一种带有固定化酶反应器的细胞离心管制造技术

本实用新型专利技术公开了一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，包括：离心管体；所述离心管体内部设有固定化酶反应器；所述固定化酶反应器包括酶反应管、固定化酶反应柱和细胞过滤膜；所述酶反应管插设于所述离心管体内；所述固定化酶反应柱设置于酶反应管底部；所述固定化酶反应柱内部填充有固定化酶颗粒；所述固定化酶反应柱的顶部和底部均设有所述细胞过滤膜。通过在离心管体内部设置固定化酶反应器，在细胞复苏过程中离心的同时，借助固定化酶反应器里的酶促生化反应，能够及时去除复苏后培养基和细胞里残留的二甲基亚砜，从而减少二甲基亚砜对干细胞的毒性作用。对干细胞的毒性作用。对干细胞的毒性作用。

【技术实现步骤摘要】
一种带有固定化酶反应器的细胞离心管


[0001]本技术涉及医学细胞生物学实验
，更具体地说是涉及一种带有固定化酶反应器的细胞离心管。

技术介绍

[0002]干细胞是一类具有自我更新复制以及多向分化潜能的原始细胞群体，近年来在细胞治疗、组织工程、美容抗衰等医学
越来越受到关注。细胞的冻存和复苏是干细胞扩增传代过程中最常见的实验技术之一。二甲基亚砜是最常用的细胞冷冻保护剂，可有效减少冻存过程中冰晶对细胞的损伤，目前通常是使用10％的二甲基亚砜作为细胞冷冻保护剂，进行骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞等的冻存。但干细胞对二甲基亚砜敏感，细胞复苏过程中冻存液里和复苏后培养液残留的二甲基亚砜对干细胞有一定的毒性作用，会降低细胞复苏后活性，影响冻存后干细胞的功能。临床使用细胞治疗过程中，经二甲基亚砜冻存后复苏的细胞可能会引发广泛的身体不适。目前一般通过细胞复苏后立刻离心的方法去除冻存液中的二甲基亚砜，但细胞离心过程会延长冻存液中高浓度二甲基亚砜对细胞的损伤，且细胞内会有二甲基亚砜残余。
[0003]因此，如何提供一种能够及时去除复苏后培养基和细胞里残留的二甲基亚砜，减少二甲基亚砜对干细胞毒性作用的带有固定化酶反应器的细胞离心管是本领域亟需解决的技术问题之一。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本技术提供了一种带有固定化酶反应器的细胞离心管。目的就是为了解决现有技术中存在的问题。
[0005]为解决上述技术问题，本技术采取了如下技术方案：
[0006]一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，包括：离心管体；所述离心管体内部设有固定化酶反应器；所述固定化酶反应器包括酶反应管、固定化酶反应柱和细胞过滤膜；所述酶反应管插设于所述离心管体内；所述固定化酶反应柱设置于酶反应管底部；所述固定化酶反应柱内部填充有固定化酶颗粒；所述固定化酶反应柱的顶部和底部均设有所述细胞过滤膜。
[0007]优选地，所述离心管体的外径为2.2
‑
2.3厘米，体积为15毫升。
[0008]优选地，所述离心管体顶部设有管盖。
[0009]优选地，所述管盖的外径为2.3
‑
2.4厘米。
[0010]优选地，所述酶反应管的外径为2.0
‑
2.1厘米，体积为10毫升。
[0011]优选地，所述细胞过滤膜的孔径为100微米。
[0012]优选地，所述固定化酶反应柱为环形圆柱体，其圆环外径为1.8
‑
1.9厘米，内径为1.5
‑
1.6厘米，高度为0.5厘米。
[0013]本技术相对于现有技术取得了以下技术效果：
[0014]1)本技术通过在离心管体内部设置固定化酶反应器，在细胞复苏过程中离心的同时，借助固定化酶反应器里的酶促生化反应，能够及时去除复苏后培养基和细胞里残留的二甲基亚砜，从而减少二甲基亚砜对干细胞的毒性作用；
[0015]2)本技术具有适用性强、制造工艺简单等优点，适合于大规模生产。
附图说明
[0016]图1为本技术一种带有固定化酶反应器的细胞离心管的结构示意图；
[0017]图中：1、离心管体；2、固定化酶反应器；21、酶反应管；22、固定化酶反应柱；23、细胞过滤膜；3、固定化酶颗粒；4、管盖。
具体实施方式
[0018]下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
