一种不饱和铁结合力测定试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种不饱和铁结合力测定试剂盒及其应用，包括试剂R1、试剂R2，其中试剂R1包括BICINE缓冲液、铁盐、第一防腐剂，试剂R2包括KCl

【技术实现步骤摘要】
一种不饱和铁结合力测定试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种不饱和铁结合力测定试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]铁是人体必须的微量元素，是合成红细胞中血红蛋白的主要原料。血清铁(Fe)是与转铁蛋白(TRF)结合的，每一分子TRF可结合两个三价铁离子，但转铁蛋白分子中只有一部分被饱和，而另一部分未被饱和，称为不饱和铁结合力(UIBC)，当血清转铁蛋白全部被饱和后，其结合铁的量就是总铁结合力，即血清铁与不饱和铁结合力的和为总铁结合力。血清铁的测定有利于对多种疾病的诊断，例如：溶血性贫血、再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血、急性肝炎及铅中毒等会导致血清铁升高；而缺铁性贫血、慢性失血、月经过多、妊娠、感染性疾病、恶性肿瘤、肝硬化等则会导致血清铁降低。血清总铁结合力增高见于缺铁性贫血、急性肝炎等，降低见于肝硬化、肾病、尿毒症和血色素沉着症等；总铁结合力在缺铁性贫血，怀孕后期、口服避孕药与病毒性肝炎时会升高，在慢性感染、铁中毒、肾脏疾病、肾病变和地中海贫血时会下降。
[0003]目前，市场上的不饱和铁结合力测定试剂盒都是用的比色法，即在碱性条件下，先用过量的铁离子将血清中的转铁蛋白全部结合，然后剩余的铁离子再用还原剂将其还原成亚铁离子，并通过显色剂显色，比色测定得到不饱和铁结合力，例如，专利CN102323430A和CN104483494A，在试剂1中加入三价铁离子，并加入硫脲作为去干扰剂，去除铜离子的干扰。然而硫脲本身是具有还原性的，可以和试剂1中的三价铁离子发生氧化还原反应，导致三价铁离子被还原成亚铁离子，从而影响试剂的稳定性。专利CN104483494A中，在试剂1中加入了水溶性的碳酸盐或碳酸氢盐，这会与试剂中的铁离子发生双水解反应，试剂受热破坏容易生成沉淀而影响性能。
[0004]可见，由于不饱和铁结合力需在碱性条件下测定，而碱性缓冲液中，铁离子通常会生成氢氧化铁沉淀，或者水解产生氢氧化铁胶体，试剂在长期放置过程中，尤其是在热破坏过程中会逐渐析出明显的红棕色氢氧化铁胶体，从而影响试剂的稳定性，因此，解决碱性缓冲液中铁离子的稳定性问题至关重要。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本申请提供一种不饱和铁结合力测定试剂盒及其应用，稳定性好、准确度高、精密度好。
[0006]为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本申请提供一种不饱和铁结合力测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，其中试剂R1包括BICINE缓冲液、铁盐、第一防腐剂，试剂R2包括KCl
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HCl缓冲液、还原剂、显色剂、第二防腐剂。
[0008]优选的，BICINE缓冲液的浓度为50mmol/L～150mmol/L。
[0009]优选的，BICINE缓冲液的pH值为8.0
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9.0。
[0010]优选的，铁盐的浓度为10μmol/L～20μmol/L。
[0011]优选的，铁盐包括硫酸铁、硫酸铁钾、硫酸铁铵、氯化铁中的一种或几种。
[0012]优选的，KCl
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HCl缓冲液的浓度为150mmol/L～300mmol/L。
[0013]优选的，KCl
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HCl缓冲液的pH值为1.5～2.5。
[0014]优选的，还原剂的浓度为50mmol/L～200mmol/L。
[0015]优选的，显色剂的浓度为1mmol/L～3mmol/L。
[0016]第二方面，本申请提供一种不饱和铁结合力测定试剂盒在检测不饱和铁结合力中的应用，试剂R1、试剂R2与待测样品的体积比为10：2：1。
[0017]本申请的有益效果如下：
[0018]本方案中，试剂R1采用N,N
