本发明专利技术涉及检测试剂技术领域，特别是涉及一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其应用。粘多糖酶相较传统聚阳离子而言，对肝素类的硫酸多糖更具特异性，能够快速地与肝素形成复合物，从而达到去除肝素干扰的目的。本发明专利技术通过在丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂R1中加入粘多糖酶，当试剂用于检测肝素样本时，R1中的粘多糖酶能迅速与肝素结合，使试剂R2加入后，吸光度能够平稳地下降，在规定参数下，根据定标曲线和吸光度的变化值，得出正常的样本检测值，从而解决肝素样本出现0值甚至负值的现象。且对试剂的稳定性基本没有影响。负值的现象。且对试剂的稳定性基本没有影响。负值的现象。且对试剂的稳定性基本没有影响。
【技术实现步骤摘要】
一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及检测试剂
，特别是涉及一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]丙氨酸氨基转移酶（ALT）是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶，起加快蛋白质氨基酸在体内转化的作用，它广泛存在于人体各种组织、器官、肌肉、骨骼中，以肝脏细胞的细胞浆中最多。丙氨酸氨基转移酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起ALT升高。在急性肝炎及慢性肝炎与肝硬化活动，肝细胞膜的通透性改变，ALT就从细胞内溢出循环到血液中去，这样便使得抽血检查结果偏高。
[0003]目前临床上一般用速率法检测ALT，但是这种方法有着试剂稳定性不好，测试肝素样本会出现0值甚至负值的情况，这是由于肝素会在ALT试剂R1加入后，使吸光度急剧降低，从而导致后续读点处吸光度基本是平的，不呈现下降趋势，导致出现0值甚至负值，从而无法得到准确的测值。
技术实现思路
[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其应用。本专利技术利用粘多糖酶制备的试剂盒，可以解决肝素样本出现0值甚至负值的现象。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供了粘多糖酶在抗肝素干扰中的应用，所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936。<br/>[0006]本专利技术还提供了一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，包括独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液50~200mmol/L、L
‑
丙氨酸100~400mmol/L、乳酸脱氢酶0.2~2ku/L、表面活性剂1~10g/L、粘多糖酶0.1~2ku/L、防腐剂0.1~2g/L和NADH 0.1~1mmol/L；所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936；所述试剂R2包括缓冲液50~200mmol/L、防腐剂0.1~2g/L和α
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酮戊二酸100~400mmol/L。
[0007]优选的，所述试剂R1包括缓冲液50~150mmol/L、L
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丙氨酸150~350mmol/L、乳酸脱氢酶1~1.5ku/L、表面活性剂1~3g/L、粘多糖酶0.2~2ku/L、防腐剂0.3~2g/L和NADH 0.4~1mmol/L；所述试剂R2包括缓冲液50~150mmol/L、防腐剂0.3~2g/L和α
‑
酮戊二酸150~400mmol/L。
[0008]优选的，所述试剂R1中的缓冲液包括TAPS、TRIS、HEPES、MOPSO和MOPS缓冲液中的
一种或多种；所述缓冲液的pH值为7.5~8.0。
[0009]优选的，所述表面活性剂包括TX
‑
100、AEO
‑
9、TWEEN20和B66中的一种或多种。
[0010]优选的，所述试剂R1中的防腐剂包括叠氮钠、氯霉素和红霉素中的一种或多种。
[0011]优选的，所述试剂R2中的缓冲液包括TAPS、TRIS、HEPES、MOPSO和MOPS缓冲液中的一种或多种，所述缓冲液的pH值为9~9.5。
[0012]优选的，所述试剂R2中的防腐剂包括叠氮钠、氯霉素和红霉素中的一种或多种。
[0013]本专利技术还提供了上述丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒在检测丙氨酸氨基转移酶中的应用。
[0014]优选的，检测的样本包括含有肝素的样本。
[0015]有益效果：本专利技术提供了一种粘多糖酶在抗肝素干扰中的应用，所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936。
