本发明专利技术公开了一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，包括试纸条和试剂，所述试剂扩增反应液和样本稀释液，所述试纸条包括胶条以及位于胶条内的反应层，所述反应层包括PVC背板以及依次设置于所述PVC背板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上平行间隔设置检测线和质控线，所述胶体靠近所述样品垫的一端设置有反应杯，所述反应杯内含有冻干粉，所述反应杯内壁上设置有具有恒温加热功能的恒温层，还包括用于将反应杯底部戳破的加样控制组件。本发明专利技术的试剂盒及利用该试剂盒的检测方法，能够简便、快速、准确检测病毒或细菌，完全摆脱对设备的依赖，可用于现场检测，具有很大的应用价值。具有很大的应用价值。具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒及其检测方法
[0001]本专利技术涉及快速检测领域，具体涉及一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
[0002]致病病毒或细菌进入水体或土壤，某些病毒或细菌大量繁殖，致使水体恶化，土壤污染，直接或间接危害人类健康或影响生态系统。因此，建立一种快速、便携、准确、特异性和灵敏度高的能够现场检测的检测方法对防治病毒或细菌污染具有重大作用。
[0003]病毒检测通常有三种手段：全基因测序、核酸检测、免疫蛋白检测，但上述检测方法价格昂贵，不便捷，不适用于室外，如海关、普通诊所等场所；细菌检测中的培养法作为病原细菌检测的金标准，具有特异性高的显著优势，但却具有耗时长、费用大、培养难度高、通量低、灵敏度低等一系列缺点，很难满足临床实际需求。
[0004]恒温扩增方法可以在恒定的温度下发生反应，无需普通的PCR需要进行多个升温和降温循环，因此应用恒温扩增技术检测病毒或细菌，简单的数字水浴锅可以取代昂贵的PCR仪，大大降低了检测成本；胶体金免疫层析技术是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在NC膜上形成检测线(T线)、质控线(C线)，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，使用胶体金免疫层析技术，能够快速发生免疫反应并形成肉眼可观察的显色结果，该技术操作简单快速，结果容易判定，无需复杂的仪器和专业的技术人员，具有很强的现场应用价值。现有的将上述两种方法联用的试剂盒中，胶体金试纸条与恒温扩增方法的试剂分开包装，使用时恒温扩增方法仍需使用水浴锅，未能真正摆脱设备的使用。
技术实现思路
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒及其检测方法，能够快速、准确、灵敏检测病毒或细菌，且完全摆脱对设备的依赖，可用于现场检测。
[0006]本专利技术提供一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，包括试纸条和试剂，所述试剂扩增反应液和样本稀释液，所述试纸条包括胶条以及位于所述胶条内的反应层，所述反应层包括PVC背板以及依次设置于所述 PVC背板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸在相邻处重叠设置，所述硝酸纤维素膜上平行间隔设置检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线和质控线所在的方向与所述PVC 背板的长度方向相垂直，所述胶体靠近所述样品垫的一端设置有反应杯，所述反应杯内含有冻干粉，所述反应杯内壁上设置有具有恒温加热功能的恒温层，还包括用于将反应杯底部戳破的加样控制组件。
[0007]进一步的，所述冻干粉包括解旋酶、重组酶、聚合酶、扩增引物、扩增探针、镁盐(氯化镁或硫酸镁)等，所述扩增引物使用Biotin(生物素)修饰，所述扩增探针的两端分别由
FITC或FAM和3
’
Block修饰，所述结合垫包被有金标抗体，所述金标抗体由纳米金粒子和能与所述FITC结合的Anti
‑
FITC抗体或能与FAM结合的Anti
‑
FAM抗体结合而制得，检测线包被有能与Biotin结合的生物素配体，所述质控线包被有能与金标抗体结合的二抗抗体。
[0008]进一步的，所述反应杯包括设置于胶条上的环形件以及设置于所述环形件底部的封口膜，所述恒温层设置于所述环形件的内壁，所述加样控制件包括具有尖端的第一戳破件以及与所述第一戳破件相连的插接件，所述环形件和恒温层开设有供所述插接件穿过的穿过孔，所述第一戳破件的尖端与所述封口膜相对，扩增反应完成后，可通过对插接件施加向胶条方向的力，则带动第一戳破件相应向封口膜运动直至将封口膜戳破，之后含有扩增产物的液体则可顺利流至反应层。
[0009]进一步的，所述第一戳破件包括具有尖端的尖端部和与尖端部相连的流出部，所述尖端部的尖端与所述封口膜相对，所述流出部在所述胶条所在平面上的投影位于所述尖端部在所述胶条所在平面上的投影之内，如此尖端部将封口膜戳破后可继续运动至流出部位于戳破的加样孔处，流出部与加样孔之间具有间隙，如此含有扩增产物的液体则可顺利流至反应层。
[0010]进一步的，还包括隔离盖，所述隔离盖与所述环形件顶部的外壁螺纹连接，隔离盖可使反应杯进行扩增反应时其内部与外界隔离，防止污染。
[0011]进一步的，还包括灭菌组件，所述灭菌组件包括试剂腔、开设于所述隔离盖上的第一通孔、与所述第一通孔活动配合的按压件以及具有尖端的第二戳破件，所述试剂腔内装有灭菌剂，按压所述按压件时，所述第二戳破件将所述灭菌腔戳破而使灭菌剂流出流至反应层，如此可在层析完成显色后对反应杯和反应层进行无害化处理，减少病毒或细菌的核酸对人和环境的污染，安全性更高。
