植入前胚胎的筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种植入前胚胎的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：对植入前胚胎的染色体和DNA甲基化水平进行检测，根据所得检测结果从所述植入前胚胎中筛选出染色体正常、目标区域的DNA甲基化水平满足预设要求，且全基因组DNA甲基化水平在0.25

【技术实现步骤摘要】
植入前胚胎的筛选方法


[0001]本专利技术涉及辅助生殖医学
，特别涉及一种植入前胚胎的筛选方法。

技术介绍

[0002]辅助生殖技术是解决不孕不育的有效临床技术，根据《Reproductive Biology and Endocrinology》的统计，目前超过20％的不孕不育夫妻必须通过辅助生殖技术治疗。
[0003]提高辅助生殖的出生率一直是辅助生殖医学领域面临的挑战。辅助生殖过程中挑选优良的胚胎进行移植是提高出生率的有效方法。目前，临床上普遍采用形态学指标以及胚胎植入前遗传学筛查(Preimplantation genetic screening，PGS)来评价和挑选胚胎。
[0004]采用形态学指标评价和挑选胚胎主要是指根据Gardner囊胚评分系统对形成的囊胚进行评分，例如4AA、4BB、4AB等；其中，数字代表囊胚细胞的密度和分裂程度的等级，分为1到6级，6为最佳。第1个字母表示将来发育成胎儿的内细胞团的质量，第2个字母表示将来发育成胎盘的滋养层细胞的质量。质量等级最好为A，依次为B、C。
[0005]胚胎植入前遗传学筛查(PGS)是指在胚胎植入之前，通过活检3
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5个细胞，来检测胚胎的染色体数目和结构，判断胚胎是否存在遗传物质异常的检测方法。PGS技术至今已经发展了30几年了，从最开始的采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)只能分析几条特定的染色体的倍数和结构情况，发展到了目前使用全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)，实现对23对染色体的检测。虽然采用形态学指标来筛选胚胎，易于操作，但形态学指标无法反映出胚胎遗传物质是否存在异常，并且不能反映胚胎的发育质量以及携带疾病的风险。研究发现，在形态学良好的囊胚中，仅42％的胚胎是染色体完全正常的；其中，仅30％的ICM评级为A的胚胎，染色体是正常的(Munn
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et al.,2010)。临床研究发现，胚胎染色体发生异常的概率会随着父母年龄，尤其是女方年龄的增长而升高。研究发现，当年龄≥35岁时，卵母细胞和胚胎非整倍体发生率逐步增加(34～75％)(Franasiak et al.,2014)，因此，高龄女性的自然妊娠和IVF妊娠的概率都显著下降，并且流产率增加(Ola and Li,2006)。所以对于高龄人群，采用形态学筛查胚胎的效率进一步降低。因此在一些女方高龄(35岁以上)、复发性流产、反复着床失败的患者中，还会通过PGS技术进一步筛选胚胎(Chen et al.,2015；Rubio et al.,2017)。
[0006]PGS技术虽然在一定程度上提高了辅助生殖的出生率，目前经PGS筛查后，试管婴儿的出生率达到了40％。但是临床研究发现，大量的染色体倍数正常的胚胎仍然不能成功妊娠。并且最新的研究成果显示，对于35岁以下的女性患者人群，PGS在提高妊娠率上没有显著的效果(Yan et al.,2021)。另一方面，试管婴儿中表观遗传疾病的发病率是自然受孕的婴儿发病率的2倍，并且约有千分之一的婴儿患有印记基因疾病。然而PGS技术只是检测胚胎的基因组DNA，无法检测胚胎的表观组DNA，所以PGS无法检测胚胎是否患有表观遗传疾病。
[0007]综上所述，采用目前临床上胚胎植入前的检测方法，妊娠率低。
[0008]有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0009]基于此，本申请实施例的目的包括提供一种植入前胚胎的筛选方法，能够有效提升妊娠率。
[0010]本申请实施例的目的可以通过以下技术方案实现：
[0011]本申请提供一种植入前胚胎的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：
[0012]对植入前胚胎的染色体和DNA甲基化水平进行检测，根据所得检测结果从所述植入前胚胎中筛选出染色体正常，且全基因组DNA甲基化水平在0.25
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0.27区间内的胚胎或者全基因组DNA甲基化水平在0.25
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0.27区间外的相对于其他胚胎接近于0.25
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0.27区间的胚胎作为待植入胚胎。
[0013]在本申请的一些实施方式中，所述植入前胚胎为受精后体外发育5天
