用于疏松细胞的过程记录载玻片及其使用方法技术

本申请涉及用于疏松细胞的过程记录载玻片及其使用方法。单区域到多区域载玻片，其中每个区域包含一到四个对照靶标，适用于通过特殊染色、IHC或CC等进行处理。每个区域可以通过疏水屏障界定以形成孔。载玻片具有适合捕获疏松细胞和细胞碎片的粘合剂涂层。松细胞和细胞碎片的粘合剂涂层。松细胞和细胞碎片的粘合剂涂层。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于疏松细胞的过程记录载玻片及其使用方法
[0001]优先权和交叉引用
[0002]本申请要求2019年12月31日提交的美国临时申请第62/955,501号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。


[0003]本申请涉及用于疏松细胞的过程记录载玻片及其使用方法。

技术介绍

[0004]目前有许多种载玻片包含由疏水屏障界定的样品孔。这些载玻片中的一些已经开发和制造出了许多孔，例如100个孔。然而，这些载玻片都没有包含对照靶标以提供用于处理样品的第一染色试剂和第二染色试剂的定量测量。
[0005]测定抗体试剂浓度的方法包括测定稀释样品在280nm处的吸光度。然后生成分析报告以给出包装小瓶的浓度，通常在0.8至1.2mg/ml之间。然而，吸光度测量假定所有抗体蛋白都是完整的。如果铰链以一定百分比断裂，但Fab和Fc结构域仍然存在，则测量值保持不变。使用抗体时，在取出等分试样之前，将抗体的温度提高到25℃。当不再需要进一步处理载玻片时，将小瓶送回在4℃储存。所有的蛋白质都会随着年龄的增长而分解，从铰链处的失效开始。为了解决活性抗体的这种衰减，实验室方案只是在购买后6个月后丢弃小瓶。可能是降解没有严重到影响染色组织切片。然而，将小瓶放在外面过夜会显着缩短抗体活力的寿命。由于抗体费用的原因，大多数时候实验室只是忽略了这个缺陷并希望获得最好的结果。只有在使用已知的细胞对照时，这种早期失效才会显现出来。

