一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法技术

本申请公开了一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，包括以下步骤；S1、配置胚胎培养液，所述胚胎培养液包括5mMNaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl2和0.33mM MgSO4，收集并挑选健康的斑马鱼胚胎，将斑马鱼胚胎放置于培养液中进行培养；S2、准备待测试溶液，将配置好的待测试溶液一一对应加入到含有胚胎的培养液中，对受精时间为72小时的胚胎的心率进行测试，对受精120小时后胚胎的成活率和孵化时间进行测定；S3、对受精120小时的斑马鱼幼鱼的活性氧含量、超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽含量进行测定。本申请能够较短的周期内得出纳米粒子和表面改性剂复合后的毒性影响。面改性剂复合后的毒性影响。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法


[0001]本申请涉及一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法。

技术介绍

[0002]纳米颗粒具有比表面积大、性能优异等特点，被广泛应用于生物材料、医疗材料等领域中。但是由于部分纳米粒子和基体的相容性不好，因此通常都会使用表面活性剂对纳米粒子的表面进行修饰，经过表面活性剂改性后可以进一步增强纳米粒子的功能并提高纳米粒子和基体的相容性，使得改性后的纳米粒子能够更广泛的应用于医药、食品技术等领域中。
[0003]为了提高使用的安全性和健康性，需要对纳米颗粒和表面活性剂复合后的安全性进行评价，目前对于一些物质的安全性主要有体内和体外两种方式进行试验，体外通常为细胞培养或者生化试验，但是由于该方法不能够模拟生物体的代谢、吸收等问题，结果可靠性差。体内试验则是进行活体试验，利用小白鼠、兔子、猴子等来进行试验，虽然和体外试验相比具有更好的可靠性，但是上述的动物活体试验周期较长，成本高。

