一种快速检测兰科种子饱满率的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测兰科种子饱满率的方法，包括有如下步骤：取样；预处理；显微镜下镜检；饱满率检测；回收种子；其中，显微镜下镜检时采用冷光源从种子下方向上透射冷光源；解决了萌发检测或TZ染色检测饱满率的难度大、周期长等问题，本发明专利技术提供的检测方法能够快速、简便、高效、准确的检测兰科种子饱满率，且本方法检测的兰科种子未受损，可继续萌发或长期保存等使用；效果显著；为兰科种子饱满率的快速检测开辟了一条全新的技术路线。的快速检测开辟了一条全新的技术路线。的快速检测开辟了一条全新的技术路线。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测兰科种子饱满率的方法


[0001]本专利技术涉及种质资源保藏
，特别是一种快速检测兰科种子饱满率的方法。

技术介绍

[0002]根据《Flora of China》及相关文献记载，兰科有27500多种，我国有1723种。该科有许多种具有重要的观赏价值和药用价值，涉及艺术、文化、经济、医疗和日常生活的诸多方面。例如国兰，作为中国重要的传统兰花名品，深受国人喜爱；兜兰属（Paphiopedilum）植物花期长，是优良的花卉种质资源；石斛属（Dendrobium）植物均具较高的药用价值，其中石斛（Dendrobium nobile）是《中华人民共和国药典》记载的一种极为珍稀名贵的中药材，它不仅是脉络宁注射液的必需原料，还是数种中成药及保健品的有效组成部分；铁皮石斛（Dendrobium officinale）是中国重要的珍稀濒危药用植物资源，其茎入药，具有清热滋阴、润肺生津、益肾养胃、明目等功效。
[0003]然而，由于兰科植物的生活史中与共生真菌形成密切关系，使得兰科植物的繁衍对生境要求十分苛刻；同时，兰科植物的繁殖对其他生物（如传粉动物）的依赖性强，这些特点使得兰科植物对人类干扰和环境十分敏感。且由于其珍贵的观赏和药用价值，人为采挖严重，使其野生资源日益减少。上述各种复杂的原因最终导致目前很多兰科植物整体处于濒临灭绝的境地。已经明确的主要致濒致危因素是栖息地的过度开发与利用。在现有的兰科植物保护方法中，迁地保护被认为是最有效的方法之一，而种子库是最经济最有效的迁地保护方法之一，其最重要的前提条件是获得健康饱满的种子，因此寻找一种快速、高效、准确检测兰科种子饱满率和质量状况的方法就尤为重要了。
[0004]种子是兰科物种多样性保护和种质长期保存的重要材料，对其种子的储藏特性和种子长期保存方式进行系统的研究显得尤为重要，无论是种质资源收集保存、种子生物学研究、还是就地保护、迁地保护和研究利用等，都需要收集保存大量的兰科种子，在有限的空间中尽量保存较多的高质量种子是十分重要的。
[0005]但传统方式种子质量检测（萌发检测或TZ染色）难度大周期长，萌发极其困难，TZ染色率很难准确判断，因此急需寻找到一种适合检测兰科种子饱满率快速、准确的方法，解决在兰科种子收集、清理、萌发和保存过程中，种子质量状况问题。但与此同时，采用直接肉眼观察兰科种子形态是否饱满以检测种子质量是不现实的，因为兰科种子是世界上已知最小的种子，大多细如粉尘，如斑叶兰，它的5万粒种子只有0.025g重，1亿粒斑叶兰种子才50g重；它的种子长约110μm，重约0.5μg，对于如此微小的种子，即使在显微镜下进行观察也往往不能清楚呈现种子的内部状态导致检测种子是否饱满存在难度。
[0006]因而，探寻一种适用于兰科种子的快速检测其饱满率的方法对于其种子的长期保存、建立兰科种质资源库和完善兰科种质资源保存体系具备重要的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种快速检测兰科种子饱满率的方法。
[0008]本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种快速检测兰科种子饱满率的方法，包括有如下步骤：取样；预处理；显微镜下镜检；饱满率检测；回收种子；其中，显微镜下镜检时采用冷光源从种子下方向上透射冷光源；进一步的，所述取样步骤为，将种子放入取样盘内充分摇匀后，随机抽取2～4个种子样本，每个种子样本80～100粒种子；进一步的，所述预处理步骤为，将种子样本放在显微镜底盘或载玻片上，向显微镜底盘或载玻片上滴加生理盐水，静置2
‑
