NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术通过在人正常软骨细胞系C28/I2上构建凋亡模型模拟骨关节炎发生后的软骨细胞损伤，发现不同浓度NS8593均能明显恢复凋亡软骨细胞的细胞活力、线粒体膜电位水平，降低ROS释放量，并可以通过抑制HO

【技术实现步骤摘要】
NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用


[0001]本专利技术涉及NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]骨关节炎(OA)是一种常见的关节疾病，近些年来，其患病率与发病率在中老年人中显著增加。骨关节炎曾被认为是一种纯粹机械性软骨退化的疾病，但越来越多的研究证明OA的发病机制是多因素的综合结果，主要以膝关节结构的病理改变为特征，如软骨下骨硬化，滑膜炎症，骨赘形成和软骨侵蚀，OA是一种涉及整个关节的疾病，包括软骨下皮质、钙化的软骨、滑膜、骨小梁和关节囊组织。其中，最显著的是关节软骨的影响，在OA发展过程中，关节软骨严重退化，微观下则以软骨细胞凋亡为主要变化。关节软骨主要分为表面带，中间地带，深部区和钙化软骨4个区，主要功能是为低摩擦关节提供一个光滑润滑的表面，同时将重载荷传递到下面的软骨下骨。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞类型，参与细胞外基质的合成与分泌。软骨细胞通过产生细胞外基质负责维持软骨稳态，而软骨稳态的维持对预防和延缓OA至关重要。目前越来越多的研究在OA软骨检测到软骨细胞凋亡的标志分子信号，并发现软骨细胞凋亡的形态学和分子特征，提示软骨细胞凋亡在OA的发病机制中起关键作用。Bcl
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2是目前发现的细胞死亡的负调节因子之一，在许多类型的细胞受到外界刺激时能保护细胞免于凋亡。研究表明，Bcl
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2表达降低时会导致软骨细胞过度凋亡，促进OA的发生,而细胞凋亡是由十分复杂的信号传导通路所调控的。目前调控细胞凋亡的具体机制仍不十分清楚。大量的临床研究数据表明：抑制关节软骨细胞凋亡可以成为潜在的临床干预骨关节炎的措施。
[0003]目前治疗OA的药物主要以抗炎、止痛为主，但无法抑制关节结构的破坏是劳动力丧失和致残的主要原因之一，因此，研究开发安全、有效的治疗骨关节炎药物是当前的一项紧迫任务。
[0004]血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)是血红素分解代谢过程中的限速酶，人体内的CO主要是由血红素氧化酶(HO)代谢产生的。目前研究表明HO有三种类型:氧应激诱导型(HO
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1)、组成型(HO
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2)及尚未明确的HO
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3。早期研究表明硝普钠(SNP)可以以时间和浓度依赖的方式刺激HO
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1mRNA和蛋白的表达，同时SNP可以诱导软骨细胞凋亡从而促进OA的发生。近期有直接证据表明，OA大鼠关节软骨中Bcl
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2蛋白表达减少，通过上调Bcl
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2可以明显抑制软骨细胞凋亡，减轻进行性软骨破坏。因此，我们推测HO
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1/Bcl
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2信号转导通路可能与OA关节软骨损伤有关。
[0005]NS8593是一种TRPM7通道抑制剂，最初，NS8593被认为是一种有效的小电导钙激活钾通道(SK1
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3 or Kca2.1
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2.3channels)的抑制剂，SK是心房颤动治疗的靶点之一，目前已有多项研究在大鼠、犬和马体内证明NS8593可以有效改善房颤。然而目前尚无NS8593用于制备治疗骨关节炎药物方面的报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于解决现有技术中治疗骨关节炎的药物存在的不足，提供了一种NS8593或其衍生物在制备治疗骨关节炎药物中的应用。
[0007]所述NS8593的结构式为：
[0008][0009]进一步，所述药物包括NS8593或其衍生物，还包括药学上可接受的赋型剂。所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。
[0010]进一步，所述药物的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂、贴剂、喷雾剂、注射剂或口服液。
[0011]进一步，所述NS8593通过抑制HO
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1信号转导通路减少软骨细胞凋亡。
[0012]一种用于治疗骨关节炎的药物，其唯一活性成分为NS8593或其衍生物。
[0013]本专利技术的有益效果：
[0014]本专利技术公开了NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用，专利技术人通过在人正常软骨细胞系C28/I2上构建凋亡模型模拟骨关节炎发生后的软骨细胞损伤，发现不同浓度NS8593(25,50μM)均能明显恢复凋亡软骨细胞的细胞活力、线粒体膜电位水平，降低ROS释放量，并可以通过抑制HO
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1信号转导通路减少软骨细胞凋亡，这进一步补充和丰富了软骨细胞保护机制的相关研究，为研究和开发治疗骨关节炎的新药提供了更多的科学依据。
附图说明
[0015]图1为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2的细胞活力测试结果；
[0016]图2为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2 TUNEL染色后的荧光显微镜图；
[0017]图3为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2凋亡率的测试结果；
[0018]图4为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2内的ROS释放量的测试结果；
[0019]图5为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2 Rhodamine 123染色后的荧光显微镜图；
[0020]图6为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2 JC
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1染色后的荧光显微镜图；
[0021]图7为不同处理条件下的软骨细胞系C28/I2中C
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PARP、Bcl
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2、HO
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1蛋白的表达量测试结果。
具体实施方式
[0022]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明。
[0023]实施例1：NS8593对SNP诱导的软骨细胞系C28/I2细胞活力的影响
[0024]1.软骨细胞系C28/I2培养
[0025]人正常软骨细胞系C28/I2购自上海冠导生物工程有限公司，置于37℃和5％ CO2的培养箱中，当达到90％的细胞汇合度时进行细胞传代培养。
[0026]2.不同浓度的NS8593对SNP诱导的软骨细胞系C28/I2细胞活力的影响
[0027]实验方法：将软骨细胞系C28/I2以每孔2
×
105个细胞的密度接种后，通过加入凋亡诱导剂SNP(1mM)来建立凋亡体外模型(NO是主要的软骨细胞凋亡诱导剂，SNP可产生外源性NO诱导培养的软骨细胞凋亡)，体外实验细胞分组为正常组、SNP(1mM)组、SNP(1mM)+不同浓度NS8593(6.25，12.5，25,50，100μM)联合用药组,相应药物处理软骨细胞24h，实验结束后测定细胞活力。
[0028]细胞活力的MTT测定方法：
[0029](1)将培养瓶中的细胞消化，接种于96孔板中，每孔200μl(5
×
103个细胞)；
[0030](2)在显微镜下观察，待每孔细胞长至60％
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70％时，然后根据实验需要给予相应的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.NS8593在制备治疗骨关节炎药物中的应用，所述NS8593的结构式为：2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括NS8593，还包括药学上可接受的赋型剂。3.如权利要求1或2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡伟，周仁鹏，朱仁弟，郝文娟，李舒芳，
申请(专利权)人：安徽医科大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：