经修饰的B细胞及其使用方法技术

本发明专利技术涉及经基因修饰的B细胞以及其用途，例如，用于治疗各种疾病和病症，包含癌症、心脏病、炎性疾病、肌肉萎缩疾病、神经疾病等。在某些实施例中，本发明专利技术涉及一种分离的经修饰的B细胞(“CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】[0006]鉴于B细胞具有呈递抗原和分泌蛋白质的天然能力，作为用于靶向某些患病细胞类型并分泌治疗性有效载荷的细胞疗法具有很大的潜力。因此，除了T细胞疗法之外，还需要替代性治疗，如经工程化的B细胞，所述替代性治疗用于治疗各种疾病和病症，包含癌症、心脏病、炎性疾病、肌肉萎缩疾病、神经疾病等。

技术实现思路

[0007]现在已经发现，经工程化的B细胞在治疗如本文所叙述的各种疾病和病症中可以是有效的。本专利技术因此涉及经修饰的B细胞。
[0008]还已经发现，CD79a(免疫球蛋白α)当并入本专利技术的CAR
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B构建体的胞内信号传导结构域中时表现出优于CD79b(免疫球蛋白β)的品质。另外，进一步发现，当用于本文所述的CAR
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B构建体时，胞内CD79b(免疫球蛋白β)对功效不显示(或甚至显示负面作用)。本专利技术因此尤其涉及包括CD79a胞内信号传导结构域的CAR
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B构建体。
[0009]在某些实施例中，本专利技术涉及一种分离的经修饰的B细胞(“CAR
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B细胞”)，所述CAR
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B细胞能够表达嵌合受体(“CAR
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B受体”)，其中所述嵌合受体包括：(a)胞外结构域；(b)跨膜结构域；以及(c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域。所述胞质结构域优选地包括CD79a。在各个实施例中，所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的至少一种抗原或蛋白质。在各个实施例中，所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞和内皮细胞。在各个实施例中，所述B细胞表达多于一种CAR
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B受体构建体。在各个实施例中，所述CAR
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B受体包括多于一个胞外结合结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、或全长抗体、或受体或配体的胞外结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GPC3、ASGR1、ASGR2、肌聚糖蛋白、Corin、FAP(成纤维细胞激活蛋白)和Her2。在各个实施例中，所述铰链结构域源自由以下组成的组：IgG、CD28和CD8。在各个实施例中，所述铰链结构域包含选自由SEQ ID No.27、29、31组成的组的核酸序列。在各个实施例中，所述胞质结构域包括对于B细胞受体而言天然的至少一个信号传导结构域。在各个实施例中，所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD79b(免疫球蛋白β)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、MyD88、CD21、Syk、FYN、LYN、PI3K、BTK、PLCγ2、CD3ζ和BLNK。在各个实施例中，所述胞质结构域进一步包括共刺激结构域。
[0010]在各个实施例中，本专利技术包括一种分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达和分泌有效载荷，其中所述有效载荷不在B细胞中天然表达或者以比在B细胞中天然表达的水平更高的水平表达。在各个实施例中，所述有效载荷是抗体或其片段。在各个实施例中，所述抗体是分泌抗体，并且可以包含阻断抗体(例如，抗PD
‑
1)或激动剂抗体(抗CD137、GITR、OX40)，所述阻断抗体或激动剂抗体被工程化以含有天然或经工程化的Fc区，并且可以是可溶性的或膜结合的。在各个实施例中，所述有效载荷可以是免疫调节剂，如趋化因子或细胞因子。.在各个实施例中，所述有效载荷选自由以下组成的组：IL
‑
1、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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13、IL
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17、IL18、IL
‑
21、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、TSLP、CCL21、FLT3L、XCL1、LIGHT(TNFSF14)、OX40L、CD137L、CD40L、ICOSL、抗CD3抗体、CD47、TIM4
‑
FC、CXCL13、
CCL21、CD80、CD40L、IFNαA2、LIGHT、4
‑
1BBL、MDGF(C19orf10)、FGF10、PDGF、集聚蛋白、TNF
‑
α、GM
‑
CSF、抗FAP抗体、抗TGF
‑
β抗体；TGF
‑
β陷阱、诱饵或其它抑制分子；抗BMP抗体；BMP陷阱、诱饵或其它抑制分子。在各个实施例中，所述B细胞能够表达多于一个有效载荷。在各个实施例中，所述B细胞能够表达多于1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个有效载荷。
[0011]在各个实施例中，本专利技术涉及一种治疗患者的方法，所述方法包括施用本专利技术的经修饰的B细胞。在各个实施例中，所述经修饰的B细胞经瘤内、静脉内、皮下或皮内施用。在各个实施例中，所述方法进一步包括施用检查点抑制剂。在各个实施例中，所述检查点抑制剂是选自由以下组成的组的检查点分子：PD
‑
1、PD
‑
L1、CTLA
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4、LAG3、TIM
‑
3和NKG2A蛋白。在各个实施例中，所述检查点抑制剂是单克隆抗体。
[0012]在各个实施例中，本专利技术涉及一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达嵌合受体，其中所述嵌合受体包括：(a)胞外结构域，其中所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域；(b)跨膜结构域；以及(c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域，其中所述经修饰的B细胞进一步能够表达有效载荷，其中所述有效载荷不在细胞表面上天然表达。在各个实施例中，所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的抗原或蛋白质。在各个实施例中，所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞和内皮细胞。在各个实施例中，所述B细胞表达多于一种CAR
‑
B受体构建体。在各个实施例中，所述CAR
‑
B受体包括多于一个胞外结合结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、抗体、或受体或配体的胞外结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GP3、ASGR1、ASGR2、肌聚糖蛋白、Corin、FAP和Her2。在各个实施例中，所述铰链结构域源自由以下组成的组：IgG、CD28和CD8。在各个实施例中，所述铰链结构域包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID No.27、29和31。在各个实施例中，所述胞质结构域包括对于B细胞而言天然的至少一个信号传导结构域。在各个实施例中，所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD79b(免疫球蛋白β本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达嵌合受体(CAR
‑
B)，其中所述嵌合受体包括：a)胞外结构域，其中所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域；b)跨膜结构域；以及c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域。2.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的至少一种抗原或蛋白质。3.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域识别至少一种抗原，所述至少一种抗原是分泌蛋白。4.根据权利要求3所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述分泌蛋白积聚在胞外基质中。5.根据权利要求2所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、内皮细胞、肝细胞、肺上皮细胞和成纤维细胞。6.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞表达多于一种CAR
