细胞鉴定试剂盒和使用方法及其在鉴定肥大细胞中的应用技术

本发明专利技术提供了一种细胞鉴定试剂盒和使用方法及其在鉴定肥大细胞中的应用，涉及细胞鉴定技术领域。该细胞鉴定试剂盒包括CD117抗体偶联磁微粒、CD16抗体偶联磁微粒和FcεRIα抗体偶联磁微粒，以及FcR阻断剂和洗脱液。该细胞鉴定试剂盒可用于鉴定细胞表面CD117、FcεRIα和CD16中的一种或多种，可获得纯度至少为90％的目标细胞。将其应用于鉴定细胞是否为CD117

【技术实现步骤摘要】
细胞鉴定试剂盒和使用方法及其在鉴定肥大细胞中的应用


[0001]本专利技术涉及细胞鉴定
，尤其是涉及一种细胞鉴定试剂盒和使用方法及其在鉴定肥大细胞中的应用。

技术介绍

[0002]先天免疫细胞是第一个遇到“入侵者”的，包括病原体和过敏原，是第一个发现、响应并调节或协调对这些入“侵者”的整体免疫反应的细胞。因此，任何控制体内特异免疫细胞中这些反应的方法都会影响整体免疫反应。与其他可能在先天应答收缩期开始死亡的先天免疫细胞类型相比，肥大细胞(Mast Cells，MCs)除了具有上述特征外，还具有在激活后较长时间存活的能力。肥大细胞广泛分布于皮肤及内脏粘膜下的微血管周围。分泌多种细胞因子，参与免疫调节(TB细胞(免疫细胞)，APC细胞(抗原呈递细胞，Antigen
‑
presenting cells)活化)。表达MHC(主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex)分子，B7分子，具有APC功能，也表达大量的IgE Fc受体，释放过敏介质。因此，MCs作为引起过敏性疾病中过敏反应的关键效应细胞，被认为是过敏性疾病强有力的诊断和治疗靶点。
[0003]目前，肥大细胞的鉴定方法，主要依靠：一是显微镜下观察，肥大细胞较一般淋巴细胞体积大、呈半透明圆形，整体形状饱满；二是进行肥大细胞脱颗粒验证实验，进行功能判定。目前缺少针对肥大细胞表面标志物的特异性、综合性的全面鉴定手段。采用上述肥大细胞鉴定方法得到的肥大细胞的脱颗粒率较低，故现需要一种肥大细胞鉴定产品来解决现有肥大细胞脱颗粒率较低的问题。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种细胞鉴定试剂盒，该细胞鉴定试剂盒可用于鉴定细胞表面CD117、FcεRIα和CD16中的一种或多种分子特征，可获得纯度至少为90％的目标细胞。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种采用上述细胞鉴定试剂盒鉴定细胞的使用方法。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供一种上述细胞鉴定试剂盒或上述鉴定细胞的方法在鉴定细胞是否为CD117
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FcεRIα
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CD16
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肥大细胞中的应用，该鉴定方法能够有效的鉴定出并收集CD117
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FcεRIα
+
CD16
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肥大细胞，同时提高肥大细胞的脱颗粒能力，缓解了现有技术中存在的肥大细胞鉴定方法得到的肥大细胞的脱颗粒率较低的技术问题。
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0009]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种细胞鉴定试剂盒，包括抗体偶联磁微粒、FcR阻断剂和洗脱液；
[0010]所述抗体偶联磁微粒包括CD117抗体偶联磁微粒、CD16抗体偶联磁微粒和FcεRIα抗体偶联磁微粒；所述CD117抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和CD117抗体偶联得到；所述CD16抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和CD16抗体偶联得到；所述Fcε
RIα抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和FcεRIα抗体偶联得到；
[0011]所述洗脱液含有50mM磷酸二氢钠、50mM氯化钠、50mM甘氨酸、10％w/v牛血清白蛋白和10U/ml半胱氨酸蛋白酶。
[0012]优选地，所述CD117抗体偶联磁微粒、所述CD16抗体偶联磁微粒和所述FcεRIα抗体偶联磁微粒的工作浓度为200μg/mL。
[0013]优选地，细胞鉴定试剂盒还包括穿流缓冲液，所述穿流缓冲液为pH为7.2的磷酸盐缓冲液，并且含有0.5％w/v牛血清白蛋白和2mM EDTA。
[0014]优选地，细胞鉴定试剂盒还包括磁微粒稀释液；磁微粒稀释液中含有2.42g/L三羟甲基氨基甲烷、9g/L NaCl、10g/L明胶、10g/L牛血清白蛋白、0.372g/L EDTA和0.05％w/v Proclin300。
[0015]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种上述细胞鉴定试剂盒鉴定细胞的使用方法，包括至少使用一种所述抗体偶联磁微粒对待测细胞进行磁选；
[0016]所述待测细胞在磁选前，先经FcR阻断剂处理；
[0017]所述磁选包括将待测细胞与磁微粒混合并孵育，得到含有磁微粒和待测细胞的混合体系；固定含有磁微粒和待测细胞的混合体系中的磁微粒后，实施步骤(Ⅰ)或步骤(Ⅱ)：
[0018]步骤(Ⅰ)：使用穿流缓冲液清洗所述混合体系，收集清洗后的穿流缓冲液为收集液；
