一种检测玉米赤霉烯酮的拉曼光谱试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条及其制备方法。试纸条具体包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬。在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。所述结合垫与所述硝酸纤维素膜之间有搭接，所述硝酸纤维素膜与所述吸水垫之间有搭接；所述结合垫上包被有Au

【技术实现步骤摘要】
一种检测玉米赤霉烯酮的拉曼光谱试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种霉菌毒素残留的免疫化学速测技术，特别是涉及一种用于快速检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条及其制备方法。

技术介绍

[0002]玉米赤霉烯酮是玉米赤霉菌的代谢产物。玉米赤霉烯酮作为一种常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在，主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，可给畜牧场造成巨大经济损失。由于玉米赤霉烯酮较强的毒性，世界各国都高度重视对其的监控，并制定出严格的限量标准：欧盟规定谷物粉和麸皮中限量为75
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g/kg，我国在国家标准中规定谷物中玉米赤霉烯酮的限量为60
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g/kg。
[0003]现有的玉米赤霉烯酮检测方法主要有理化方法、ELISA方法、胶体金层析法等。理化方法前处理过程复杂、仪器化程度高、操作繁琐、效率低。ELISA法是利用酶标记物的竞争性免疫检测方法，被广为用作定性或半定量检测的快速筛查方法，虽然在一定程度上缩短了检测时间，但仍然需要专门的仪器（如酶标仪），操作过程仍较复杂。胶体金层析法可以满足现场快速的要求，但是只能定性检测无法得到定量结果。因此，如何提供一种玉米赤霉烯酮的快速检测新技术，克服上述技术缺陷，是本领域技术人员亟需解决的问题。
[0004]由于表面增强拉曼光谱技术(SERS)可检测低至单分子水平的目标物，是目前最灵敏的分析方法之一。具体将表面增强拉曼光谱与免疫分析技术进行结合，建立SERS免疫层析检测技术，不仅具有SERS的高灵敏性和光谱可区分性，还具有免疫分析的高特异性和便捷性。本专利技术将表面增强拉曼光谱技术与免疫层析技术相结合，开发了一种超灵敏的玉米赤霉烯酮表面增强拉曼光谱免疫层析检测新方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、操作简便，检测快速、准确并适合现场使用的用于检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条及其制备方法，填补目前尚未有玉米赤霉烯酮表面增强拉曼光谱免疫层析检测试纸条的空白。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条，包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬。在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。所述结合垫与所述硝酸纤维素膜之间有搭接，所述硝酸纤维素膜与所述吸水垫之间有搭接；所述结合垫上包被有Ag
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DTNB@Au
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玉米赤霉烯酮抗体溶液，所述硝酸纤维素膜上分别包被有构成检测线的玉米赤霉烯酮
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牛血清白蛋白（BSA）偶联物和构成质控线的兔抗鼠IgG。
[0007]本专利技术的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：1、制备纳米金颗粒溶液：称取氯金酸溶于超纯水中，得氯金酸溶液，加热，待氯金
酸溶液98℃时加入柠檬酸三钠溶液，继续加热后，冷却，得纳米金颗粒溶液（AuNPs）；2、制备纳米金颗粒表面修饰DTNB溶液：取步骤（1）制备的纳米金颗粒溶液，加入DTNB溶液，搅拌反应，离心，去除上清液，沉淀用超纯水混悬，得AuNPs
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DTNB溶液；3、银包裹AuNPs
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DTNB核壳结构的制备：取步骤（2）制备的AuNPs
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DTNB溶液和AgNO3溶液混合，反应，离心，沉淀用超纯水混悬，超声分散，得银包裹AuNPs
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DTNB核壳复合物（Au
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DTNB@Ag）溶液；4、拉曼免疫探针制备：取步骤（3）制备的Au
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DTNB@Ag溶液，加入碳酸钾溶液，再向溶液中加入玉米赤霉烯酮抗体，反应后，加入BSA溶液，反应，离心，沉淀用保存液混悬，得拉曼免疫探针（Au
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DTNB@Ag
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Ab）溶液；5、结合垫的包被：将结合垫浸泡于磷酸缓冲液后，将步骤（4）制备的Au
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DTNB@Ag
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Ab溶液均匀包被在结合垫上，封装备用；6、样品垫的处理：将样品垫浸泡于磷酸盐缓冲液，封装备用；7、硝酸纤维素膜的包被：用磷酸盐缓冲液将玉米赤霉烯酮
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BSA偶联物稀释，包被于硝酸纤维素膜作为检测线；用磷酸盐缓冲液将兔抗鼠IgG抗体稀释，包被于硝酸纤维素膜作为质控线，封装备用；8、试纸条的组装：在PVC背衬上按顺序依次粘附所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，切成3 mm宽的小条，真空封装，4~8℃保存。得到所述用于检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条。
[0008]与现有技术相比，本专利技术具有下列优点：l、本专利技术的检测试纸条，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短（10分钟）等优点。
[0009]2、本专利技术的检测试纸条可现场操作，检测成本低。
[0010]3、本专利技术的检测试纸条操作简便，不需由专业人员操作。
[0011]4、本专利技术的检测试纸条储存方便，对温度要求不高，在4~8℃下有效保存期可达一年；在室温下可保存六个月。
附图说明
[0012]图1附图为本专利技术提供的结构侧视示意图，其中，1
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PVC背衬、2
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样品垫、3
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结合垫、4
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硝酸纤维素膜、5
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吸水垫、T
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检测线、C
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质控线。
[0013]图2附图为本专利技术提供的结构俯视示意图。
[0014]图3附图为本专利技术提供的标准曲线图。
具体实施方式
[0015]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0016]本专利技术实施例公开了一种检测玉米赤霉烯酮的表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条及其制备方法。
[0017]实施例中未提及的原料、试剂均为常规市售渠道获得，所需设备均为常规试验设
备，例如，玉米赤霉烯酮抗原、抗体购自北京厚生正德科技有限公司；兔抗鼠IgG购自洛阳佰奥通实验材料中心，在此不再一一赘述。
[0018]实施例1本专利技术表面增强拉曼光谱免疫层析试纸条的结构如图1和图2所示，包括样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和PVC背衬1。在PVC背衬上依次连续粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合垫与硝酸纤维素膜之间有搭接，硝酸纤维素膜与吸水垫之间有搭接；结合垫上包被有Ag
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DTNB@Au
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Ab标记物，硝酸纤维素膜上分别包被有玉米赤霉烯酮
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BSA偶联物构成的检测线T和兔抗鼠I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
mol/L；所述BSA溶液质量浓度为10%，并调节终浓度至1%；所述反应均为：搅拌反应，时间30 min；所述离心：4℃，10000 rpm，时间10 min；所述保存液：0.02 mol/L硼酸钠缓冲液（pH7.4），含质量浓度为2% BSA，质量浓度为0.25% Proclin
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300。7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）所述磷酸缓冲液：0.0l M，pH 7.4，浸泡时间30 min，浸泡后于37℃烘干；所述Au
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DTNB@Ag
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Ab溶液经20倍稀释，包被在结合垫上，包被后还包括37℃烘干。8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）所述磷酸盐缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹明强，金涌，王玉峰，陈艳，薛强，殷宏，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：