ND-42相关质粒在制备果蝇线粒体蛋白表达试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种ND

【技术实现步骤摘要】
ND
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42相关质粒在制备果蝇线粒体蛋白表达试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及ND
‑
42相关质粒在果蝇S2细胞中制备线粒体蛋白表达试剂盒的应用，属于基础医学领域。

技术介绍

[0002]线粒体作为体细胞和生殖细胞的功能性亚细胞器，除了可以作为能量和活性氧的重要来源，还在信号转导、细胞增殖和分化、以及细胞程序性死亡等过程中发挥了关键作用，从而参与了多种疾病的发生。在精子发生过程中，线粒体形态发生了巨大的变化，包括形状和定位方面的动态变化。在减数分裂后的精子细胞中，环状线粒体鞘围绕轴丝组织定位。随后，精子细胞开始伸长，线粒体彼此展开，并融合形成两个巨大的线粒体衍生物。在果蝇中，线粒体动力平衡主要包括线粒体的融合和分裂过程，并对精子发生的调控至关重要。Fuzzy onions(fzo)被鉴定为线粒体融合基因，可以编码一种跨膜GTPase蛋白。缺失fzo基因可以导致线粒体融合缺陷，最终介导雄性不育的发生。Porin是影响线粒体融合和分裂的另一个重要基因，破坏其表达也可损害精子细胞的个体化过程，并导致雄性不育。通过对果蝇Pink1基因的研究，很多学者发现了线粒体的靶向结合序列和丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，且它的调控方式与人Pink1基因相似，同时还与帕金森病的致病过程相关。在Pink1突变体的睾丸中，精子细胞中的nebenkerns结构呈现为空泡样结构，并在随后的分化阶段中仅衍化出一个线粒体衍生物，这与Parkin突变体睾丸的表型相似，表明Pink1和Parkin可能通过减少线粒体的分裂或增加线粒体的融合来调控精子细胞的发育过程。
[0003]ND
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42也称之为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶(泛醌)42kDa亚单位，编码人NDUFA10的直系同源物，属于线粒体电子传递链复合体I的一个亚单位。在某些生物学事件中，ND
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42通常被认为是Pink1的抑制因子，可以与多种蛋白相互作用。研究表明，ND
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42主要定位在线粒体上，并可以调控线粒体功能及其相关代谢过程。重要的是，ND
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42对于多种组织氧化应激的稳态平衡是至关重要的，而这些组织涉及了生殖、神经等多个系统。然而，ND
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42在不同组织中的功能和机制尚未完全阐明。本试剂盒主要针对ND
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42蛋白设计了一种在S2细胞中进行线粒体相关蛋白表达的制备方法，有助于对线粒体相关蛋白的功能和调控机制进行深入研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种在果蝇S2细胞中利用ND
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42相关质粒进行异位表达的试剂盒，用于果蝇线粒体相关蛋白表达的制备。ND
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42蛋白是在前期研究中鉴定到的关键的线粒体蛋白，通过UAS
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Gal4系统在果蝇S2细胞中表达相关质粒，可以制备ND
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42蛋白和ND
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42蛋白的DNK结构域，有助于对线粒体相关蛋白的功能和调控机制进行深入研究。本专利技术为解决上述技术问题采用以下技术方案：
[0005]ND
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42相关质粒在制备果蝇S2细胞线粒体蛋白表达试剂盒中的应用，所述的试剂盒主要针对ND
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42蛋白设计了一种在S2细胞中进行线粒体相关蛋白表达的制备方法。
[0006]进一步的，所述试剂盒构建了pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42CDS全长质粒、pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42
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DNK
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dom质粒和pUAS
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attB
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3xFlag
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Nap1 CDS全长质粒。
[0007]进一步的，利用UAS
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Gal4系统来实现ND
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42蛋白、ND
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42蛋白DNK结构域和Nap1蛋白的表达。
[0008]进一步的，所述试剂盒采用免疫共沉淀和蛋白免疫印迹分析发现Nap1蛋白可以与ND
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42蛋白以及DNK结构域存在强烈的物理性相互作用。
[0009]有益效果
[0010]本专利技术利用UAS
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Gal4系统来实现ND
‑
42蛋白、ND
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42蛋白DNK结构域和Nap1蛋白的表达。通过免疫共沉淀和蛋白免疫印迹结果显示，Nap1蛋白可以与ND
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42蛋白存在较强的相互作用。进一步实验观察发现，Nap1蛋白还可以与ND
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42的DNK结构域之间存在强烈的物理性相互结合。本试剂盒有助于对线粒体相关蛋白的功能和调控机制进行深入研究。
附图说明
[0011]图1为ND
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42相关质粒及模式图。图A为pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42CDS全长质粒图谱；图B为pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42
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DNK
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dom质粒图谱；图C为pUAS
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attB
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3xFlag
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Nap1 CDS全长质粒图谱；图D为ND
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42蛋白和Nap1蛋白的作用模式图。
[0012]图2为ND
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42蛋白和Nap1蛋白的免疫共沉淀和蛋白免疫印迹检测结果。
[0013]图3为ND
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42蛋白的deoxynucleoside kinase(DNK)结构域与Nap1蛋白的免疫共沉淀和蛋白免疫印迹检测结果。
具体实施方式
[0014]下面详细描述本专利技术的实施方式，所述实施方式的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施方式是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能解释为对本专利技术的限制。
[0015]本专利技术为解决上述技术问题采用以下技术方案：
[0016]实施例1ND
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42相关质粒的制备与表达
[0017]本试剂盒主要利用UAS
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Gal4系统来实现ND
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42蛋白、ND
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42蛋白DNK结构域和Nap1蛋白的表达。本试剂盒构建了pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42CDS全长质粒、pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42
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DNK...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ND
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42相关质粒在制备果蝇线粒体蛋白表达试剂盒中的应用，其特征在于，所述的试剂盒构建ND
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42相关质粒，并利用ND
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42相关质粒在果蝇S2细胞中进行线粒体蛋白表达。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ND
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42相关质粒包括pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42CDS全长质粒、pUAS
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attB
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3xHA
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ND
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42
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DNK
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dom质粒和pUAS
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attB
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3xFlag
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Nap1 CDS全长质粒。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒利用UAS
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Gal4系统来实现ND
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42蛋白、ND
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42蛋白的DNK结构域和Nap1蛋白的表达。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：于骏，孙斐，李志然，陈霞，付杨博，黄秋汝，孙飞腾，何磊，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：