靶向miR-181a启动子的saRNA及其在制备治疗CML药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了靶向miR

【技术实现步骤摘要】
靶向miR
‑
181a启动子的saRNA及其在制备治疗CML药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物药物领域，具体涉及靶向miR
‑
181a启动子的saRNA及其在制备治疗慢性粒细胞白血病(CML)药物中的应用。

技术介绍

[0002]慢性粒细胞白血病是一种血液系统恶性肿瘤，BCR
‑
ABL1融合蛋白是慢性粒细胞白血病发病机制中的核心角色，导致造血细胞克隆性扩增。
[0003]在慢性粒细胞白血病(CML)的治疗中，患者容易出现伊马替尼耐药情况，给临床治疗带来挑战。
[0004]依据ABL1突变与否，CML患者的耐药性可分为依赖于BCR
‑
ABL耐药和不依赖于BCR
‑
ABL耐药两种情况。BCR
‑
ABL依赖性耐药的原因可能包括：(1) BCR
‑
ABL1中的ABL1发生了突变，最常见是T315I；(2)BCR
‑
ABL1过表达。
[0005]在第二代和第三代酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物上市后，这种依赖于 BCR
‑
ABL1的耐药CML的临床治疗已经取得了很好的效果。然而，在不依赖于 BCR
‑
ABL1的耐药CML治疗中，由于发病原因复杂、多样，临床治疗没有行之有效统一的治疗方案，因而这种耐药症状的临床挑战性更大。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供靶向miR
‑
181a启动子的saRNA及其在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
[0007]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0008]靶向miR
‑
181a启动子的saRNA，为saRNA1、saRNA2、saRNA3，其序列如下所示：
[0009]saRNA1：
[0010]sense:5
’‑
GGAAUAUGAUGAUAAUUUA dTdT
‑3’
[0011]antisense:5
’‑
UAAAUUAUCAUCAUAUUCC dTdT
‑3’
；
[0012]saRNA2：
[0013]sense:5
’‑
GGGCUGUAAUUUAGUUCAA dTdT
‑3’
[0014]antisense:5
’‑
UUGAACUAAAUUACAGCCC dTdT
‑3’
；
[0015]saRNA3：
[0016]sense:5
’‑
GGUAGUUUACAGCCUCUAA dTdT
‑3’
[0017]antisense:5
’‑
UUAGAGGCUGUAAACUACC dTdT
‑3’
。
[0018]上述靶向miR
‑
181a启动子的saRNA在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用；
[0019]所述的慢性粒细胞白血病包括对伊马替尼敏感的和对伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病；
[0020]所述对伊马替尼敏感的慢性粒细胞白血病尤其指K562和KCL22细胞株；
[0021]所述对伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病包括依赖和非依赖于BCR
‑
ABL1 的耐药性慢性粒细胞白血病；
[0022]所述非依赖于BCR
‑
ABL1的耐药性慢性粒细胞白血病是指不存在以下任一种突变的伊马替尼耐药性细胞株：T315I、E255K、E255V、G250E、Q252H、Y253H；
[0023]所述的伊马替尼耐药性细胞株尤其指K562
‑
IMR和KCL22
‑
IMR；
[0024]所述的药物还含有其他活性成分和辅料(载体)；
[0025]所述的辅料(载体)优选缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂等；
[0026]所述药物的剂型为气雾剂、片剂、胶囊剂、滴丸、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质剂、透皮剂、口含剂、栓剂或冻干粉针剂等。
[0027]在靶向miR
‑
181a启动子的saRNA作用时，在相同浓度的情况下，与 miR
‑
181a mimic相比，saRNA的作用持续时间更长，也更能有效地抑制CML细胞的生长。RNA激活的单次转染saRNA后的效果延长。RNA激活能够激活内源性基因。在肿瘤与恶性疾病当中，saRNA有望开发新的靶标药物。根据规则设计的saRNA能够增强肿瘤抑制基因的表达，恢复基因的天然功能。小核酸药物通常是二维结构，其本身不编码蛋白质，相较于蛋白靶标药物有更大的适用性和多样性。saRNA可以加速适用药物的开发，为更多的恶性疾病或者罕见病提供可能的治疗渠道和治愈希望。
[0028]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0029]本专利技术靶向miR
‑
181a启动子的saRNAs，能提升内源性原始miR
‑
181a (pri
‑
miR
‑
181a)的表达水平，pri
‑
miR
‑
181a比miR
‑
181a mimic有更强的抑制效应。
附图说明
[0030]图1是K562细胞的增殖率。
[0031]图2是转染saRNA1
‑
3 72h后K562细胞中miR
‑
181a的表达水平。
[0032]图3是转染saRNA3 72h后K562细胞中miR
‑
181a靶基因PPFIA1的蛋白表达水平。
[0033]图4是saRNA3和miR
‑
181a对K562细胞的增殖抑制率。
[0034]图5是K562细胞的克隆形成及统计。
[0035]图6是K562
‑
IMR和KCL22
‑
IMR的SNP测序结果；其中，A：K562
‑
IMR； B：KCL22
‑
IMR。
[0036]图7是saRNA
‑
3对CML耐药细胞的增殖抑制率；其中，A：K562
‑
IMR；B： KCL22
‑
IMR。
[0037]图8是转染saRNA3后CML耐药细胞的miR
‑
181a的表达水平和PPFIA1 的蛋白表达水平。
[0038]图9是CML耐药细胞的克隆形成及统计。
[0039]图10是K562
‑
IMR/luciferas细胞稳定表达荧光素酶其中，A：发光强度与细胞数量的对应关系；B：成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向miR
‑
181a启动子的saRNA，其特征在于：为saRNA1、saRNA2、saRNA3，其序列如下所示：saRNA1：sense:5
’‑
GGAAUAUGAUGAUAAUUUA dTdT
‑3’
antisense:5
’‑
UAAAUUAUCAUCAUAUUCC dTdT
‑3’
；saRNA2：sense:5
’‑
GGGCUGUAAUUUAGUUCAA dTdT
‑3’
antisense:5
’‑
UUGAACUAAAUUACAGCCC dTdT
‑3’
；saRNA3：sense:5
’‑
GGUAGUUUACAGCCUCUAA dTdT
‑3’
antisense:5
’‑
UUAGAGGCUGUAAACUACC dTdT
‑3’
。2.权利要求1所述靶向miR
‑
181a启动子的saRNA在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的慢性粒细胞白...

【专利技术属性】
技术研发人员：费嘉，李楚婷，苏睿，王秀元，
申请(专利权)人：广州安镝声生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：