一种控制柑橘木虱的真菌组合菌剂制造技术

本发明专利技术公开了一种控制柑橘木虱的真菌组合菌剂，属于生物防治技术领域。所述的真菌组合菌剂由玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌组成，优选组合体积比为1:1:1或2:1:1，组合菌剂在103‑

【技术实现步骤摘要】
一种控制柑橘木虱的真菌组合菌剂


[0001]本专利技术属于生物防治
，具体涉及一种控制柑橘木虱的真菌组合菌剂。

技术介绍

[0002]柑橘木虱(Diaphorina citri)是一种重要的柑橘害虫，它可以传播一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌(Candidatus Liberibacter spp.)，该病菌会引起柑橘毁灭性病害
‑
柑橘黄龙病(Huanglongbing，HLB)的发生，严重影响柑橘产业的经济效益。柑橘木虱是HLB病菌田间传播唯一的昆虫媒介，因此有效控制柑橘木虱对HLB的防控具有极其重要的作用。目前在柑橘木虱的防治上，仍是以传统的化学防治为主，但是长期、大量使用这些化学农药导致了柑橘果园天敌昆虫大量死亡、生物多样性丧失、柑橘木虱产生不同程度的抗药性、果园生态环境受到污染等一系列问题，果实农药残留超标的问题也时有发生。随着国家对农药、化肥施用量“双减”概念的提出，环保、高效的生物防治被推到新的高度。针对柑橘木虱的可持续性生物防控策略也亟需推广开来。
[0003]利用虫生真菌防治农业害虫是生物防治策略中的重要手段，金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)和球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前应用较为广泛的两种虫生真菌，寄主谱广，能寄生300多种昆虫，以及螨类和线虫等。具有适应性强、在土壤中和林间能长期宿存、易规模化生产、对人畜无毒害以及对环境友好等优点，在农业害虫的生物防治中发挥了重要作用。目前市面上多种白僵菌与绿僵菌的生物农药可用于柑橘木虱的防治，但防治效果不甚理想，柑橘木虱致死率普遍在40％
‑
60％，达到90％以上致死率需15
‑
20天。因此制剂改良、菌种优化是真菌农药进一步发展的关键。
[0004]目前没有将玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)与金龟子绿僵菌、球孢白僵菌组合用于防治柑橘木虱的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种增效杀灭柑橘木虱的真菌组合菌剂及其应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种增效杀灭柑橘木虱的真菌组合菌剂，所述的真菌组合菌剂由玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌组成。
[0008]优选的，所述的真菌组合菌剂的剂型为分生孢子悬浮液。
[0009]优选的，所述的真菌组合菌剂的有效成分为玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌分生孢子悬浮液混合液，浓度为103‑
107孢子/mL。
[0010]本专利技术所提供的菌剂中的分生孢子悬浮液的制备方法为：实验室内，将金龟子绿僵菌、球孢白僵菌和玫烟色棒束孢菌株在无菌条件下接入SDY液体培养基中25
±
1℃振荡培养72小时，再转接入PDA平板培养5
‑
8天，待产孢充分后保存备用。从平板上刮取一定量孢子置于灭过菌的0.3
‰
吐温
‑
80溶液中，配制成103‑
107孢子/mL的孢悬液，按比例配置成各浓度的孢悬液混合液；大规模生产，将灭菌麦麸、大米以及谷壳，按体积比1:1:1混合均匀制成固
体培养基，铺在托盘上。将实验室制备的金龟子绿僵菌、球孢白僵菌和玫烟色棒束孢孢悬液分别喷洒各自铺满培养基的托盘上，以室温28
‑
30℃，65
‑
80％湿度条件，培养7
‑
10天，刮取菌块置于灭过菌的0.3
‰
吐温
‑
80溶液中，振荡使孢子充分分散血球计数板测定孢子浓度，并稀释配制成所需浓度的孢悬液，将相同浓度的三种孢悬液，一定比例混合，配置成相应浓度的组合菌剂。菌落生长10天后可用直径6.10mm的打孔器在菌落核心至边缘1/2处取菌块，置于含5mL0.3
‰
吐温
‑
80溶液的试管中，充分振荡以血球计数板计数，换算成单位面积产孢量，便于后续生产。
