一种免疫活性多肽在肿瘤免疫治疗中的用途制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种具有免疫激活作用的多肽在肿瘤免疫治疗中的用途，该发明专利技术是对具有免疫激活作用的化合物进行合成、纯化及分子量测定，提供可经DCs处理后，激活CD8+T细胞和NK细胞，实现提升机体抗肿瘤免疫能力的用途。本发明专利技术提供的具有免疫激活作用的多肽能够提升机体抗肿瘤免疫能力的用途，扩展了肿瘤免疫治疗策略。根据权利要求1里所述本发明专利技术其特征在于：（1）提供了一种具有免疫激活作用的多肽在肿瘤免疫治疗中的用途，一种长度为9个氨基酸带有保护基团且带有药物三氟乙酸盐型的具有免疫激活作用的化合物，其结构序列为：Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种免疫活性多肽在肿瘤免疫治疗中的用途


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫治疗领域。特别涉及多肽经树突状细胞（Dendritic cells, DC）处理后，诱导CD8
+ T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）活化，提升抗肿瘤适应性免疫和固有免疫功能，及其在抗肿瘤特异性免疫治疗中的应用策略。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫疗法于2013年被Science杂志评为十大科学突破第一位。在诸多肿瘤免疫治疗研究热点中，靶向调节T细胞免疫检查点是常用策略之一，如PD
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1单抗和PD
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L1单抗是通过阻断另一免疫检查点信号通路PD
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1/PD
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L1而发挥作用的肿瘤免疫治疗药物；CTLA
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4单克隆抗体Ipilimumab是首个被美国 FDA批准的靶向免疫检查点肿瘤免疫治疗药物。CAR
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T/TCR
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T疗法（即嵌合抗原受体T细胞疗法/T细胞受体疗法）是另一种肿瘤免疫治疗策略，在B细胞白血病和淋巴瘤的小规模临床试验中获得阳性结果。近年来，随着对抗肿瘤免疫应答、肿瘤免疫逃逸机制的深入认识，以DCs负载抗原为基础的肿瘤免疫治疗研究，有望成为实现肿瘤精准医疗的新的突破口。
[0003]CD8
+
T细胞接受DCs呈递来的抗原信号刺激后，活化成为细胞毒性T淋巴细胞（CTL），介导适应性细胞免疫，是机体抗肿瘤免疫的主力军，也是肿瘤免疫治疗关注的最常见的焦点。自然杀伤细胞（NK细胞）是机体固有免疫屏障的主力军，是肿瘤免疫的第一道防线，并且DCs于NK细胞见存在信息交互，可相互影响功能活化，从而使NK细胞在抗肿瘤免疫中具有重要意义。因此，基于DCs的功能，协同活化CD8
+ T细胞和NK细胞，提升适应性免疫和固有免疫应答，逆转机体免疫耐受，实现提升机体抗肿瘤免疫能力，是更有前景的全新的肿瘤免疫治疗策略。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种具有免疫激活作用的多肽在肿瘤免疫治疗中的用途，该专利技术是对具有免疫激活作用的化合物进行合成、纯化及分子量测定，提供可经DCs处理后，激活CD8
+
T细胞和NK细胞，实现提升机体抗肿瘤免疫能力的用途。本专利技术提供的具有免疫激活作用的多肽能够提升机体抗肿瘤免疫能力的用途，扩展了肿瘤免疫治疗策略。
[0005]本专利技术提供了一种具有免疫激活作用的多肽在肿瘤免疫治疗中的用途，其特征在于：一种长度为9个氨基酸带有保护基团且带有药物三氟乙酸盐型的具有免疫激活作用的化合物，其结构序列为：Fmoc
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Leu
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Val
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Leu
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Thr
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Tyr
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Leu
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Ala
‑
Val
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Ala
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Boc
