一种负载艾拉莫德-铑纳米颗粒的PD-1纳米囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种负载艾拉莫德

【技术实现步骤摘要】
一种负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
‑
1纳米囊泡及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肺癌是全世界癌症相关死亡的最常见原因。每年有180万人被确诊患有肺癌，其中有160万人死于这种疾病。尽管在不同时期和不同地区存在差异，但肺癌总体的5年生存率仅为4
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17％。联合疗法是一个重要的治疗肺癌方案，它通过同时调节多种细胞信号通路，克服肿瘤的多重耐药，具有协同治疗作用，并降低全身毒性。
[0003]癌症免疫疗法的目的是利用人体免疫系统来消灭癌细胞。其中，针对程序性死亡
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1(programmed death
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1,PD
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1)和程序性死亡配体1(programmed death
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ligand 1,PD
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L1)通路的免疫检查点阻滞(immune checkpoint blockade,ICB)方法在部分类型的癌症如黑色素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌、膀胱癌等发挥了显著的临床效果。PD
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L1是PD
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1的配体，在癌细胞中表达上调，抑制效应T细胞。因此，通过抗体阻断PD
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1和PD
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L1之间的相互作用，可以增强T细胞对癌细胞的免疫应答。/>[0004]然而，抗PD
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1治疗并不是对所有类型的癌症都有效，仅仅只有少数患者从ICB疗法中受益。同时，现有的人源化抗体大多来自小鼠，需要复杂的设计和分离过程，增加了制作成本，导致免疫检查点阻滞抗体治疗的费用对许多患者来说仍然无法负担。因此，需要开发一种替代或者改进PD
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1/PD
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L1抑制剂的方法。
[0005]光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)由于其高选择性，可防止健康组织受损，有望替代传统方法来治疗不同类型的癌症。由于纳米材料具有独特的结构特征和功能特性，在光动力疗法中使用纳米材料比传统的光敏剂有多重优势。有意思的是在金属纳米颗粒的使用中发现，它能够吸收电磁辐射，并将这种能量转移到氧分子中以产生活性氧(ROS)，或者将其作为热量散发出去。尽管之前的报道已经证明了Rh衍生物具有作为抗肿瘤药物的能力，但据我们所知，还没有关于Rh纳米颗粒作为光敏剂在光动力治疗中的潜在应用的研究。
[0006]此外，艾拉莫德是一种新型的抗风湿病药物，目前在中国和日本广泛使用。以往的研究表明，艾拉莫德具有抗炎作用。在体外实验中，艾拉莫德能降低单核巨噬细胞、滑膜成纤维细胞和肺泡巨噬细胞中白细胞介素
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6(IL
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6)、肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)、白细胞介素
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1(IL
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1)和白细胞介素
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8(IL
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8)的表达。

技术实现思路

[0007]针对目前现有技术存在的单一疗法效果不佳的缺陷和不足，本专利技术提供了一种工程化细胞膜来源表达PD
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1的纳米囊泡(PD
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1NVs)，它通过抑制PD
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1/PD
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L1信号轴来增强癌症免疫疗法，本专利技术以PD
‑
1仿生纳米囊泡为承药载体，分别装载艾拉莫德(IGU)作为化疗剂
和铑纳米颗粒(Rh
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NPs)作为光热剂与光敏剂。
[0008]本专利技术的第一个目的在于提供一种负载艾拉莫德
‑
铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡，以PD
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1纳米囊泡为承药载体，包裹艾拉莫德(IGU)和铑纳米颗粒(Rh
‑
NPs)。
[0009]本专利技术的第二个目的在于提供了上述负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡的制备方法。
[0010]为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0011]一种负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
‑
1纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：
[0012]S1构建稳定表达PD
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1的细胞，收集细胞并将其悬浮于分离缓冲液中，经均质研磨后离心收集上清液，上清液再经离心弃上清得到质膜沉淀，质膜沉淀经洗涤纯化，超声处理后采用聚碳酸酯膜挤出器挤压，得到纳米囊泡；
[0013]S2采用电穿孔技术将铑纳米颗粒和艾拉莫德引入步骤S1所得纳米囊泡。
[0014]优选地，步骤S1所述稳定表达PD
‑
1的细胞为HEK293T、HepG2、Huh
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7、Hepa1
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6、SK
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Hep
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1、淋巴细胞等中的任意一种。
[0015]优选地，步骤S2所述纳米囊泡：艾拉莫德：铑纳米颗粒的用量比1:1:2。
[0016]本专利技术的第三个目的在于提供了上述负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡在制备肿瘤治疗药物中的应用。
[0017]优选地，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、黑色素瘤、结直肠癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌和神经母细胞瘤。
[0018]更优选地，所述肿瘤为肺癌。
[0019]优选地，所述药物通过抑制肿瘤细胞增殖治疗肿瘤。
[0020]优选地，所述药物通过抑制肿瘤细胞转移治疗肿瘤。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0022]本专利技术合成的细胞膜来源的纳米囊泡负载IGU和Rh
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NPs(IGU
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Rh
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PD
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1NVs)具有抗肿瘤生长和抗肿瘤转移的作用。首先，该药物表达PD
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1受体，通过破坏PD
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1/PD
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L1免疫抑制轴增强癌症免疫疗法；其次，IGU通过抑制AKT/mTOR通路提供化疗功能；最后，Rh通过JNK/ERK通路进行光热治疗抑制肿瘤生长。因此，该联合疗法展现出良好的临床应用前景。
附图说明
[0023]图1为IGU
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Rh
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PD
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1NVs合成的示意图，图中标注数字的说明：1在细胞膜上工程化表达小鼠PD
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1受体的HEK 293T细胞系；2是收获表达PD
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1受体的细胞膜；3是通过挤压制备表达PD
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1的囊泡；4是将IGU和Rh
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NPs载入到PD...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡，其特征在于，以PD
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1纳米囊泡为承药载体，包裹艾拉莫德和铑纳米颗粒。2.一种权利要求1所述负载艾拉莫德
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铑纳米颗粒的PD
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1纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、表达PD
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1细胞膜来源的纳米囊泡的制备：构建稳定表达PD
‑
1的细胞，收集细胞并将其悬浮于分离缓冲液中，经均质研磨后离心收集上清液，上清液再经离心弃上清得到质膜沉淀，质膜沉淀经洗涤纯化，超声处理后采用聚碳酸酯膜挤出器挤压，得到纳米囊泡；S2、采用电穿孔技术将铑纳米颗粒和艾拉莫德引入步骤S1所得纳米囊泡。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述稳定表达PD
‑
1的细胞为HEK293T、HepG2、Hu...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄曦，穆罕默德，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：