[0011]优选的，所述的分生孢子悬浮液混合液中玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌分生孢子悬浮液的体积比为1:1:1。
[0012]优选的，所述的分生孢子悬浮液混合液中玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌分生孢子悬浮液的体积比为2:1:1。
[0013]本专利技术的第二个目的是提供上述的真菌组合菌剂在防治柑橘木虱中的应用。
[0014]本专利技术的第三个目的是提供一种防治柑橘木虱的方法，该方法是对带有柑橘木虱的植株施用上述的真菌组合菌剂。
[0015]优选的，所述的真菌组合菌剂是以分生孢子悬浮液的剂型施用。
[0016]优选的，所述的的分生孢子悬浮液的浓度为103‑
107孢子/mL。
[0017]优选的，所述的施用的方式包括根灌和/或叶面喷雾。
[0018]本专利技术提供的玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌和球孢白僵菌真菌组合具有如下有益效果：该真菌组合对柑橘木虱的致病力强，见效快，采用浓度为107孢子/mL的孢子悬浮液喷施法接种7天后，柑橘木虱死亡率为93.3％，柑橘木虱死亡高峰出现在3
‑
4天。该菌株的菌剂环保高效，具有持续控制效果，可大幅减少化学农药的使用量，具有良好的应用前景。
具体实施方式
[0019]以下结合具体实施例，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，这些实施例用于理解而不是限制本专利技术的范围。
[0020]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试剂、材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0021]以下实施例中所用材料说明：
[0022]DNA提取：上海生工生物工程股份有限公司，真菌基因组DNA快速抽提试剂盒(B518229)
[0023]引物合成：生工生物工程上海股份有限公司。
[0024]2×
Taq PCR MasterMix：含染料，北京金沙生物技术有限公司(SF212)。
[0025]SDY液体培养基：山东拓普生物工程有限公司(M4235)。
[0026]PDA固体培养基：广东环凯微生物科技有限公司(021052)。
[0027]ddH2O：天根生化科技(北京)有限公司。
[0028]实施例1田间采样调查
[0029]以五点取样法，在柠檬园中取样观察，调查田间柑橘木虱真菌感染情况，统计柑橘木虱死亡率，粗略调查发现未喷洒农药的情况下田间柑橘木虱死亡率高于80％，所有发现的柑橘木虱僵虫中70％虫体出现明显菌丝。采集染菌僵虫，每头单独保存于离心管中，带回
实验室，4℃保存备用。
[0030]实施例2室内分离鉴定
[0031]用无菌水清洗虫体3次，以无菌吸水纸吸干虫体表面水分，放置于PDA培养基上，28℃恒温培养。待菌落长至肉眼可见，将菌丝转接到新鲜PDA培养基上进一步分离纯化。观察纯化后的菌落及菌株形态特征，进行初步归类。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对柑橘木虱具有增效杀灭效果的真菌组合菌剂，其特征在于，所述的真菌组合菌剂由玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌组成。2.根据权利要求1所述的真菌组合菌剂，其特征在于，所述的真菌组合菌剂的剂型为分生孢子悬浮液。3.根据权利要求1所述的真菌组合菌剂，其特征在于，所述的真菌组合菌剂的有效成分为玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌分生孢子悬浮液混合液，浓度为103‑
107孢子/mL。4.根据权利要求3所述的真菌组合菌剂，其特征在于，所述的分生孢子悬浮液混合液中玫烟色棒束孢、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌分生孢子悬浮液的体积比为1:1:1。5.根据权利要求3所述的真菌组合菌剂，其特征在于，所述的分生...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱文超，高晶，毛润乾，修宝林，
申请(专利权)人：广东省科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：