3min至种子浸湿，得待测样品；进一步的，所述显微镜下镜检步骤为，将待测样品放置在显微镜载物台上，打开下方的冷光源，选择放大倍数，调节焦距至种子形态清楚；进一步的，所述冷光源功率为30～50W，色温3200～6500K，光照度50000～120000Lx；进一步的，所述饱满率检测步骤为，计数一个样品中检测种子数、饱满种子数和空瘪种子数，并根据下式（Ⅰ）计算种子饱满率； （Ⅰ）；进一步的，所述取样步骤前，还包括有果实采集步骤；更进一步的技术方案是所述果实采集的时机为蒴果即将开裂时或种子刚开始散布时。
[0009]本专利技术具有以下优点：1、本专利技术采用改进的镜检方式，解决了萌发检测或TZ染色检测饱满率的难度大、周期长等问题，本专利技术提供的检测方法能够快速、简便、高效、准确的检测兰科种子饱满率，且本方法检测的兰科种子未受损，可继续萌发或长期保存等使用，效果显著；为兰科种子饱满率的快速检测开辟了一条全新的技术路线；2、本专利技术优选的，采用显微镜下镜检的方式，观察兰科种子的是饱满或空瘪，镜检过程中，将冷光源从种子下方向上透射，穿透种子，而人在种子上方观察，冷光源可以避免聚光过热损伤种子，而将冷光源从下往上穿透时，反射光线的传播路径向下，因而不再造成光线干扰，使得种子的形态能够清楚呈现在视界中，从检测结果上看，饱满兰科种子的种皮和胚之间的界线清楚分明，且胚的形态清楚，而干瘪兰科种子不能在种皮内观察到胚的结构；3、本专利技术优选的，取样时将种子放在取样盘内摇匀后，随机抽取样本，以有利于保证样品的均一性和取样的随机性；取3个样，每个样本80～100粒种子，有利于结果的准确性；4、本专利技术优选的，对种子进行预处理，将种子样本放在显微镜底盘或载玻片上，滴加生理盐水，生理盐水有利于维持种子细胞形态，避免观察过程中种子形态变化，同时生理盐水有利于使得种子质地更加均匀，增加透光性，有利于避免冷光源透过时由于团聚导致不清楚；
5、本专利技术优选的，打开位于载物台下方的冷光源，使得冷光源穿透种子后，选择放大倍数，调节焦距，直至清楚，冷光源功率为30～50W，色温3200～6500K，光照度50000～120000Lx冷光源可以避免聚光过热损伤种子，光照度过高导致种子泛白，不容易辨别饱满种子，光照度过高导致种子泛白，不容易辨别饱满种子，光照度过底透光不够，空瘪种子不易辨别；6、本专利技术优选的，提供了种子饱满率的计算方法，通过计算式，能够计算出一个样本中的种子饱满率，有利于为后续种子的保藏、萌发提供数据支撑，开辟了一条不需要萌发不需要TZ染色的种子检测技术路线；7、本专利技术优选的，在种子饱满检测过程中，并不会对种子造成任何的损伤，检测完成后的种子，还可以用于萌发、长期保存和形态拍摄等。
附图说明
[0010]图1 为硬叶兰采用采用实施例5的方法观察到的结果。
[0011]图2 为硬叶兰采用采用对比例1的方法观察到的结果。
[0012]图3 为硬叶兰采用采用对比例2的方法观察到的结果。
[0013]图4 为琉球叉柱兰采用采用实施例6的方法观察到的结果。
[0014]图5 为琉球叉柱兰采用采用对比例3的方法观察到的结果。
[0015]图6 为琉球叉柱兰采用采用对比例4的方法观察到的结果。
[0016]图7为实施例4的检测结果。
[0017]图8为空瘪种子的形态示意图。
具体实施方式
[0018]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测兰科种子饱满率的方法，其特征在于，包括有如下步骤：取样；预处理；显微镜下镜检；饱满率检测；回收种子；其中，显微镜下镜检时采用冷光源从种子下方向上透射冷光源；所述预处理步骤为，将种子样本放在显微镜底盘或载玻片上，向显微镜底盘或载玻片上滴加生理盐水，静置2
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3min至种子浸湿，得待测样品；所述显微镜下镜检步骤为，将待测样品放置在显微镜载物台上，打开下方的冷光源，选择放大倍数，调节焦距至种子形态清楚。2.根据权利要求1所述的一种快速检测兰科种子饱满率的方法，其特征在于：所述取样步骤为，将种子放入取样盘内充分摇匀后，随机抽取2～4个种子样本，每个种子样本80～...

【专利技术属性】
技术研发人员：何华杰，秦少发，亚吉东，黄莉，方云花，郭云刚，谭治刚，张荣桢，李涟漪，蔡杰，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：