一种高密度戊糖片球菌培养基及其培养方法技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，特别涉及一种高密度戊糖片球菌的培养基及其培养方法。基础培养基包括，酵母蛋白胨4.0～6.0g/L，酵母浸出物8.0～12.0g/L，无水葡萄糖15.0～25.0g/L，一水柠檬酸3.0～7.0g/L，乙酸钠3.0～7.0g/L，磷酸二氢钾1.0～3.0g/L，硫酸镁0.3～0.7g/L，硫酸锰0.005～0.015g/L，吐温80 0.1～0.3g/L，余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。115℃灭菌30min。

【技术实现步骤摘要】
一种高密度戊糖片球菌培养基及其培养方法


[0001]本专利技术属于微生物
，特别涉及一种高密度戊糖片球菌的培养基及其培养方法。

技术介绍

[0002]戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus，P.p)是益生菌的一种，链球菌科片球菌属，为圆形菌落，革兰氏阳性菌。戊糖片球菌可通过自身繁殖来有效抑制致病菌，增强机体免疫力，同时可促进营养物质的合成和代谢、降低胆固醇，已被国家卫生和健康委员会批准为可食用菌种。戊糖片球菌通过利用碳水化合物转化为酸，降低pH后抑制大量腐败菌，起到保鲜作用。戊糖片球菌还可通过自身代谢产生的酶类，分解肉制品中的蛋白质和脂肪酸，使机体更容易吸收。其主要分布于麦芽汁及发酵植物材料中，对提高发酵食品的风味和营养具有重要促进作用，现已被广泛应用于微生态制剂、乳制品发酵等领域，因此具有潜在的商业价值。
[0003]在戊糖片球菌的培养中，培养基的配方和培养方法决定着发酵液中的活菌数。现有研究报道中的培养基和培养方法最终培养的戊糖片球菌和市面上的戊糖片球活菌数普遍在10～100亿/mL。因此，为满足生产及人们对高活菌数戊糖片球菌的需要，研究获得高密度戊糖片球菌的培养基及培养方法尤为重要。由此，本专利技术涉及一种培养高活菌数戊糖片球菌的培养基和培养方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种高密度戊糖片球菌培养基及培养方法，不仅能够有效增殖培养戊糖片球菌，达到戊糖片球菌活菌数量大、菌体收率高的目的，还有利于实现大规模工业化生产。
[0005]本专利技术采用的技术方案为：一种高密度戊糖片球菌的培养基，包括基础培养基和优化培养基，基础培养基包括，酵母蛋白胨4.0～6.0g/L，酵母浸出物8.0～12.0g/L，无水葡萄糖15.0～25.0g/L，一水柠檬酸3.0～7.0g/L，乙酸钠3.0～7.0g/L，磷酸二氢钾1.0～3.0g/L，硫酸镁0.3～0.7g/L，硫酸锰0.005～0.015g/L，吐温80 0.1～0.3g/L，余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。
[0006]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，基础培养基包括，酵母蛋白胨5.5g/L，酵母浸出物11.0g/L，无水葡萄糖22.0g/L，一水柠檬酸4.0g/L，乙酸钠5.5g/L，磷酸二氢钾2.2g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.01g/L，吐温80 0.25g/L，余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。
[0007]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，优化培养基包括，酵母蛋白胨3.0～7.0g/L、酵母浸出物30.0～40.0g/L、无水葡萄糖25.0～35.0g/L、一水柠檬酸3.0～7.0g/L、L
‑
苹果酸1.0～3.0g/L、乙酸钠3.0～7.0g/L、磷酸二氢钾1.0～3.0g/L、硫酸镁0.3～0.7g/L、硫酸锰0.005～0.015g/L、吐温80 0.1～0.3g/L、余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭
菌30min。
[0008]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，优化培养基包括，酵母蛋白胨5.5g/L、酵母浸出物37.0g/L、无水葡萄糖32.0g/L、一水柠檬酸6.0g/L、L
‑
苹果酸2.5g/L、乙酸钠6.0g/L、磷酸二氢钾2.2g/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.01g/L、吐温80 0.25g/L、余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。
[0009]一种高密度戊糖片球菌的培养方法，方法如下：
[0010]1)菌种活化：将符合要求的戊糖片球菌菌种冻存管进行解冻菌种复苏后，接种至基础培养基中，装液量20～30％，进行静置培养，测得菌液pH值≤4.20，OD值≥16.000；
[0011]2)菌种扩培：将1)得到的种子液接种至基础培养基中，装液量30～50％，进行培养，测得菌液pH≤4.20，OD值≥10.000；
[0012]3)菌种初级发酵：将2)得到的发酵液按照3～5％接种量，接种至优化培养基中，装液量≤80％，气压控制在0.02～0.05MPa，60rpm速度搅动培养，通气量为0，发酵过程监测菌液pH，进行培养，发酵进行6h开始，每15min监控菌液OD值，当连续两次OD值相差≤0.1或呈负增长时停止发酵，发酵终点OD值≥19.000；
