一种垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法技术

本发明专利技术公开了一种垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，采用两步法进行，具体包括如下步骤：(1)取垂花百合的鳞片作为外植体，消毒灭菌后接种到不定芽诱导培养基上培养，诱导获得小鳞茎；(2)将所述小鳞茎接种到鳞茎膨大培养基中培养，获得膨大鳞茎组培苗。所述不定芽诱导培养基为MS基本培养基+NAA 0.2mg/L+TDZ 0.5mg/L+BR 0.05mg/L+结冷胶4g/L+蔗糖30g/L。所述鳞茎膨大培养基为：MS基本培养基+结冷胶4g/L+蔗糖30g/L。本发明专利技术方法能够有效提高垂花百合试管苗增大倍数、为垂花百合资源保护、快速繁殖及利用奠定基础。快速繁殖及利用奠定基础。快速繁殖及利用奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及垂花百合快速诱导小鳞茎以及小鳞茎迅速膨大的方法。

技术介绍

[0002]垂花百合(Lilium cernuum)，是百合科百合属植物。鳞茎矩圆形或卵圆形，高4厘米，直径约4厘米；鳞片披针形或卵形，白色。茎高约65厘米，无毛。叶细条形。总状花序有花1
‑
6 朵；苞片叶状，条形，长约2厘米，顶端不加厚；子房圆柱形，长8
‑
10毫米，宽2毫米；花柱长1.5
‑
1.7厘米。花期7月。生长于草丛或灌木林中。喜较高地势，生长于有斜坡的疏松肥沃、排水良好的森林腐殖土壤，喜空气湿润。垂花百合是多年生球根花卉，植株低矮，是百合属中少有的淡紫红色，并且伴有香味，是一种珍贵的野生百合资源，具有良好的观赏价值和较强抗性，是育种的重要种质资源。因此，有必要应用离体培养技术对其扩繁，以利垂花百合资源的保存、研究和利用。植物组织培养是将植物体的一部分接种在培养基上，使其按预定目标发育成新植株，并且扩繁出更多的植株。植物组织培养由于周期短，增殖率高且能全年生产等优点，越来越多的应用于种苗生产。
[0003]垂花百合自然分布数量稀少，而且鳞茎相对较小，扦插繁殖效率很低，利用组织培养方法不仅能保持原种的优良特性，而且繁殖系数高。但百合试管苗在出瓶移栽过程中存活率低，容易重新感染病毒。采用试管内形成鳞茎的组培方法可提高成活率、降低污染和感染病毒的机率，有利于种质保存。目前，国内外对垂花百合组织的报道不多，且诱导效率和小鳞茎质量都不是很理想，其作用以及结果还不明确。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是提供一种
‘
垂花百合
’
鳞片快速诱导小鳞茎以及试管鳞茎膨大的最优方法，希望能够较好地提高诱导率以及降低成本保存种质资源，以期解决试管苗移栽成活率低的问题，达到百合组织培养实用化的目的。
[0005]本专利技术垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，采用两步法进行，具体包括如下步骤：
[0006](1)取垂花百合的鳞片作为外植体，消毒灭菌后接种到不定芽诱导培养基上培养，诱导获得小鳞茎；
[0007](2)将所述小鳞茎接种到鳞茎膨大培养基中培养，获得膨大鳞茎组培苗。
[0008]本专利技术所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其中，所述不定芽诱导培养基为MS基本培养基+NAA0.2mg/L+TDZ 0.5mg/L+BR 0.05mg/L+结冷胶4g/L+蔗糖 30g/L。
[0009]本专利技术所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其中，所述鳞茎膨大培养基为：MS基本培养基+结冷胶4g/L+蔗糖30g/L。
[0010]本专利技术所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其中，培养条
件为：培养基pH值5.8～6.0，培养温度25
±
2℃，每日光照16h以上，光照强度2000
‑
3000Lx。
[0011]本专利技术所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其中，所述外植体消毒灭菌步骤具体包括如下步骤：
[0012]选取垂花百合的鳞片为外植体，用含少量洗洁精的自来水浸泡10min，之后用自来水冲洗 20min，转至超净工作台进行灭菌处理，具体灭菌处理方法为：先用酒精消毒60s，再用20％二氯异氰尿酸钠处理40min，最后用无菌水冲洗4～6次，接种时，将消毒后的鳞片置于无菌培养皿中，用镊子将鳞片切成1cm*1cm大小，逐个接入固体MS培养基中，每瓶接种2
