用于治疗和/或预防暴发性肝病的肝干细胞样细胞制造技术

本发明专利技术涉及一种包含肝干细胞样细胞的细胞群，以及其用于治疗和/或预防暴发性肝病的治疗用途。根据本发明专利技术的肝干细胞样细胞可由多能干细胞安全且可重复地生成。此外，尽管根据本发明专利技术的肝干细胞样细胞由于缺乏白蛋白表达标志物(ALB

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗和/或预防暴发性肝病的肝干细胞样细胞
专利

[0001]本专利技术涉及一种包含肝干细胞样细胞的细胞群，以及其用于治疗和/或预防暴发性肝病的治疗用途。具体而言，不表达ALB标志物(ALB
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)而表达AFP标志物(AFP+)的肝干细胞样细胞，例如从多能干细胞(pSC)中获得的，可注射到患有暴发性肝病(例如急性肝衰竭(acute liver failure，ALF)或急性慢性肝衰竭(acute chronic liver failure，ACLF))的肝脏中，并且可促进肝再生。
[0002]专利技术背景
[0003]肝脏疾病影响着全世界数百万人。在肝脏疾病中，暴发性肝脏疾病的特征在于肝脏生理功能的快速严重的功能障碍，并且包括例如急性肝衰竭(ALF)和急性慢性肝衰竭(ACLF)的疾病。ACLF本身包含以肝衰竭急性发作为特征的肝病，这是与慢性肝病相关的进行性肝退化的结果，例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、酒精性肝炎(alcoholic hepatitis)、病毒性肝炎(viral
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induced hepatitis)、隐源性肝病(cryptogenic liver disease)、恶性肝病如肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)和胆管癌(cholangiocarcinoma)、癌(carcinoma)、自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis)、血管性肝病(vascular liver diseases)如布加综合征(Budd
‑<br/>Chiari syndrome)、胆汁淤积肝病(cholestatic liver diseases)、遗传性代谢性肝病(inherited metabolic liver diseases)，如威尔逊病(Wilson
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s disease)和尿素循环障碍(urea cycle defects)。换言之，暴发性肝病是指使用器官分配评分系统(例如终末期肝病模型(Model for End
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stage Liver Disease，MELD))(Martin等人，2014)时优先考虑肝移植的任何疾病。
[0004]肝移植目前被认为是治疗暴发性和/或严重代谢性肝病患者的黄金标准。在西方国家，数以万计的患者正在等待肝移植。从1968年至2015年，欧洲进行了大约130,000例肝移植(欧洲肝移植登记处(European Liver Transplant Registry))。然而，由于器官供体短缺，有10％至20％的患者在等待肝移植时因未接受移植而死亡。
[0005]ALF和ACLF是短期危及生命的疾病和罕见的疾病，其中肝脏的快速恶化导致没有(ALF)或患有(ACLF)已知的预先存在的肝病的个体的精神状态和凝血功能改变。ALF和ACLF的主要临床体征是皮肤和眼球的快速发作性黄疸、腹部疼痛、恶心、呕吐、虚弱和精神状态的改变，所述精神状态的改变可以从轻度意识错乱起始，并进展到昏迷和肝外多器官衰竭。ALF和ACLF的生化表现通常包括肝脏生化值异常和凝血功能障碍。与临床实践一致，并且如上所述，目前对严重形式的ALF和ACLF的治疗选择是原位肝移植(OLT)。
[0006]然而，由于供体短缺，OLT受到严重限制。迄今为止，肝细胞移植(HT)已被视为OLT的替代方案，并且已发现可以改善患者的肝功能。HT已在全球范围内得到证实和发布，显示该技术的安全性和初步有效性(Dhawan等人，2010；Hansel等人，2014；Dhawan等人，2019)。然而，获得大量功能性并具有可重复特征的肝细胞是困难的。此外，接受HT的患者也可使用免疫抑制剂治疗，以限制移植排斥反应。
[0007]因此，迫切需要探索包括干细胞在内的新细胞类型的体外扩增并随后分化为肝细胞的潜力。说明性地，定形内胚层干细胞(definitive endoderm stem cell)、人类胚胎干
细胞(human embryonic stem cell，hESC)、人类诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell，hiPSC)和多能干细胞例如间充质干细胞，已被用于生成肝细胞或肝细胞样细胞(HCL)(Pareja等人，2017)。
[0008]例如，WO2016043666公开了分化定形内胚层干细胞以获得肝细胞样细胞(HLC)的方法。
[0009]事实上，理论上，人类胚胎干细胞(hESC)代表了用于肝脏再生的功能性肝细胞的无限来源。人类胚胎干细胞(hESC)在体外可有效地分化为肝细胞样细胞(hepatocytes