‑
B受体构建体。7.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述CAR
‑
B受体包括多于一个胞外结合结构域。8.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、或全长抗体或抗体片段、或受体或配体的胞外结构域。9.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GPC3、ASGR1、ASGR2、肌聚糖蛋白、Corin、FAP、MUC1、CEA153、JAM
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1、LAF
‑
1和Her2。10.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述铰链结构域源自由以下组成的组：免疫球蛋白(例如，IgG、IgM)、CD28和CD8。11.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括对于B细胞受体而言是天然的至少一个信号传导结构域。12.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域，所述至少一个信号传导结构域是免疫球蛋白。13.根据权利要求1所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、MyD88、CD21、Syk、FYN、LYN、PI3K、BTK、PLCγ2、CD3ζ和BLNK。14.根据权利要求13所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括作为CD79a的结构域。15.根据权利要求13所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域进一步包括共刺激结构域。16.一种分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达和分泌有效载荷，其中所述有效载荷不在B细胞中天然表达或者以比在B细胞中天然表达的水平更高的水平表达。17.根据权利要求16所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述有效载荷是抗体或其片段。
18.根据权利要求17所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述抗体是分泌抗体或其片段。19.根据权利要求17所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述抗体是膜结合的。20.根据权利要求16所述的经修饰的B细胞，其中所述有效载荷选自以下的组：细胞因子、趋化因子、T细胞共刺激分子和检查点分子，所述组由以下组成：IL
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1、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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13、IL
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17、IL
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18、IL
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21、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、TSLP、CCL21、FLT3L、XCL1、LIGHT(TNFSF14)、OX40L、CD137L、CD40L、ICOSL、抗CD3抗体、CD47、TIM4
‑
FC、CXCL13、CCL21、CD80、CD40L、IFNαA2、LIGHT、4
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1BBL、MDGF(C19orf10)、FGF10、PDGF、集聚蛋白、TNF
‑
α、GM
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CSF、抗FAP抗体、抗TGF
‑
β抗体；TGF
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β陷阱、诱饵或其它抑制分子；抗BMP抗体；BMP陷阱、诱饵或其它抑制分子。21.根据权利要求16所述的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达多于一个有效载荷。22.根据权利要求16所述的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达多于1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个有效载荷。23.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求14所述的经修饰的B细胞。24.根据权利要求23所述的方法，其中瘤内、静脉内、皮下、皮内或在炎性病变内施用所述经修饰的B细胞。25.根据权利要求23所述的方法，其进一步包括在使用或不使用另外的化疗剂的情况下施用一种或多种检查点抑制剂。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述检查点抑制剂能够抑制选自由以下组成的组的检查点分子：PD
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1、PD
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L1、CTLA
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4、LAG3、TIM
‑
3和NKG2A。27.根据权利要求23所述的方法，其进一步包括施用T细胞共刺激分子。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述T细胞共刺激分子选自由以下组成的组：CD80、CD86、ICOSL、4
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1BBL、OX40L、CD27和LIGHT。29.一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达嵌合受体，其中所述嵌合受体包括：a)胞外结构域，其中所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域；b)跨膜结构域；以及c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域，其中所述经修饰的B细胞进一步能够表达有效载荷，其中所述有效载荷不在B细胞中天然表达。30.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的抗原或蛋白质。31.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域识别分泌的抗原或蛋白质。32.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、内皮细胞、肝细胞、肺上皮细胞和成纤维细胞。33.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞表达多于一种CAR
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B受体构建体。
34.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述CAR
‑
B受体包括多于一个胞外结合结构域。35.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、全长抗体、抗体片段、或受体或配体的胞外结构域。36.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GP3、ASGR1、ASGR2、肌聚糖蛋白、Corin以及Her2、FAP、MUC1、CEA153、JAM
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1和LFA
