一种人血清白蛋白残留量的检测方法技术

本发明专利技术涉及白蛋白检测，更具体地，本发明专利技术涉及一种人血清白蛋白残留量的检测方法。包括：标准曲线制备和样品检测；本发明专利技术提供一种检测方法，通过固定捕获抗体在微孔板，并加入含有待测的人血清白蛋白的标准品和标准样品和捕获抗体结合后，在一次加入检测抗体和酶标记物，通过检测抗体结合待测物和酶标记物，并进行显色后进行测试，具有好的检测能力，可对血清和血浆等含有复杂基质的样品中的残留白蛋白进行精确检测，得到的标准曲线在低白蛋白含量下也具有好的线性，可检测出2.5

【技术实现步骤摘要】
一种人血清白蛋白残留量的检测方法


[0001]本专利技术涉及白蛋白检测，更具体地，本专利技术涉及一种人血清白蛋白残留量的检测方法。

技术介绍

[0002]白蛋白是血浆中一种带有负电荷的大分子蛋白，其占血浆总蛋白含量的60％左右。人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)是人血浆中含量最丰富的蛋白质，它可以结合和运输内源性与外源性物质，其非糖基化的单链多肽包含585个氨基酸，分子量为66kD。具有维持血液渗透压、清除自由基、抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能，在生命活动中有着重要的意义。
[0003]目前人血清白蛋白的检测主要集中在尿微量白蛋白的检测，主要方法有：免疫比浊法、胶体金法、酶联免疫吸附法、板式化学发光法和磁微粒化学发光法。但免疫比浊和胶体金法存在明显的缺点，由于方法的局限性，其在低浓度范围内检测不准确，尿中白蛋白的含量必须达到一定浓度(≥30mg/L)才能保证其准确性。
[0004]而现在酶联免疫吸附法，板式化学发光法和磁微粒化学发光法等方法也存在明显的缺陷，其均需要固定化抗体，在整个检测过程中需要洗涤，也影响了低白蛋白含量检测的精度和可重复性，尤其是在检测血清和血浆等有复杂基质的样品时，更难以准确测得白蛋白含量。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术第一个方面提供了一种检测方法，包括：标准曲线制备和样品检测；
[0006]所述标准曲线制备依次包括捕获抗体孵育、标准品孵育、检测抗体孵育、酶标记物孵育、显色底物和终止液孵育，检测，得到人血清白蛋白质量浓度和光密度的标准曲线。
[0007]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述捕获抗体孵育包括将捕获抗体加入微孔板中孵育后，洗涤，加入封闭液，孵育、洗涤。
[0008]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述捕获抗体包括抗人血清白蛋白和缓冲液，所述稀释液中抗人血清白蛋白的质量浓度为1～4μg/mL。
[0009]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述缓冲液选自PBS缓冲液、GOOD
’
S缓冲液、碳酸盐缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
[0010]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述捕获抗体加入微孔板的用量为80～150μL/孔。
[0011]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述标准品孵育包括，捕获抗体孵育后，加入标准品孵育、洗涤。
[0012]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述检测抗体孵育包括，标准品孵育后，加入检测抗体孵育、洗涤。
[0013]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述酶标记物孵育包括，检测抗体孵育后，加入酶标记物孵育、洗涤。
[0014]作为本专利技术一种优选的技术方案，所述显色底物和终止液孵育包括酶标记物孵育后，加入显色底物孵育、洗涤，再加入终止液进行检测。
[0015]本专利技术第二个方面提供了一种所述的检测方法的应用，用于人血清白蛋白残留量的检测。
[0016]本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果：
[0017](1)本专利技术提供一种检测方法，通过固定捕获抗体在微孔板，并加入含有待测的人血清白蛋白的标准品和标准样品和捕获抗体结合后，在一次加入检测抗体和酶标记物，通过检测抗体结合待测物和酶标记物，并进行显色后进行测试，具有好的检测能力；
[0018](2)本专利技术提供的检测方法可对血清和血浆等含有复杂基质的样品中的残留白蛋白进行精确检测，得到的标准曲线在低白蛋白含量下也具有好的线性，可检测出2.5
‑
160ng/m L的低浓度残留白蛋白。
[0019](3)申请人发现，因为在检测过程中需要多次洗涤，影响低含量白蛋白检测的准确性，而本专利技术选择合适的检测试剂，可提高检测的准确性，以及板内重复性，具有低的空白值，可用于大规模白蛋白残留的检测。
附图说明
[0020]图1为实施例3洗涤3次时得到的标准曲线。
具体实施方式
[0021]参选以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本专利技术的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
[0022]如本文所用术语“由
…
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0023]连接词“由
…
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
…
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
[0024]当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
[0025]单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意
一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。
[0026]说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本专利技术并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本专利技术不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
[0027]此外，本专利技术要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
[0028]以下通过具体实施方式说明本专利技术，但不局限于以下给出的具体实施例。
[0029]本专利技术第一个方面提供了一种检测方法，包括：标准曲线制备和样品检测；
[0030]所述标准曲线制备依次包括捕获抗体孵育、标准品孵育、检测抗体孵育、酶标记物孵育、显色底物和终止液孵育，检测，得到人血清白蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测方法，其特征在于，包括：标准曲线制备和样品检测；所述标准曲线制备依次包括捕获抗体孵育、标准品孵育、检测抗体孵育、酶标记物孵育、显色底物和终止液孵育，检测，得到人血清白蛋白质量浓度和光密度的标准曲线。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述捕获抗体孵育包括将捕获抗体加入微孔板中孵育后，洗涤，加入封闭液，孵育、洗涤。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述捕获抗体包括抗人血清白蛋白和缓冲液，所述稀释液中抗人血清白蛋白的质量浓度为1～4μg/mL。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述缓冲液选自PBS缓冲液、GOOD
’
S缓冲液、碳酸盐缓冲液、Tris
‑
HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱灏，
申请(专利权)人：华夏源上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：