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like cells，HLC)，尽管中间细胞可能显示不成熟的基因表达谱(参见Cameron等人，2015)。这些HLC与成人肝脏中发现的细胞具有许多共同的功能和基因表达谱(Payne等人，2011)。在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝衰竭模型中，研究人员可示出，新生儿HLC体内能够使患病的肝脏进行重新填充和再生，而不诱发肿瘤。这些数据提供了令人信服的概念验证，即hESC衍生的HLC可能是肝移植治疗肝病的替代有效疗法(Tolosa等人，2015)。
[0010]本着同样的精神，Roelandt等人(2010)试图通过分化培养基为现有技术提供源自hESC的肝细胞。定形内胚层细胞向肝细胞的分化需要执行这样的方案，所述方案包括使用各种激活剂和/或生理信号通路抑制剂以及在各种生长因子的存在下进行精确序列诱导。肝细胞样细胞在20天内产生，并进一步以其解毒能力为特征，因为这些细胞表达适合成熟肝细胞的标志物，例如白蛋白和Cyp450。Siller等人(2015)进一步提供了一种在无生长因子的培养基中将多能干细胞分化为肝细胞的方法。
[0011]此外，WO2019055345公开了用于再生医学的从人类诱导多能干细胞(hiPSC)生成肝细胞样细胞(HLC)的方法。HLC能够进行铵代谢并具有解毒特性，因为它们表达白蛋白标志物(ALB+)，并且可用于治疗暴发性肝衰竭患者。
[0012]此外，Takayama等人(2013)提供了最先进的hESC衍生的和hiPSC衍生的成肝细胞样细胞(hepatoblast
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like cells HBC)。作者表明，早期传代的HBC(P0；ALB
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细胞)和晚期传代的HBC(P10；ALB+细胞)都可以移植到肝脏中。通过测量受体小鼠中分泌的人类ALB水平来评估移植后hESC衍生的HBC P0或HBC P10的肝细胞功能。Takayama等人观察到，与HBC P0相比，移植HBC P10后ALB表达水平更高，HBC P0仅产生非常弱的ALB表达。总之，结果表明利用HBC P10(ALB+细胞)进行肝移植，因为与ALB相关的解毒特性是最先进的。与这些观察一致，Takayama等人(2017)后来发表了一项使用晚期传代的HBC(P10)的研究，这些细胞专门用作肝治疗中细胞移植的首本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞群，特别是分离的细胞群，所述细胞群包含至少5％的表达甲胎蛋白标志物(AFP+)而不表达白蛋白标志物(ALB
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)的肝干细胞样细胞，或所述细胞群的提取物。2.根据权利要求1所述的细胞群，其中所述肝干细胞样细胞进一步表达T
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Box转录因子3标志物(TBX3+)和/或肝细胞核因子4α标志物(HNF4A+)，优选表达T
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Box转录因子3标志物(TBX3+)和肝细胞核因子4α标志物(HNF4A+)。3.根据权利要求1或2所述的细胞群，其中所述肝干细胞样细胞是冷冻保存的。4.一种颗粒，特别是球状体，所述颗粒包含根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物。5.一种悬浮液，所述悬浮液包含根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物。6.一种药物组合物，所述药物组合物包含(i)根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物，和/或至少一种根据权利要求4所述的颗粒，和/或根据权利要求5所述的悬浮液，和(ii)药学上可接受的载体。7.一种医疗装置，所述医疗装置包含根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物，和/或至少一种根据权利要求4所述的颗粒，和/或根据权利要求5所述的悬浮液，和/或根据权利要求6所述的药物组合物。8.一种非人类动物模型，所述非人类动物模型包含异源细胞群或细胞群的提取物，所述异源细胞群包含根据权利要求1至3中任一项所述的肝干细胞样细胞。9.如权利要求1至3中任一项所限定的肝干细胞样细胞或其提取物、或根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物、或根据权利要求4所述的颗粒、或根据权利要求5所述的悬浮液、或根据权利要求6所述的药物组合物用作药物。10.如权利要求1至3中任一项所限定的肝干细胞样细胞或其提取物、或根据权利要求1至3中任一项所述的包含肝干细胞样细胞的细胞群或细胞群的提取物、或根据权利要求4所述的颗粒、或根据权利要求5所述的悬浮液、或根据权利要求6所述的药物组合物、或根据权利要求7所述的医疗装置用于预防和/或治疗暴发性肝病的用途。11.如权利要求1至3中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：南特大学国家健康及医学研究院INSERM，
类型：发明
国别省市：