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1。37.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述铰链结构域源自由以下组成的组：免疫球蛋白(例如，IgG或IgM)、CD28和CD8。38.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括对于B细胞而言是天然的至少一个信号传导结构域。39.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域，所述至少一个信号传导结构域是免疫球蛋白。40.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、MyD88、CD21、Syk、FYN、LYN、PI3K、BTK、PLCγ2、CD3ζ和BLNK。41.根据权利要求40所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域包括作为CD79a(免疫球蛋白α)的结构域。42.根据权利要求41所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述胞质结构域进一步包括共刺激结构域。43.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述有效载荷是分泌抗体或膜结合抗体或其片段。44.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述有效载荷选自以下的组：细胞因子、趋化因子、T细胞共刺激分子和检查点分子，所述组由以下组成：IL
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1、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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13、IL
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17、IL
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18、IL
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21、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、TSLP、CCL21、FLT3L、XCL1、LIGHT(TNFSF14)、OX40L、CD137L、CD40L、ICOSL、抗CD3抗体、CD47、TIM4
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FC、CXCL13、CCL21、CD80、CD40L、IFNαA2、LIGHT、4
‑
1BBL、MDGF(C19orf10)、FGF10、PDGF、集聚蛋白、TNF
‑
α、GM
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CSF、抗FAP抗体、抗TGF
‑
β抗体；TGF
‑
β陷阱、诱饵或其它抑制分子；抗BMP抗体；BMP陷阱、诱饵或其它抑制分子。45.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达多于一个有效载荷。46.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达多于1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个有效载荷。47.根据权利要求29所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述经修饰的B细胞进一步编码至少一种选自由以下组成的组的蛋白质：CD79a(免疫球蛋白α)、CD79b(免疫球蛋白β)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、CD3ζ和MyD88的胞质结构域。48.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求29所述的经修饰的B细胞。49.根据权利要求48所述的方法，其进一步包括施用检查点抑制剂。50.根据权利要求48所述的方法，其中所述检查点抑制剂能够抑制选自由以下组成的
组的检查点分子：PD
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1、PD
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L1、CTLA
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4、LAG3、TIM
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3和NKG2A。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述检查点抑制剂是单克隆抗体。52.一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达嵌合受体，其中所述嵌合受体包括胞外结构域，其中所述胞外结构域包括铰链结构域和胞外结合结构域，其中所述胞外结合结构域不在B细胞上天然表达；并且其中所述胞外结合结构域能够识别所关注靶标。53.根据权利要求52所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述结合结构域是单链可变片段(scFv)、全长抗体、抗体片段、配体或受体的胞外结构域。54.根据权利要求53所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述结合结构域是scFv。55.根据权利要求52所述的分离的经修饰的B细胞，其中在本文中所述B细胞能够表达多于一个嵌合受体。56.根据权利要求52所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞进一步能够表达有效载荷。57.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求52所述的经修饰的B细胞。58.一种能够表达嵌合B细胞受体的核酸，其中所述嵌合受体包括：a)胞外结构域，其中所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域；b)跨膜结构域；以及c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域。59.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的抗原或蛋白质。60.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞外结合结构域识别作为分泌蛋白的抗原或蛋白质。61.根据权利要求58所述的核酸，其中所述分泌蛋白积聚在胞外基质中。62.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、全长抗体、抗体片段、或受体或配体的胞外结构域。63.根据权利要求58所述的核酸，其中所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、内皮细胞、肝细胞、肺上皮细胞或成纤维细胞。64.根据权利要求58所述的核酸，其中所述载体表达多于一个CAR
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B受体。65.根据权利要求58所述的核酸，其中所述CAR
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B受体表达多于一个胞外结合结构域。66.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GP3、ASGR1、AGSR2、肌聚糖蛋白、Corin、Her2、PAF1、MUC1、CEA153、JAM
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1和LFA
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1。67.根据权利要求58所述的核酸，其中所述铰链结构域源自由以下组成的组：免疫球蛋白结构域(例如，IgG或IgM)、CD28和CD8。68.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞质结构域包括对于B细胞受体而言是天然的至少一个信号传导结构域。69.根据权利要求58所述的核酸，其中所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD79b(免疫球蛋白β)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、MyD88、CD21、Syk、FYN、LYN、PI3K、BTK、PLCγ2、CD3ζ和BLNK。
70.根据权利要求69所述的核酸，其中所述胞质结构域包括作为CD79a(免疫球蛋白α)的结构域。71.根据权利要求69所述的核酸，其中所述胞质结构域进一步包括共刺激结构域。72.一种载体，其包括能够表达嵌合B细胞受体的核酸，其中所述嵌合受体包括：a)胞外结构域，其中所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域；b)跨膜结构域；以及c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域。73.根据权利要求72所述的载体，其中所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的抗原或蛋白质。74.根据权利要求72所述的载体，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：步行鱼治疗学公司，
类型：发明
国别省市：