技术实现思路

[0004]本申请提供一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法。
[0005]本申请采用如下的技术方案：一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，包括以下步骤；S1、配置胚胎培养液，所述胚胎培养液包括5mMNaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl2和0.33mM MgSO4，收集并挑选健康的斑马鱼胚胎，将斑马鱼胚胎放置于培养液中进行培养；S2、准备待测试溶液，将配置好的待测试溶液一一对应加入到含有胚胎的培养液中，对受精时间为72小时的胚胎的心率进行测试，对受精120小时后胚胎的成活率和孵化时间进行测定；S3、对受精120小时的斑马鱼幼鱼的活性氧含量、超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽含量进行测定。
[0006]通过采用上述技术方案，配置好培养液，斑马鱼的胚胎放置培养液中进行培养成长，将待测试的物质配置成溶液，并添加到含有胚胎的培养液中，对培养的孵化时间和成活率进行测定，通过成活率可以看出待测试溶液对培养的生存是否造成影响。斑马鱼胚胎到成为幼鱼的时间短，从而能够大大缩短试验的时间周期，且斑马鱼养殖简单可以降低试验成本。对受精120小时后的斑马鱼幼鱼活性氧含量、超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽含量、过氧化氢酶含量水平进行测试，可以看出待测试溶液对生物体的一些安全性影响。
[0007]可选的，所述待测试溶液包括纳米粒子溶液、表面活性剂溶液以及纳米粒子和表面活性剂混合在一起的溶液。
[0008]通过采用上述技术方案，待测试溶液包括纳米粒子溶液、表面活性剂溶液以及纳米粒子和表面活性剂混合在一起的溶液，从而可以看出三个不同的溶液对斑马鱼幼鱼的影
响，从而得到三个溶液使用的安全性。
[0009]可选的，所述纳米粒子为沸石咪唑酯骨架纳米颗粒。
[0010]可选的，所述表面活性剂为氯化十六烷基吡啶。
[0011]可选的，所述斑马鱼的胚胎通过如下方法选择；将3只雌性斑马鱼和2只雄性斑马鱼放入产卵箱中，并用隔板将雌性斑马鱼和雄性斑马鱼隔开，次日取走隔板，进行自然交配并收集受精卵，受精卵用培养液清洗三次后放置于培养皿中。
[0012]通过采用上述技术方案，能够制备得到所需要的斑马鱼胚胎，并且再进行收集和筛选，从而能够获得健康的胚胎用于试验。
[0013]可选的，在步骤S3中，随机选择受精120小时的斑马鱼幼鱼，并将斑马鱼幼鱼放入24孔板中，每个孔对应一只幼鱼，每个孔中添加有培养液和不同的待测试溶液，将孔板循环放入黑暗中和光照中，并记录幼鱼的平均游速。
[0014]通过采用上述技术方案，斑马鱼幼鱼的平均游速能够体现出环境溶液中的毒性物质或者污染物质，对生物体影响越大，则安全性越低，因此能够更好的评价待测试溶液对生物体的安全性。
[0015]可选的，所述待测试溶液包括30mg/L的纳米粒子溶液、60mg/L的纳米粒子溶液、20μg/L的表面活性剂溶液、30mg/L纳米粒子溶液和20μg/L表面活性剂溶液的混合液，以及60mg/L纳米粒子溶液和20μg/L表面活性剂溶液的混合液。
[0016]综上所述，本申请包括以下至少一种有益效果：1.通过配置纳米粒子和表面活性剂的混合液，并将斑马鱼胚胎暴露于混合液中，从斑马鱼幼鱼的成活率以及一些活性氧含量，超氧化物歧化酶等含量，可以推测出混合液的安全性的影响。
具体实施方式
[0017]实施例1准备斑马鱼的受精卵胚胎；将3只成年的雌性斑马鱼和2只成年的雄性斑马鱼放入产卵箱中，并且使用隔板将雌性斑马鱼和雄性斑马鱼隔开，次日移开隔板，并且开灯促进其排卵，在排卵15分钟后将受精卵取出，并将受精卵放置于培养皿中。培养皿中添加有培养液，培养液用5mMNaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl2和0.33mM MgSO4配置得到。受精卵放入培养液中后并观察受精卵的形态，将健康的受精卵留下用于后续的试验。
[0018]用去离子水配置30mg/L的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒粒子溶液，并搅拌均匀，在培养皿中添加培养液和20mL的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒粒子溶液，将50个健康的受精卵放入到培养皿中，环境温度为28℃并且进行14小时的光照环境和10小时的黑暗条件，培养皿中的液体进行每天的更换，记录培养皿中受精129小时后的受精卵的成活率和平均孵化时间。并且分别随机选取6个受精卵受精72小时的受精卵，测定其心率。
[0019]在培养皿中随机选取8只受精120小时的斑马鱼幼鱼，并将其放入孔板中，每个孔放置一个斑马鱼幼鱼，在每个孔中添加有培养液和800μL的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒粒子溶液，然后将孔板交替放置在10分钟黑暗的环境中，和10分钟的光亮环境中，通过斑马鱼行为轨迹跟踪系统记录斑马鱼幼鱼的平均游速。
[0020]将受精时间为120小时的斑马鱼幼鱼采用夹心酶联免疫吸附法(Sandwich
‑
ELISA)，对活性氧含量、超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽含量进行测定。
[0021]实施例2本实施例和实施例1中的步骤和工艺均相同，不同之处在于待测试溶液浓度的不同，本实施例中待测试溶液为60mg/L的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒粒子溶液。
[0022]实施例3本实施例和实施例1中的步骤和工艺均相同，不同之处在于未添加有待测试溶液。
[0023]实施例4本实施例和实施例1中的步骤和工艺均相同，不同之处在于待测试溶液浓度的不同，本实施例中待测试溶液为20μg/L的氯化十六烷基吡啶溶液。
[0024]实施例5本实施例和实施例1中的步骤和工艺均相同，不同之处在于待测试溶液浓度的不同，本实施例中待测试溶液为30mg/L的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒粒子溶液和20μg/L的氯化十六烷基吡啶溶液的混合液。
[0025]实施例6本实施例和实施例1中的步骤和工艺均相同，不同之处在于待测试溶液浓度的不同，本实施例中待测试溶液为60mg/L的沸石咪唑酯骨架纳米颗粒溶液和20μg/L的氯化十六烷基吡啶溶液的混合液。
[0026]对实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤；S1、配置胚胎培养液，所述胚胎培养液包括5mM NaCl、0.17mM KCl、0.43mM CaCl2和0.33mM MgSO4，收集并挑选健康的斑马鱼胚胎，将斑马鱼胚胎放置于培养液中进行培养；S2、准备待测试溶液，将配置好的待测试溶液一一对应加入到含有胚胎的培养液中，对受精时间为72小时的胚胎的心率进行测试，对受精120小时后胚胎的成活率和孵化时间进行测定；S3、对受精120小时的斑马鱼幼鱼的活性氧含量、超氧化物歧化酶含量、谷胱甘肽含量、过氧化氢酶含量进行测定。2.根据权利要求1所述的一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，其特征在于，所述待测试溶液包括纳米粒子溶液、表面活性剂溶液以及纳米粒子和表面活性剂混合在一起的溶液。3.根据权利要求2所述的一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，其特征在于，所述纳米粒子为沸石咪唑酯骨架纳米颗粒。4.根据权利要求3所述的一种纳米粒子和表面活性剂复合毒性的评价方法，其特征在于，所述表面活性剂为氯化十六烷基吡啶。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱旭春，王思静，刘蕾，陈晨，荣新山，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：