[0019]步骤(Ⅱ)：使用穿流缓冲液清洗所述混合体系，然后使用洗脱液洗脱余下混合体系，收集洗脱后的洗脱液作为收集液；
[0020]当磁选细胞目标表面分子为阴性的细胞，执行步骤(Ⅰ)；当磁选细胞目标表面分子为阳性的细胞，执行步骤(Ⅱ)；
[0021]当使用多种抗体偶联磁微粒对待测细胞进行磁选时，多种抗体偶联磁微粒串联使用，所述收集液中的细胞为下一次磁选的待测细胞；最后一次磁选的收集液为最终收集液，最终收集液中收集到的细胞为目标细胞。
[0022]优选地，待测细胞数量与FcR阻断剂体积比为8
×
104cells/mL；
[0023]优选地，待测细胞数量与FcR阻断剂在2～8℃的条件下孵育30～40min。
[0024]优选地，将待测细胞与磁微粒混合孵育后，使用穿流缓冲液清洗混合体系，分离液相后使用穿流缓冲液重悬固相得到含有细胞的悬浮液，作为首次磁选的待测样本；
[0025]优选地，待测细胞数量与FcεRIα抗体偶联磁微粒、CD117抗体偶联磁微粒和CD16抗体偶联磁微粒的质量比分别独立的为1.6
×
103cells:1μg。
[0026]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了上述细胞鉴定试剂盒，或上述使用方法在鉴定细胞是否为CD117
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FcεRIα
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CD16
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肥大细胞中的应用。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0028]本专利技术提供的细胞鉴定试剂盒包括抗体偶联磁微粒、FcR阻断剂和洗脱液。抗体偶联磁微粒包括CD117抗体偶联磁微粒、CD16抗体偶联磁微粒和FcεRIα抗体偶联磁微粒，用于分别标记CD117
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细胞、CD16
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细胞和FcεRIα
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细胞。FcR阻断剂用于避免FcεRIα抗体、CD117抗体、CD16抗体的非特异性结合。将抗体偶联磁微粒与洗脱液配合使用，可以通过区分细胞是否被特定的抗体偶联磁微粒标记，来判断细胞表面是否具有FcεRIα、CD117和CD16分子中的一种或多种，阳性细胞能够被抗体偶联磁微粒标记，并被洗脱液洗脱，否则为阴性细胞。该
试剂盒鉴定得到的目标细胞纯度可达90％以上。本专利技术提供的鉴定细胞的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括抗体偶联磁微粒、FcR阻断剂和洗脱液；所述抗体偶联磁微粒包括CD117抗体偶联磁微粒、CD16抗体偶联磁微粒和FcεRIα抗体偶联磁微粒；所述CD117抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和CD117抗体偶联得到；所述CD16抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和CD16抗体偶联得到；所述FcεRIα抗体偶联磁微粒，由质量比为100:1的磁微粒和FcεRIα抗体偶联得到；所述洗脱液含有50mM磷酸二氢钠、50mM氯化钠、50mM甘氨酸、10％w/v牛血清白蛋白和10U/ml半胱氨酸蛋白酶。2.根据权利要求1所述的细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述CD117抗体偶联磁微粒、所述CD16抗体偶联磁微粒和所述FcεRIα抗体偶联磁微粒的工作浓度为200μg/mL。3.根据权利要求1所述的细胞鉴定试剂盒，其特征在于，还包括穿流缓冲液，所述穿流缓冲液为pH为7.2的磷酸盐缓冲液，并且含有0.5％w/v牛血清白蛋白和2mM EDTA。4.根据权利要求1所述的细胞鉴定试剂盒，其特征在于，还包括磁微粒稀释液；磁微粒稀释液中含有2.42g/L三羟甲基氨基甲烷、9g/L NaCl、10g/L明胶、10g/L牛血清白蛋白、0.372g/L EDTA和0.05％w/v Proclin300。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括抗体偶联磁微粒、FcR阻断剂、洗脱液、穿流缓冲液和磁微粒稀释液；所述穿流缓冲液为pH为7.2的磷酸盐缓冲液，并且含有0.5％w/v牛血清白蛋白和2mM EDTA；所述磁微粒稀释液中含有2.42g/L三羟甲基氨基甲烷、9g/L NaCl、10g/L明胶、10g/L牛血清白蛋白、0.372g/L EDTA和0.05％w/vProclin300。6.一种权利要求1
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5任一项所述的细胞鉴定试剂盒鉴定细胞的使用方法，其特征在于，包括至少使用一种所述抗体偶联磁微粒对待测细胞进行磁选；所述待测细胞在磁选前，先经FcR阻断剂处理；所述磁选包括将待测细胞与磁微粒混合并孵育，得到含有磁微粒和待测细胞的混合体系；固定含有磁微粒和待测细胞的混合体系中的磁微粒后，实施步骤(Ⅰ)或步骤(Ⅱ)：步骤(Ⅰ)：使用穿流缓冲液清洗所述混合体系，收集清洗后的穿流缓冲液为收集液...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙超，张胜杰，胡志强，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：