一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺制造技术

本发明专利技术提供一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，涉及医学领域。该种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，包括牛胰脏，包括以下步骤：S1.酸提处理：将新鲜的牛胰腺搅碎，加入重量为牛胰腺重量的4

【技术实现步骤摘要】
一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺


[0001]本专利技术涉及医学
，具体为一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺。

技术介绍

[0002]脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)，即Deoxyribonuclease I，最早是由M.Kun itz从胰脏中分离出结晶的，也称为胰脱氧核糖核酸酶或DNaseⅠ，是一种发现于多种细胞和组织的核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5
’
端为磷酸基团、3
’
端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质(其切割速率受组蛋白影响)。最佳的工作范围是pH7
‑
8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNaseI最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
[0003]脱氧核糖核酸酶参与修复受损的DNA，细菌脱氧核糖核酸酶是建立基因工程技术的重要工具。人类重组脱氧核糖核酸酶I以气雾剂的形式给囊性纤维化患者。脱氧核糖核酸酶有多种类型，但它们都有一个共同点，即断裂构成DNA主链的碱基的磷酸键。脱氧核糖核酸外酶从构成DNA分子的碱基链末端切割DNA并向内移动，目前还没普及这方面的技术，因此，本领域技术人员提出一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，解决了现有制造工艺上的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，包括牛胰脏，包括以下步骤：
[0008]S1.酸提处理：将新鲜的牛胰腺搅碎，加入重量为牛胰腺重量的4
‑
6倍的氯化钠溶液以及助滤剂浸渍16
‑
20h，浸渍至上清液蛋白含量为8mg/mL时，过滤取酸提液，氯化钠溶液的浓度：0.85
‑
0.9％；PH＝2.3
‑
3.3；温度16
‑
20℃；
[0009]S2.硫酸铵分级：将酸提液一次进行70％、95％饱和度硫酸铵盐析，过滤后收集盐析物；
[0010]S3.煮沸去杂处理：将盐析物与水混合，于98
‑
102℃内煮沸2
‑
5min，冷却，过滤得到除杂液,并将除杂液与磷酸缓冲液制备成层析液备用,磷酸盐缓冲液的导电率：1.6
‑
2.1ms/cm；PH＝6.0
‑
6.10；
[0011]S4.离子交换柱层析：用磷酸盐缓冲液平衡CM层析柱，然后将所述层析液上样于所述CM层析柱后，先用洗脱液a1进行洗脱，至流出液蛋白含量低于1mg/mL时，再用洗脱液a2进
行洗脱至流出液蛋白含量低于0.5mg/mL，收集含有核糖核酸酶的洗脱液a1和脱氧核糖核酸酶洗脱液a2，得到收集液；
[0012]洗脱液a1：磷酸盐缓冲液和氯化钠混合；
[0013]氯化钠溶液：浓度：0.05mol/L；电导率：6.0
‑
7.0ms/cm；PH＝7.0
‑
7.1，
[0014]洗脱液a2：磷酸盐缓冲液和氯化钠混合；
[0015]氯化钠溶液：浓度：0.2mol/L；电导率：20.0
‑
22.0ms/cm；PH＝7.0
‑
7.1；
[0016]层析液：蛋白含量：8
‑
14mg/mL；导电率：3.0
‑
4.0ms/cm；PH＝6.0
‑
6.10；
[0017]S5.过滤：将收集液经超滤膜浓缩至蛋白含量大于40mg/mL，然后进行冷冻干燥，得到核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶成品；且具体操作步骤为：提取，过滤，浓缩，离心，纯化，冻干。
[0018](三)有益效果
[0019]本专利技术提供了一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺。具备以下有益效果：
[0020]1、本专利技术中，采用组织搅碎、酸浸提取、过滤分离、超滤浓缩、盐析、脱盐浓缩、丙酮沉淀等方法将脱氧核糖核酸酶从牛胰脏中提取；具有极佳的生物医药特性，能够发挥酶解蛋白的优质作用，形成医药中间体的流程化、规模化、系统化的生产加工，工艺技术先进，强调可持续发展，能够广泛应用于生物试剂、疫苗试剂盒的研制以及医疗疾病的防治等多重领域。
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术实施例中，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]实施例一：
[0023]本专利技术实施例提供一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，包括牛胰脏，包括以下步骤：
[0024]S1.酸提处理：将新鲜的牛胰腺搅碎，加入重量为牛胰腺重量的4
‑
6倍的氯化钠溶液以及助滤剂浸渍16
‑
20h，浸渍至上清液蛋白含量为8mg/mL时，过滤取酸提液，氯化钠溶液的浓度：0.85
‑
0.9％；PH＝2.3
‑
3.3；温度16
‑
20℃；
[0025]S2.硫酸铵分级：将酸提液一次进行70％、95％饱和度硫酸铵盐析，过滤后收集盐析物；
[0026]S3.煮沸去杂处理：将盐析物与水混合，于98
‑
102℃内煮沸2
‑
5min，冷却，过滤得到除杂液,并将除杂液与磷酸缓冲液制备成层析液备用,磷酸盐缓冲液的导电率：1.6
‑
2.1ms/cm；PH＝6.0
‑
6.10；
[0027]S4.离子交换柱层析：用磷酸盐缓冲液平衡CM层析柱，然后将所述层析液上样于所述CM层析柱后，先用洗脱液a1进行洗脱，至流出液蛋白含量低于1mg/mL时，再用洗脱液a2进行洗脱至流出液蛋白含量低于0.5mg/mL，收集含有核糖核酸酶的洗脱液a1和脱氧核糖核酸酶洗脱液a2，得到收集液；
[0028]洗脱液a1：磷酸盐缓冲液和氯化钠混合；
[0029]氯化钠溶液：浓度：0.05mol/L；电导率：6.0
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7.0ms/cm；PH＝7.0
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7.1，
[0030]洗脱液a2：磷酸盐缓冲液和氯化钠混合；
[0031]氯化钠溶液：浓度：0.2mol/L；电导率：20.0
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22.0ms/cm；PH＝7.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱氧核糖核酸酶的生产工艺，包括牛胰脏，其特征在于：包括以下步骤：S1.酸提处理：将新鲜的牛胰腺搅碎，加入重量为牛胰腺重量的4
‑
6倍的氯化钠溶液以及助滤剂浸渍16
‑
20h，浸渍至上清液蛋白含量为8mg/mL时，过滤取酸提液，氯化钠溶液的浓度：0.85
‑
0.9％；PH＝2.3
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3.3；温度16
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20℃；S2.硫酸铵分级：将酸提液一次进行70％、95％饱和度硫酸铵盐析，过滤后收集盐析物；S3.煮沸去杂处理：将盐析物与水混合，于98
‑
102℃内煮沸2
‑
5min，冷却，过滤得到除杂液,并将除杂液与磷酸缓冲液制备成层析液备用,磷酸盐缓冲液的导电率：1.6
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2.1ms/cm；PH＝6.0
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6.10；S4.离子交换柱层析：用磷酸盐缓冲液平衡CM层析柱，然后将所述层析液上样于所述CM层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：扎西，韩阳，韩志凯，
申请(专利权)人：北京佰尔瑞森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：