[0012]进一步的，所述试剂腔成型于所述按压件内，还包括与所述隔离盖平面部分的底部相连的连接件，所述第二戳破件与所述连接件的顶部相连，所述第二戳破件位于所述按压件的下方，按压按压件时，带动试剂腔运动直至第二戳破的尖端与其接触，继续按压使尖端戳破试剂腔，而使试剂腔内的灭菌剂流出。
[0013]进一步的，所述试剂腔包括与所述隔离盖平面部分的底部相连的筒部以及与筒部底部相连的膜部，所述第二戳破件与所述按压件的底部相连，按压按压件时，带动第二戳破件运动直至第二戳破件的尖端与试剂腔的膜部相接触，继续按压使尖端戳破试剂腔，而使试剂腔内的灭菌剂流出。
[0014]进一步的，所述灭菌组件还包括复位弹簧，所述复位弹簧绕设于所述按压件上，所述复位弹簧的两端分别与所述按压件和所述隔离盖平面部分的顶部相连，按压按压件后，复位弹簧受压缩，对按压件不施加压力，则受压缩的复位弹簧对按压件施加力而使其自动复位，第二戳破件的尖端与戳破处保持一定距离而使尖端对戳破处无阻挡而使试剂腔内的灭菌剂顺利流出。
[0015]本专利技术还提供一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，使用如上述的恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒进行检测，包括以下步骤：
[0016]S1，拧开所述隔离盖，在反应杯内加入样本，之后加入扩增反应液，拧上所述隔离盖恒温扩增30分钟；
[0017]S2，拧开所述隔离盖，加入样本稀释液，拧上所述隔离盖，按下所述环形件外的插接件，插接件带动第一戳破件戳破所述封口膜形成加样孔，所述反应杯内的液体由所述加样孔流向反应层，反应15分钟后，判读结果；
[0018]S3，判读结果后，按压按压件，带动第二锥形件戳破所述膜部或试剂腔的底部，灭菌剂从戳破处流出流至反应层对其进行灭菌消毒；
[0019]所述判读结果具体为：若所述检测线和所述质控线出现带色的条带，结果为阳性；若所述检测线未出现带色的条带，所述质控线出现带色的条带，结果为阴性；若质控线未出现带色的条带，说明试剂盒失效或样本量不足。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果表现为：
[0021]1、本专利技术提供一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒及利用该试本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，其特征在于，包括试纸条和试剂，所述试剂包括扩增反应液和样本稀释液，所述试纸条包括胶条(1)以及位于所述胶条(1)内的反应层(2)，所述反应层(2)包括PVC背板以及依次设置于所述PVC背板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸在相邻处重叠设置，所述硝酸纤维素膜上平行间隔设置检测线和质控线，所述检测线和质控线所在的方向与所述PVC背板的长度方向相垂直，所述胶条(1)靠近所述样品垫的一端设置有反应杯(3)，所述反应杯(3)内含有冻干粉，所述反应杯(3)内壁上设置有具有恒温加热功能的恒温层(4)，还包括用于将反应杯(3)底部戳破的加样控制组件(5)。2.如权利要求1所述的恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，其特征在于，所述冻干粉包括解旋酶、重组酶、聚合酶、扩增引物、扩增探针和镁盐，所述扩增引物使用Biotin修饰，所述扩增探针的两端分别由FITC或FAM和3
’
Block修饰，所述结合垫包被有金标抗体，所述金标抗体由纳米金粒子和能与所述FITC结合的Anti
‑
FITC抗体或能与FAM结合的Anti
‑
FAM抗体结合而制得，检测线包被有能与Biotin结合的生物素配体，所述质控线包被有能与金标抗体结合的二抗抗体。3.如权利要求2所述的恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，其特征在于，所述反应杯(3)包括设置于胶条(1)上的环形件(3a)以及设置于所述环形件(3a)底部的封口膜(3b)，所述恒温层(4)设置于所述环形件(3a)的内壁，所述加样控制件包括具有尖端的第一戳破件(5a)以及与所述第一戳破件(5a)相连的插接件(5b)，所述环形件(3a)和恒温层(4)开设有供所述插接件(5b)穿过的穿过孔(6)，所述第一戳破件(5a)的尖端与所述封口膜(3b)相对。4.如权利要求3所述的恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，其特征在于，所述第一戳破件(5a)包括具有尖端的尖端部(5a1)和与尖端部(5a1)相连的流出部(5a2)，所述尖端部(5a1)的尖端与所述封口膜(3b)相对，所述流出部(5a2)在所述胶条(1)所在平面上的投影位于所述尖端部(5a1)在所述胶条(1)所在平面上的投影之内。5.如权利要求4所述的恒温扩增结合胶体金免疫层析法检测病毒或细菌的试剂盒，其特征在于，还包括隔离盖(7)，所述隔离盖(7)与所述环形件(3a...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄二辉，张连海，梁芳芳，黄春英，梁毅，黄品豪，
申请(专利权)人：珠海市慧康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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