技术实现思路

[0006]本申请的一些实施例的载玻片通过在每个样品孔内包含对照靶标来解决这种情况。对照靶标的一个功能是量化所应用的第一抗体的功能浓度。
[0007]对于基于疏松细胞的载玻片，没有共同驻留的过程质量控制(PQC)解决方案。疏松细胞应用包括巴氏涂片、血液涂片和用于各种应用的多孔/多患者载玻片。最常见的是，多患者载玻片用于巴氏涂片的体积处理。
[0008]通过让细胞有足够的时间沉至载玻片表面，可以从应用的浆液中捕获疏松细胞。载玻片包含粘合剂涂层，当细胞沉淀下来时，该涂层会共价捕获细胞。在一些实施例中，在单层粘合剂上使用保形粘合剂以确保细胞和粘合剂之间的结合密度更高。Erie Gold Plus就是这种保形粘合剂载玻片的一个例子。尽管在某些情况下，在捕获性能方面，优质的氨基硅烷载玻片粘合剂就足够了。
[0009]可以通过使用疏水涂料(例如环氧树脂或聚氨酯)印刷图案来制造带有样品孔的载玻片。几种印刷工艺是实用的并且可以包括丝网印刷、转印、喷墨或滚珠。此类载玻片由许多供应商制造。印刷过程中的一个因素是不用加热来固化油漆，因为热量通常会降低粘合剂的亲水性。
[0010]在某些应用中，使用疏水屏障是不可行的。一个例子是血液涂片，其在涂片过程容易将涂片特定区域中的多种血细胞类型分离。涂片通常是通过从楔子的背面拉动样品滴而形成的。速度和楔角与血液粘度有关。PQC靶标可作为基准标记放置在载玻片上，以告知用户应将患者样品施加到何处。
[0011]单个样品载玻片可能会或可能不会使用疏水屏障。在经典形式中，可以在没有任何疏水屏障环的情况下制作血液涂片和巴氏涂片载玻片。自动巴氏涂片机将患者样品处理成可控的细胞密度浆液或滤盘上的湿层。将浆液施加在疏水屏障环内，以沉降一段时间，从而去除多余的液体。其中一个例子是未发布的Veracell巴氏涂片。滤盘上的湿层被转印到载玻片上，因此不需要屏障环。ThinPrep载玻片就是一个例子。
[0012]本申请的一些实施例在此结合了PRS对照靶标作为没有疏水屏障的载玻片的基准标记。作为基准标记，对照靶标点将位于工作区域的四个角落，名义上定义为1.5cm
×
1.5cm区域。作为一般规则，不使用疏水屏障的载玻片只能处理一个患者的生物材料样品。对照靶标将位于1.5cm
×
1.5cm区域内的边缘。虽然图1A包括1.5cm
×
1.5cm区域，但本领域普通技术人员将理解不同尺寸的区域都在本公开的范围内。
[0013]包含用于容纳样品的疏水屏障环的载玻片很少超过10个孔，每个孔包含容纳区域。将样品施加在孔的中心，并将孔填充到几乎溢出的体积。当载体缓冲剂蒸发时(尤其是在加热加速的情况下)，细胞往往会从孔的边缘脱落，并会在中心堆积。对照靶标将分布在孔的工作外围的四个等距位置。染色试剂：用于IHC应用的抗体蛋白沉淀速度比在沉积物边缘往往具有最高浓度的细胞更快。因此，细胞浆液通常会避免在靶标所在的位置沉降。然而，染色试剂将有足够的时间被对照靶标捕获。与任何染色过程一样，一旦生物材料变湿，生物材料通常会保持湿润，直到染色完成。
[0014]染色过程仅限于支持两种第一抗体，其中一种抗体是基于小鼠的抗体，另一种抗体是兔宿主抗体。在单一的第一抗体配置中，对照靶标将捕获小鼠或兔宿主抗体。有许多配置选项可以应用于对照靶标：
[0015]·
单一的第一抗体(基于小鼠或兔)的4点梯度密度系列；
[0016]·
一对用于小鼠抗体另一对用于兔抗体的2点梯度密度系列；
[0017]·
4靶点，可以是小鼠抗体、兔抗体、小鼠第二抗体和小鼠第二抗体；或者
[0018]·
以上任意组合。
[0019]本申请的一些实施例涉及载玻片，该载玻片包括被配置为容纳包含疏松细胞的样品的检测区域，以及对照区域，所述对照区域被配置为：
[0020]指示免疫组化或细胞化学检测过程中的中间步骤的误差和性能度量，并为分别定性或定量确定染色疏松细胞的抗原密度和颜色密度或染色细胞表面和内部的颜色密度提供参考，
[0021]其中所述检测区域包括至少一个区域，
[0022]所述对照区域围绕所述至少一个区域，并且
[0023]所述对照区域包括至少一个对照靶标用于提供参考。
[0024]在至少一个实施例中，还包括构造成与部分结合的粘合剂涂层，其中所述粘合剂涂层包含至少一种选自以下组的端基：
‑
ROH、
‑
R(C＝O)OH、
‑
RNH2、
‑
R(C＝O)NH2和
‑
RNH3。
[0025]在至少一个实施例中，检测区域的至少一个孔中的每个孔为圆形、正方形或长方
形。
[0026]在至少一个实施例中，对照区域在检测区域的区域角落处。
[0027]在至少一个实施例中，对照区域在检测区域的区域内。
[0028]在至少一个实施例中，对照区域在检测区域的区域之外。
[0029]在至少一个实施例中，对照区域包括至少一个对照点或对照点阵列。
[0030]在至少一个实施例中，对照靶标被构造成捕获小鼠、兔或小鼠+兔宿主的第一抗体；小鼠、兔或小鼠+兔第二抗体；或苏木精和伊红染色剂。
[0031]在至少一个实施例中，第一抗体在其FcγRI位点被蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或附着于载体蛋白或包括诸如胶乳的材料的珠粒的FcγRI结合肽捕获。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.载玻片，包括：检测区域，其被配置为容纳包含疏松细胞的样品，其中所述检测区域包括至少一个区域，以及对照区域，其围绕所述至少一个区域，其中所述对照区域包括至少一个对照靶标，且所述对照区域被配置为：指示免疫组化或细胞化学检测过程中的中间步骤的误差和性能度量，并且为分别定性或定量确定染色疏松细胞的抗原密度和颜色密度或染色细胞表面和内部的颜色密度提供参考。2.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述检测区域的所述至少一个区域由疏水屏障界定以形成孔。3.根据权利要求1所述的载玻片，还包括构造成与部分结合的粘合剂涂层，其中所述粘合剂涂层包含至少一种选自以下组的端基：
‑
ROH、
‑
R(C＝O)OH、
‑
RNH2、
‑
R(C＝O)NH2和
‑
RNH3。4.根据权利要求2所述的载玻片，其中所述检测区域的孔为圆形、正方形或长方形。5.根据权利要求2所述的载玻片，其中所述对照区域在所述检测区域的所述至少一个区域的角落处。6.根据权利要求2所述的载玻片，其中所述对照区域在所述检测区域的所述孔内。7.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述对照区域在所述检测区域的区域之外。8.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述对照区域包括至少一个对照点或对照条。9.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述对照区域由部分疏水屏障或完全疏水屏障界定。10.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述检测区域的所述至少一个孔包含所述样品。11.根据权利要求1所述的载玻片，还包括疏水材料涂层，其中所述疏水材料是环氧树脂或聚氨酯。12.根据权利要求1所述的载玻片，其中所述至少一个对照靶标包括第一靶标、第一抗体、第二靶标、第二抗体、成像参考、2D...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗雷德里克，
申请(专利权)人：深圳市诺高实验器材有限公司，
类型：发明
国别省市：