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7天的胚胎。
[0014]在本申请的一些实施方式中，所述植入前胚胎为处于囊胚期的胚胎。
[0015]在本申请的一些实施方式中进行染色体和DNA甲基化水平检测的样本包括取自所述植入前胚胎的滋养层细胞样本。
[0016]在本申请的一些实施方式中，所述染色体正常包括：染色体数目正常和染色体结构正常，或者染色体属于嵌合体胚胎但嵌合度少于50％。
[0017]在本申请的一些实施方式中，在来自于同一个患者的所述待植入胚胎的数量有多个的条件下，胚胎筛选移植顺序为：
[0018]全基因组DNA甲基化水平在0.25
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0.27区间的胚胎为第一移植顺序；
[0019]全基因组DNA甲基化水平在0.22
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0.24区间的胚胎为第二移植顺序；
[0020]全基因组DNA甲基化水平在0.28
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0.29区间的胚胎为第三移植顺序；
[0021]全基因组DNA甲基化水平在0.19
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0.21区间的胚胎为第四移植顺序；
[0022]全基因组DNA甲基化水平在0.30
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0.33区间的胚胎为第五移植顺序。
[0023]在本申请的一些实施方式中，在同一移植顺序的胚胎的数量有多个的条件下，则按照如下所示的优先筛选顺序从所述多个胚胎中筛选出胚胎作为移植胚胎：
[0024]胚胎的全基因组DNA甲基化水平与0.26相比，差的绝对值最低的胚胎优先移植。
[0025]在本申请的一些实施方式中，检测所述染色体的方法包括胚胎植入前遗传学筛查。
[0026]在本申请的一些实施方式中，所述筛选方法还包括如下步骤：
[0027]根据印记基因控制区域或/和基因启动子区域的甲基化水平状态，来筛选胚胎从而降低出生缺陷比例。
[0028]在本申请的一些实施方式中，检测所述DNA甲基化水平的步骤包括：构建甲基化文库，测序。
[0029]相对于传统技术，本申请具备如下有益效果：
[0030]本申请在植入前胚胎的筛选的过程中，不仅对植入前胚胎的染色体进行检测，还对其DNA甲基化水平进行检测，并根据检测结果筛选染色体正常且具有合适DNA甲基化水平的植入前胚胎，本申请筛选方法同时以染色体信息和表观遗传信息为筛选依据，能够更加全面的反映植入前胚胎的发育质量，筛选得到的植入前胚胎在移植后对应的妊娠率高，相应地出生率高，患病率低，从数量和质量上实现辅助生殖效果的整体提升。
[0031]并且，本申请的筛选方法，直接以植入前胚胎为检测对象，避免了母源基因组的污
染，能够准确的判断胚胎染色体情况以及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括如下步骤：对植入前胚胎的染色体和DNA甲基化水平进行检测，根据所得检测结果从所述植入前胚胎中筛选出染色体正常，且全基因组DNA甲基化水平在0.25
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0.27区间内的胚胎或者全基因组DNA甲基化水平在0.25
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0.27区间外的相对于其他胚胎接近于0.25
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0.27区间的胚胎作为待植入胚胎。2.根据权利要求1所述的植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，所述植入前胚胎为受精后体外发育5天
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7天的胚胎。3.根据权利要求2所述的植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，所述植入前胚胎为处于囊胚期的胚胎。4.根据权利要求1所述的植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，进行染色体和DNA甲基化水平检测的样本包括取自所述植入前胚胎的滋养层细胞样本。5.根据权利要求1所述的植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，所述染色体正常包括：染色体数目正常和染色体结构正常,或者染色体属于嵌合体但嵌合度少于50％。6.根据权利要求1所述的植入前胚胎的筛选方法，其特征在于，在来自于同一个患者的所述待植入胚胎的数量有多个的条件下，胚胎筛选移植顺序为：全基因组DNA甲基化水平在0.25
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘江，陈子江，高媛，姚雪龙，伊丽祉，
申请(专利权)人：广州女娲生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：