[0019]实施例
[0020]参照图1所示本技术公开了一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，包括：离心管体1；离心管体1内部设有固定化酶反应器2；固定化酶反应器2包括酶反应管21、固定化酶反应柱22和细胞过滤膜23；酶反应管21插设于离心管体1内；固定化酶反应柱22设置于酶反应管21底部；固定化酶反应柱22内部填充有固定化酶颗粒3；固定化酶反应柱22的顶部和底部均设有细胞过滤膜23。
[0021]在本实施例中，离心管体1采用聚苯乙烯材料，离心管体1的外径为2.2
‑
2.3厘米，体积为15毫升。
[0022]在本实施例中，离心管体1顶部设有管盖4。
[0023]在本实施例中，管盖4采用聚苯乙烯材料，管盖4的外径为2.3
‑
2.4厘米。
[0024]在本实施例中，酶反应管21的外径为2.0
‑
2.1厘米，体积为10毫升，酶反应管21采用聚苯乙烯材料。
[0025]在本实施例中，细胞过滤膜23的孔径为100微米。
[0026]在本实施例中，细胞过滤膜23采用尼龙滤膜。
[0027]在本实施例中，固定化酶反应柱22为环形圆柱体，其圆环外径为1.8
‑
1.9厘米，内径为1.5
‑
1.6厘米，高度为0.5厘米。
[0028]在本实施例中，固定化酶反应柱采用聚苯乙烯材料。
[0029]在本实施例中，固定化酶颗粒3将人源性或鼠源性蛋氨酸亚砜还原酶A，通过先吸附后交联，将其固定于大孔聚苯乙烯吸附树脂颗粒上。
[0030]本技术的工作过程如下：
[0031]向图1所示离心管体1内的酶反应管21中加入10毫升多能干细胞培养基，从液氮罐中取出冻存的干细胞，在37摄氏度水浴锅中快速解冻细胞，直至细胞完全融化，无菌条件下将细胞悬液逐滴加入酶反应管21的培养基里，室温600g离心10分钟；取出酶反应管21，吸弃离心管体1中培养基上清，使用5毫升多能干细胞培养基重悬细胞沉淀，转移到培养瓶或培
养板中。
[0032]固定化酶颗粒的制备方法：称取无水碳酸钠63.6克，碳酸氢钠33.6克，加蒸馏水溶解并定容到1000毫升，配置得到0.1mol/L、PH＝9.6的碳酸盐缓冲液，置于4℃保存。按碳酸盐缓冲液体积每100毫升加入0.001g重组人源性蛋氨酸亚砜还原酶A蛋白，配制0.001％的蛋氨酸亚砜还原酶A溶液，过滤除菌后
‑
80摄氏度低温保存。称取0.125克XAD
‑
1180型大孔吸附树脂，加蒸馏水溶解并定容至100毫升，加入10毫升0.001％的蛋氨酸亚砜还原酶A溶液，30摄氏度在恒温培养箱中振荡反应12小时，3000g离心5分钟，去除上清，用100毫升PH＝7.15的碳酸盐缓冲液重悬固定化酶沉淀，加入0.1克戊二醛，混匀，交联反应1小时后，3000g离心5分钟，去除上清，用100毫升PH＝7.15的碳酸盐缓冲液重悬固定化酶沉淀，3000g离心5分钟，去除上清。加入丙酮重悬并离心固定化酶三次，真空干燥8小时后，置于负20摄氏度低温保存。
[0033]以上所述，仅是本技术较佳实施例而已，并非对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，其特征在于，包括：离心管体(1)；所述离心管体(1)内部设有固定化酶反应器(2)；所述固定化酶反应器(2)包括酶反应管(21)、固定化酶反应柱(22)和细胞过滤膜(23)；所述酶反应管(21)插设于所述离心管体(1)内；所述固定化酶反应柱(22)设置于酶反应管(21)底部；所述固定化酶反应柱(22)内部填充有固定化酶颗粒(3)；所述固定化酶反应柱(22)的顶部和底部均设有所述细胞过滤膜(23)。2.根据权利要求1所述的一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，其特征在于，所述离心管体(1)的外径为2.2
‑
2.3厘米，体积为15毫升。3.根据权利要求1所述的一种带有固定化酶反应器的细胞离心管，其特征在于，所述离心管体(1)顶部...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆名恋，高雪梅，
申请(专利权)人：武汉市中西医结合医院武汉市第一医院，
类型：新型
国别省市：