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二羟乙基甘氨酸(BININE)缓冲液，提高了R1的稳定性，而不需要额外的引入螯合剂，也不需要加入稳定剂就能保持试剂盒很好的稳定性；试剂R2采用KCl
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HCl生物缓冲液，该缓冲液的缓冲能力不强，不会影响试剂R1和试剂R2混合之后的碱性环境，且KCl能维持体系的电解质平衡，即使不加稳定剂也能保持试剂很好的稳定性。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0020]如本领域技术人员所知，在有过量铁离子存在的碱性缓冲液中，样本中未与铁结合的转铁蛋白全部与铁离子结合，剩余的铁离子再被还原后与显色剂作用生成红色络合物，可通过计算缓冲液中铁离子的减少量就可以计算出样本中的不饱和铁结合力。
[0021]该实验原理决定了铁离子检测必须要存在于碱性缓冲液中，而在常规的碱性缓冲液中，铁离子不可避免是会发生水解或沉淀反应的，这就严重影响了检测结果的准确性，通常情况下，会选择在缓冲液中加入一定量能络合铁离子的螯合剂，但常规的螯合剂，如酒石酸盐、柠檬酸盐等，只有加入合适的量才能更好的发挥络合效果，络合剂加入太少，则铁离子还是会水解或沉淀，络合剂加入太多，则会使缓冲液的pH发生改变，不利于维持恒定的pH，而且可能会干扰铁离子的测定，往往螯合效果并不是特别理想。
[0022]基于以上，创立了本专利技术创造。
[0023]第一方面，本申请提供一种不饱和铁结合力测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，其中试剂R1包括BICINE缓冲液、铁盐、第一防腐剂，试剂R2包括KCl
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HCl缓冲液、还原剂、显色剂、第二防腐剂。
[0024]本申请的不饱和铁结合力测定试剂盒稳定性高的原因在于，试剂R1中BICINE缓冲液是一种两性氨基酸缓冲液，同时具有氨基酸和氨基乙醇的性质，既可以作为稳定的生物缓冲液维持体系恒定的pH，又可以使铁离子形成稳定的甘氨酸类三价铁络合物，该络合物并不影响铁离子的测定，但却能使铁离子在碱性条件下很稳定的存在，即该缓冲液可以同时起到缓冲剂、螯合剂和稳定剂的作用，从而极大的提高了试剂的稳定性；试剂R2中采用一种生物缓冲液KCl
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HCl缓冲液，该缓冲液的缓冲能力不强，不会影响试剂R1和试剂R2混合之后的碱性环境，对测值具有很好的改善作用，准确度好，而且KCl能维持体系的电解质平衡，
即使不加稳定剂也能保持试剂很好的稳定性。
[0025]BICINE缓冲液的浓度为50mmol/L～150mmol/L，若浓度过低，则不足以将三价铁离子完全络合，而且试剂的稳定性不够好；若浓度太高，会增加试剂成本。
[0026]优选的，BICINE缓冲液的pH值为8.0
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9.0，当试剂pH低于8.0时，缓冲能力较弱，试剂的稳定性不够好。
[0027]要保证加到试剂中的铁离子过量，才能保证样本中的转铁蛋白全部被三价铁离子结合，才能有剩余的三价铁离子参与下一步的还原反应，但三价铁离子的浓度如果加的太多了，会造成试剂中B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种不饱和铁结合力测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2，其中试剂R1包括BICINE缓冲液、铁盐、第一防腐剂，试剂R2包括KCl
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HCl缓冲液、还原剂、显色剂、第二防腐剂。2.根据权利要求1所述的不饱和铁结合力测定试剂盒，其特征在于，所述BICINE缓冲液的浓度为50mmol/L～150mmol/L。3.根据权利要求1所述的不饱和铁结合力测定试剂盒，其特征在于，所述BICINE缓冲液的pH值为8.0～9.0。4.根据权利要求1所述的不饱和铁结合力测定试剂盒，其特征在于，所述铁盐的浓度为10μmol/L～20μmol/L。5.根据权利要求1所述的不饱和铁结合力测定试剂盒，其特征在于，所述铁盐包括硫酸铁、硫酸铁钾、硫酸铁铵、氯化铁中的一种或几种。6.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴年芬，黄爱，伍卫姣，梁艳，龚婷，胡庆娆，周徐，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：