‑
3个鳞片，进行不定芽的诱导培养。
[0013]本专利技术垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法与现有技术不同之处在于：本专利技术对垂花百合诱导小鳞茎以及小鳞茎膨大的方法探索，能够有效提高垂花百合诱导时间和诱导率，做到高效低成本保存种质资源，以期解决试管苗移栽成活率低的问题，达到百合组织培养实用化的目的。
[0014]下面结合附图对本专利技术的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法作进一步说明。
附图说明
[0015]图1为本专利技术的垂花百合种球；
[0016]图2为本专利技术方法中的垂花百合培养过程示意图；其中：
‘
垂花百合
’
鳞片诱导小鳞茎(A)；转接到MS培养基，培养10d后，小鳞茎为(B)；20d后，小鳞茎膨大(C)，25d后，小鳞茎膨大(D)。
具体实施方式
[0017]9到10月选取生长健壮的垂花百合的种球(图1)，剥取中外层健康鳞片，用含少量洗洁 精的自来水浸泡10min，之后用自来水冲洗20min，转至超净工作台进行灭菌处理，具体灭菌 处理方法为：先用酒精消毒60s，再用20％二氯异氰尿酸钠处理40min，最后用无菌水冲洗4
‑
6 次，接种时，将消毒后的鳞片置于无菌培养皿中，用镊子将鳞片切成1cm*1cm大小，逐个接 入固体MS培养基中，每瓶接种2
‑
3个鳞片，进行不定芽的诱导培养。
[0018]用到的诱导培养基为：MS基本培养基+NAA0.2mg/L+TDZ 0.5mg/L+BR0.05mg/L+结冷胶4.0g/L+蔗糖30g/L，培养温度(25
±
2)℃，每日光照16h以上，光照强度2000
‑
3000Lx。接种时，将消毒后的鳞片置于无菌培养抿，用消毒后晾干后的镊子，逐个接入诱导培养基中，每瓶接种2
‑
3个鳞片，进行不定芽的诱导。培养温度25
±
2℃，外植体接种后进行光培养，16h 以上，光照强度为2000
‑
3000lx。30d后统计诱导率。
[0019]诱导率％＝不定芽诱导数/未污染接种总数
×
100％
[0020]结果：用20％二氯异氰尿酸钠浸泡40min效果最好，污染率低为20％，且成活率高达93。 33％。
[0021]如图2所示，
‘
垂花百合
’
鳞片诱导小鳞茎，17d后鳞片处开始有变化，23d后慢慢长成小鳞茎状；相比较添加NAA和6
‑
BA或者BA组合的培养基中，在含有TDZ、BR的培养基中，诱导时间较快，达到了快速诱导小鳞茎的效果，为接下来进行下一步实验节省一定的时间，并且诱导率高达96％。
[0022]将诱导出的小鳞茎接种到不添加任何激素的培养基后，培养10d后，小鳞茎开始变大，如图2中的B，再继续培养10d后，小鳞茎膨大至C。
[0023]消毒时间处理相比于其他处理的对比试验如下：
[0024][0025][0026]除表格中列举的区别外，其他试验条件均相同。
[0027]从不同消毒组合处理所得出：在对比例1中，将消毒剂时间延长至50min，污染率偏高，可知消毒时间不宜过长；将浓度设本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其特征在于：采用两步法进行，具体包括如下步骤：(1)取垂花百合的鳞片作为外植体，消毒灭菌后接种到不定芽诱导培养基上培养，诱导获得小鳞茎；(2)将所述小鳞茎接种到鳞茎膨大培养基中培养，获得膨大鳞茎组培苗。2.根据权利要求1所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其特征在于：所述不定芽诱导培养基为MS基本培养基+NAA 0.2mg/L+TDZ 0.5mg/L+BR 0.05mg/L+结冷胶4g/L+蔗糖30g/L。3.根据权利要求2所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其特征在于：所述鳞茎膨大培养基为：MS基本培养基+结冷胶4g/L+蔗糖30g/L。4.根据权利要求1所述的垂花百合鳞片快速诱导以及试管小鳞茎膨大的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜运鹏，张秀海，张铭芳，吴健，刘丹丹，陈绪清，杨凤萍，薛静，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：