去上清液，加入标记保存液1mL超声；
[0023]g.将标记物移入新的10mL离心管中，吸取标记保存液4mL清洗标记所用2mL离心管，清洗后将其移入10mL离心管中，涡旋混匀。
[0024]优选的，荧光微球标记羊抗鸡IgY抗体，步骤如下：
[0025]a.取2mL离心管加入标记缓冲液MES 1mL；取混匀固含量为1％的荧光微球20μL于标记缓冲液中，再次涡旋混匀；
[0026]b.加入标记活化液100μL混匀，旋转混匀反应30min；
[0027]c.进行离心30min，离心转速为10000rpm/min；弃去上清液，加入标记缓冲液1000μL，超声；
[0028]d.加入羊抗鸡IgY抗体16μg混匀，旋转混匀反应30min；
[0029]e.加入标记封闭液100μL后超声，旋转混匀反应2h；
[0030]f.离心30min；弃去上清液，加入标记保存液1mL超声；
[0031]g.将标记物移入新的10mL离心管中，吸取标记保存液4mL清洗标记所用2mL离心管，清洗后将其移入10mL离心管中，涡旋混匀。
[0032]优选的，稀释液的配方为：0.01M PBS,pH7.4+0.05％的Proclin 300。
[0033]本专利技术的目的在于提供一种的β2
‑
微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒的制备方法。
[0034]本专利技术提供技术方案如下：一种上述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒的制备方法，包括采用以下步骤制备试剂卡：
[0035]步骤1：在NC膜上设置检测线和质控线，将β2
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MG单克隆抗体、鸡IgY抗体分别按0.8
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1.2mg/mL浓度配制包被工作液，按0.8
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1.2mg/mL包被量，用金标划线机将其划到NC膜上的检测线和质控线后干燥；
[0036]步骤2：将荧光微球标记的抗体溶液用喷金划线机按照4
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6μL/cm喷量，将其喷到剪裁后的结合垫上后干燥；
[0037]步骤3：样品垫经样品垫处理液处理好后干燥；
[0038]步骤4：将上述已处理的样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸按顺序依次粘贴在PVC板
上，组装成试剂卡。
[0039]优选的，样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，包括试剂卡和稀释液，所述试剂卡包括PVC板以及依次设于所述PVC板上的样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸，所述NC膜上设有检测线和质控线，其特征在于：检测线上包被有β2
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MG单克隆抗体，包被浓度为0.8
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1.2mg/ml；质控线上包被有鸡IgY抗体，包被浓度为0.8
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1.2mg/ml；结合垫上喷涂有荧光微球标记的抗体溶液，荧光微球标记的抗体溶液具体为含有荧光微球标记的另一结合位点β2
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MG抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体混合。2.根据权利要求1所述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，其特征在于：标记用荧光微球为南京微测生物公司粒径为300nm的Eu
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荧光纳米微球。3.根据权利要求1所述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，其特征在于：β2
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MG标记抗体的标记量为10μg，羊抗鸡IgY标记抗体标记量为16μg。4.根据权利要求1所述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，其特征在于：标记抗体溶液喷量为4
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6μL/cm；包被工作液喷量为0.8
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1.2μL/cm。5.根据权利要求1所述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，其特征在于：结合垫上荧光微球标记的另一结合位点β2
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MG抗体中，荧光微球与β2
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MG抗体的投料比为20:1；结合垫上荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体中，荧光微球与羊抗鸡IgY抗体的投料比为25:2。6.根据权利要求1所述的β2
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微球蛋白荧光免疫层析法测定试剂盒，其特征在于：荧光微球标记β2
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MG标记抗体，步骤如下：a.取2mL离心管加入标记缓冲液MES 1mL，取混匀固含量为1％的荧光微球20μL于标记缓冲液中，再次涡旋混匀；b.加入标记活化液100μL混匀，旋转混匀反应30min；c.进行离心30min，离心转速为10000rpm/min，弃去上清液，加入标记缓冲液1000μL，超声；d.加入β2
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MG标记抗体10μg混匀，旋转混匀反应30min；e.加入标记封闭液100μL后超声，旋转...

【专利技术属性】
技术研发人员：王胜岚，彭永林，李峰，韦丽英，
申请(专利权)人：中山生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：