[0016]粘多糖酶相较传统聚阳离子而言，对肝素类的硫酸多糖更具特异性，能够快速地与肝素形成复合物，从而达到去除肝素干扰的目的。本专利技术通过在丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂R1中加入粘多糖酶，当试剂用于检测肝素样本时，R1中的粘多糖酶能迅速与肝素结合，使试剂R2加入后，吸光度能够平稳地下降，在规定参数下，根据定标曲线和吸光度的变化值，得出正常的样本检测值，从而解决肝素样本出现0值甚至负值的现象。且对试剂的稳定性基本没有影响。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1为实施例1制备的试剂盒与对照试剂盒检测普通样本（不含肝素样本）时相关性图谱；图2为对比例1制备的试剂盒与对照试剂盒检测普通样本（不含肝素样本）时相关性图谱；图3为实施例1制备的试剂盒肝素同源样本的相关性图谱；图4为实施例2制备的试剂盒肝素同源样本的相关性图谱；图5为对照试剂盒肝素同源样本相关性图谱；图6为对比例2制备的试剂盒肝素同源样本相关性图谱；图7为实施例1制备的试剂盒线性图谱；图8为实施例4制备的试剂盒线性图谱；图9为对照试剂盒线性图谱；图10为对比例4制备的剂盒线性图谱。
具体实施方式
[0019]本专利技术提供了粘多糖酶在抗肝素干扰中的应用，所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936。
[0020]本专利技术所述粘多糖酶可以水解粘多糖中的N
‑
乙酰
‑
β
‑
D
‑
葡糖胺和D
‑
葡糖醛酸之间
的β
‑
1，4
‑
键，产生四糖残基，不释放单糖，酶反应为：粘多糖+H2O
═
寡聚糖。由于肝素中也含有上述基团，在粘多糖酶作用下，肝素从多糖水解成寡聚糖，从而可以避免肝素干扰，检测结果准确，避免出现0值甚至负值的问题；特别是可以解决现有技术中检测含有肝素样本中的丙氨酸氨基转移酶时，检测结果会出现0值甚至负值的问题。
[0021]本专利技术还提供了一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，包括独立包装的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液50~200mmol/L、L
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丙氨酸100~400mmol/L、乳酸脱氢酶0.2~2ku/L、表面活性剂1~10g/L、粘多糖酶0.1~2ku/L、防腐剂0.1~2g/L和NADH 0.1~1mmol/L；所述试剂R2包括缓冲液50~200mmol/L、防腐剂0.1~2g/L和α
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酮戊二酸100~400mmol/L。
[0022]如无特殊说明，本专利技术对所述试剂盒中各个组分的来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。
[0023]在本专利技术中，所述试剂R1和试剂R2的体积比优选为4：1。
[0024]本专利技术所述试剂R1包括缓冲液50~200mmol/L，优选为50~150mmol/L，更优选为100mmol/L。在本专利技术中，所述缓冲液优选包括TAPS、TRIS、HEPES、MOPSO和MOP本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.粘多糖酶在抗肝素干扰中的应用，所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936。2.一种抗肝素干扰的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，包括独立包装的试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述试剂R1包括缓冲液50~200mmol/L、L
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丙氨酸100~400mmol/L、乳酸脱氢酶0.2~2ku/L、表面活性剂1~10g/L、粘多糖酶0.1~2ku/L、防腐剂0.1~2g/L和NADH 0.1~1mmol/L；所述粘多糖酶购自南京罗迈美公司，货号为LMM03936；所述试剂R2包括缓冲液50~200mmol/L、防腐剂0.1~2g/L和α
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酮戊二酸100~400mmol/L。3.根据权利要求2所述的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括缓冲液50~150mmol/L、L
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丙氨酸150~350mmol/L、乳酸脱氢酶1~1.5ku/L、表面活性剂1~3g/L、粘多糖酶0.2~2ku/L、防腐剂0.3~2g/L和NADH 0.4~1mmol/L；所述试剂R2包括缓冲液50~150mmol/L、防腐剂0.3~2g/L和α
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酮戊二酸15...
【专利技术属性】
技术研发人员：王青泉，申文君，张麟，党敏，王迪，宋如昊，
申请(专利权)人：上海执诚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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