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TFA，命名为E6，结构如下：以及带
有部分保护基氨基酸序列和无保护基氨基酸序列，带有药物盐型及无盐型氨基酸序列。所述的具有免疫激活作用的多肽，可诱导CD8
+
T细胞和NK细胞活化，增强机体抗肿瘤适应性免疫和固有免疫效应，实现免疫抗肿瘤目的。
[0006]本专利技术的优点：本专利技术提供具有免疫激活作用的多肽、可经DCs处理后，激活NK细胞，提升抗肿瘤适应性免疫和固有免疫功能的用途。本专利技术通过分子生物学实验方法对具有免疫激活作用的多肽进行效应评价；具有免疫激活作用的多肽化合物为9个氨基酸的具有保护基和药物盐型的短肽，体外容易合成；具有免疫激活作用的多肽经DCs处理后能够激活CD8
+
T细胞和NK细胞，诱导产生显著的抗肿瘤免疫反应，具有非常大的商业产业化价值等优点，可广泛应用于肿瘤免疫治疗
中。
[0007]附图说明
[0008]下面结合附图及实施例对本专利技术进行详细说明。
[0009]图1 为E6的质谱分析图。
[0010]图2 为E6的高效液相色谱法分析图。
[0011]图3 为E6提升DCs MICA/B表达水平图4 为E6负载DCs诱导活化的NK细胞对髓性白血病K562细胞的免疫杀伤效果。
[0012]图5 为E6负载DCs诱导的CTL细胞对黑色素瘤A
‑
375细胞的免疫杀伤效果。
[0013]图6 为E6的滴定曲线。
具体实施方式
[0014]以下实施例将有助于对本专利技术的了解，但这些实施例仅为了对本专利技术加以说明，本专利技术并不限于这些内容。
[0015]实施例一带有保护基和盐型的多肽E6的合成、纯化及鉴定：本专利技术E6合成步骤使用美国PE公司的ABI43IA型多肽合成仪以及标准Fmoc方案，步骤如下：按照多肽序列使肽链由羧基端向氨基端延伸，选用TFA/DCM对合成的带有保护基的多肽进行切割，带有保护基的多肽收集液在常温条件下减压干燥至1
‑
2 mL，使用50 mL预冷乙醚洗涤沉淀并抽滤，获得粗产品。使用少量DMSO将粗品溶解并用水稀释至所需体积，浓度为10 mg/mL，使用0.22 μm纤维膜过滤后，使用美国Waters公司生产的Delta600型HPLC上纯化并进行纯度分析。选用含0.1%三氟乙酸
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水溶液和含0.1%三氟乙酸
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乙腈溶液作为流动相。选用了C18制备柱（美国Waters公司，7.0 μm，100A，7.8 mm
×
150 mm）进行多肽纯化，选用C18分析柱（美国Waters公司，5.0 μm，100A，3.9 mm
×
150 mm）进行多肽纯度分析。选用API 2000型（美国Waters公司）质谱仪对纯化后的带有保护基和药物盐型多肽E6进行相对分子质量测定。其质谱分析图参见图1，HPLC分析图参见图2。可以看出E6的分子量理论值与实测值一致，且纯度均在95%以上，说明合成效果好，可用于下一步实验。带有保护基和盐型的多肽E6经冻干处理后可放于
‑
80℃保存、备用。
[0016]实施例二
流式细胞术检测具有免疫激活作用的多肽E6提升DCs细胞MICA/B表达水平：1、诱导成熟的人DCs从外周血中分离出单核细胞，加入完全培养基贴壁法2
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4小时，把悬浮细胞移出，剩下贴壁的细胞加入含GM
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CSF（10μl/ml）和IL
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4（10μl/ml）的DC培养基，培养一周左右，可培养出成熟DC细胞。
[0017]2、多肽与DCs共培养人DCs成熟后，使用PBS清洗，然后使用无血清IMDM培养基重悬，加50μg/ml多肽E6，37℃孵育过夜。
[0018]3、DCs细胞MICA/B抗体染色处理后的DCs使用PBS清洗后，采用PE抗人MICA/B (320906, BioLegend)对DCs进行染色，4℃孵育30min。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有免疫激活作用的多肽在肿瘤免疫治疗中的用途，其特征在于：所述的多肽可诱导CD8
+ T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）活化，双重提升机体抗肿瘤适应性免疫和固有免疫功能，其结构和氨基酸序列为：Fmoc
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Leu
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Val
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Leu
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【专利技术属性】
技术研发人员：魏丽杰，于兆进，付晨，
申请(专利权)人：辽宁中健医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：