[0013]4)菌种转种发酵：待3)发酵结束后，将发酵液立即按照5～7％接种量，接种至优化培养基中，装液量≤80％，气压控制0.02～0.05MPa，60rpm速度搅动培养，通气量为0，发酵过程监测菌液pH，进行培养，发酵终点OD值≥16.000。
[0014]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养方法，步骤1)中，符合要求的戊糖片球菌菌种是戊糖片球菌菌种经划线培养后平皿菌落形态均一，无杂菌；配置成菌悬液后，菌悬液活菌数≥2.0
×
109CFU/mL。
[0015]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养方法，步骤1)中，接种到基础培养基中的接种量为10～15％，静置培养条件为32～34℃条件下静置培养15～17h。
[0016]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养方法，步骤2)中，接种到基础培养基中的接种量为3～5％，培养条件为32～34℃静置培养15～17h。
[0017]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养方法，步骤3)中，所述的监测菌液pH是通过流加食品级氢氧化钠控制pH在5.50，培养温度为32～34℃，培养时间为7～8h。
[0018]上述的一种高密度戊糖片球菌的培养方法，步骤4)中，所述的监测菌液pH是通过流加食品级氢氧化钠控制pH在5.50，培养温度为32～34℃，培养时间为5.5～6.5h。
[0019]采用上述培养基和培养方法培养戊糖片球菌，获得的菌悬液采用平板计数法检测活菌数达10
10
CFU/mL以上，菌悬液经13000rpm离心收集菌泥，菌泥活菌数≥6.00
×
10
11
CFU/g，菌泥收率达2.1％以上。
[0020]菌泥收率＝菌泥重量(kg)/发酵液体积(L)
×
100％
[0021]本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0022]1、本专利技术为实现戊糖片球菌增殖培养、富集较高活菌数的菌体，分别选用基础培养基和优化培养基针对不同阶段进行扩培和发酵，更适合菌体不同阶段的培养，且培养基的组成成分均为食品级，发酵得到的菌体可用于大规模生产食品用菌粉。
[0023]2、本专利技术在菌体发酵过程中利用食品级NaOH溶液控制发酵环境pH，实现快速扩增菌体，较高活菌数。
[0024]3、本专利技术采用初级发酵及转种发酵方法，实现菌体的快速增长，且发酵温度低，发
酵时间短，能源消耗低。
[0025]4、本专利技术采用的培养基及培养方法培养的戊糖片球菌菌悬液活菌数能够达到8.5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高密度戊糖片球菌的培养基，其特征在于，包括基础培养基和优化培养基，基础培养基包括，酵母蛋白胨4.0～6.0g/L，酵母浸出物8.0～12.0g/L，无水葡萄糖15.0～25.0g/L，一水柠檬酸3.0～7.0g/L，乙酸钠3.0～7.0g/L，磷酸二氢钾1.0～3.0g/L，硫酸镁0.3～0.7g/L，硫酸锰0.005～0.015g/L，吐温80 0.1～0.3g/L，余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。2.根据权利要求1所述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，其特征在于，基础培养基包括，酵母蛋白胨5.5g/L，酵母浸出物11.0g/L，无水葡萄糖22.0g/L，一水柠檬酸4.0g/L，乙酸钠5.5g/L，磷酸二氢钾2.2g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.01g/L，吐温80 0.25g/L，余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。3.根据权利要求1所述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，其特征在于，优化培养基包括，酵母蛋白胨3.0～7.0g/L、酵母浸出物30.0～40.0g/L、无水葡萄糖25.0～35.0g/L、一水柠檬酸3.0～7.0g/L、L
‑
苹果酸1.0～3.0g/L、乙酸钠3.0～7.0g/L、磷酸二氢钾1.0～3.0g/L、硫酸镁0.3～0.7g/L、硫酸锰0.005～0.015g/L、吐温80 0.1～0.3g/L、余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。4.根据权利要求3所述的一种高密度戊糖片球菌的培养基，其特征在于，优化培养基包括，酵母蛋白胨5.5g/L、酵母浸出物37.0g/L、无水葡萄糖32.0g/L、一水柠檬酸6.0g/L、L
‑
苹果酸2.5g/L、乙酸钠6.0g/L、磷酸二氢钾2.2g/L、硫酸镁0.6g/L、硫酸锰0.01g/L、吐温80 0.25g/L、余量为无菌水，pH 6.60～6.80，115℃灭菌30min。5.一种高密度戊糖片球菌的培养方法，其特征在于，方法如下：1)菌种活化：将符合要求的戊糖片球菌菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：张艳华，曹蓝，李东红，余萍，矫艳平，
申请(专利权)人：江西仁仁健康产业有限公司，
类型：发明
国别省市：