一种组织中蛋白含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种组织中蛋白含量的检测方法。本发明专利技术公开的组织中蛋白含量的检测方法，包括：将动物组织置于无色样品溶液中进行超声破碎，得到组织裂解液，无色样品溶液的溶剂为100mM Tris

【技术实现步骤摘要】
一种组织中蛋白含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
中，一种组织中蛋白含量的检测方法。

技术介绍

[0002]蛋白质在几乎所有生物过程中都起着关键的作用。在一个蛋白的发现到功能研究的过程中必不可少的是蛋白的组织分布，因为蛋白质在动物组织中的分布和表达水平表明了其可能发挥的作用。
[0003]在过去几十年中已经开发了几种相对成熟的方法来确定蛋白质组织分布，其中包括RT
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PCR，免疫组化，ELISA，Western blotting。当然，蛋白的基因水平与蛋白本身的表达量上经常是不一致的，所以最直接的方式是直接检测蛋白水平。Western blotting是直接检测蛋白水平的一种定性半定量的方法，常用于组织水平的蛋白表达量。对于用Western blotting检测组织蛋白水平来说，最重要的是组织样品的制备。在常规的组织样品制备中，通常将样品在加了蛋白酶抑制剂的裂解液(lysis buffer)中破碎，在冰上静置一段时间后离心去除沉淀将上清制样。这个沉淀中无疑会有未破碎的组织块以及不溶的蛋白等被损失而使最终检测的结果不准确。基于这些原因，Li和Liu等人在2001年采用了一种将等重量组织块在有色2
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SDS sample buffer中直接超声破碎溶解结合TCA沉淀蛋白的方法研究Caveolin的组织分布，结果显示相较于以前常规方法有明显的优势，即使在低表达水平的组织中也能够准确检测到蛋白表达。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何检测动物组织中目的蛋白的相对含量。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了检测动物组织中目的蛋白含量的方法，所述方法包括：
[0006]1)将动物组织置于无色样品溶液(无色sample buffer)中进行超声破碎，得到组织裂解液；
[0007]所述无色样品溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为100mM Tris
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HCl(pH 6.8)，所述溶质及其在所述无色样品溶液中的浓度分别为4g/100mL SDS，20％(体积百分比)甘油，4％(体积百分比)2
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巯基乙醇；100mM Tris
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HCl(pH 6.8)由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质为Tris和HCl，Tris在100mM Tris
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HCl(pH 6.8)中的浓度为100mM，HCl的浓度满足使100mM Tris
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HCl(pH 6.8)的pH为6.8；
[0008]2)向所述组织裂解液中加入TCA溶液，得到组织
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TCA溶液；将所述组织
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TCA溶液离心，使蛋白质进入沉淀中，利用所述无色样品溶液溶解沉淀，即得到待测蛋白溶液；
[0009]所述TCA溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其在所述TCA溶液中的浓度为7.2g/100mL；
[0010]3)检测所述待测蛋白溶液中的目的蛋白的含量，即实现所述动物组织中目的蛋白含量的检测。
[0011]上述方法中，超声条件可为：超声功率50W，工作时间10min，开启30s，关闭2s。
[0012]上述方法步骤1)中，动物组织与所述无色样品溶液的配比可为1mg：10μL。
[0013]上述方法步骤1)中还可包括对所得组织裂解液离心的步骤。如所述离心得到沉淀，则继续超声至沉淀溶解。
[0014]上述方法步骤2)中，所述组织裂解液与所述TCA溶液的体积比可为1:10。
[0015]上述方法步骤2)中，利用所述无色样品溶液溶解沉淀还可包括通过超声助溶。超声条件可为：超声功率50W，工作时间10min，开启30s，关闭2s。
[0016]上述方法步骤2)还可包括利用丙酮洗涤沉淀的步骤。
[0017]上述方法步骤3)中检测所述待测蛋白溶液中的目的蛋白可采用Western blotting进行。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，目的蛋白为Caveolin1。
[0019]上述方法中，所述动物组织可为肝、肾上腺、小肠、棕色脂肪组织、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、白色脂肪组织或脾。
[0020]所述检测动物组织中目的蛋白含量的方法在冰上或4℃进行。
[0021]本专利技术的方法可以准确的对组织中的目的蛋白进行检测，且该方法简单易操作且重复性好，利于对目的蛋白的组织分布研究以及可将此方法用于蛋白质组学研究。
[0022]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
附图说明
[0023]图1为组织加入到无色样品溶液中。其中，1
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12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0024]图2为组织在无色样品溶液超声破碎。其中，1
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12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0025]图3为组织裂解液加入TCA后。其中，1
‑
12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0026]图4为样品离心后加入丙酮，上图为加入TCA离心后，下图为加入丙酮后。其中，1
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12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0027]图5为蛋白晾干后用无色样品溶液溶解，上图为蛋白晾干后，下图为加入无色样品溶液后。其中，1
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12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0028]图6为超声破碎块状的蛋白助溶后加入溴酚蓝，上图为超声破碎后，下图为加入溴酚蓝后。其中，1
‑
12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0029]图7为无色样品溶液结合TCA沉淀制样的银染(上图)及蛋白印迹(下图)检测Caveolin1组织分布结果。其中，1
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12对应的组织依次为肝、肾上腺、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂肪组织)、脾。
[0030]图8为组织加入到有色sample buffer中。其中，1
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11对应的组织依次为肝、小肠、BAT(棕色脂肪组织)、肾、心、肺、睾丸、骨骼肌、大肠、WAT(白色脂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测动物组织中目的蛋白含量的方法，包括：1)将动物组织置于无色样品溶液中进行超声破碎，得到组织裂解液；所述无色样品溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为100mM Tris
‑
HCl(pH 6.8)，所述溶质及其在所述无色样品溶液中的浓度分别为4g/100mL SDS，20％(体积百分比)甘油，4％(体积百分比)2
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巯基乙醇；100mM Tris
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HCl(pH 6.8)由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质为Tris和HCl，Tris在100mM Tris
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HCl(pH 6.8)中的浓度为100mM，HCl的浓度满足使100mM Tris
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HCl(pH 6.8)的pH为6.8；2)向所述组织裂解液中加入TCA溶液，得到组织
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TCA溶液；将所述组织
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TCA溶液离心，使蛋白质进入沉淀中，利用所述无色样品溶液溶解沉淀，即得到待测蛋白溶液；所述TCA溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其在所述TCA溶液中的浓度为7.2g/100mL；3)检测所述待测蛋白溶液中的目的蛋白的含量，即实现所述动物组织中目的蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平生，程林佳，徐益禄，朱康凌，张淑妍，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：