益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术证实了益生菌囊泡具备良好的泡沫巨噬细胞靶向能力及调节能力，并进一步阐述了调节巨噬细胞的机制：

【技术实现步骤摘要】
益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

技术介绍

[0002]动脉粥样硬化(AS)是一种脂质驱动的慢性血管炎症性疾病，动脉粥样硬化(AS)是心脑血管疾病的常见病因和病理生理基础，由它引起的心肌梗塞和中风是导致人类死亡的主要原因。近年来，AS及其相关疾病的防治已经取得了很大进展，但由于AS发病机制较复杂，其早期诊治仍是现代医学面临的严峻挑战。
[0003]巨噬细胞是AS损伤期间最重要和最丰富的免疫细胞。巨噬细胞在从AS损伤到AS斑块破裂的每一个环节中都发挥着至关重要的作用。巨噬细胞有多种分化来源，循环血液中的单核细胞是巨噬细胞穿过血管壁进入组织的主要来源。发病假说如下，血脂升高等因素会导致内皮损伤，内皮细胞分泌炎症因子和趋化因子，如单核细胞趋化因子(MCP)，单核细胞粘附、聚集并迁移至内皮下，分化为巨噬细胞；在清道夫受体SR
‑
A、CD36等介导下，巨噬细胞摄取氧化的低密度脂蛋白(ox
‑
LDL)并在细胞内蓄积；细胞内胆固醇负荷增加导致脂质堆积，巨噬细胞转化为泡沫细胞，形成脂质条纹、动脉粥样硬化斑块等病理变化。因此，巨噬细胞是AS发展的“关键驱动力”，影响斑块稳定性和AS结果。
[0004]理论上，如果能够调节巨噬细胞，就可以有效抑制动脉粥样硬化的进展。CANTOS研究首次证明抗炎药在动脉硬化性心血管疾病治疗领域具有巨大的应用价值。然而，最近发表在哇塞钱a
>’
h
’
y
’
gu
’
t新英格兰杂志上的CIRT研究结果表明，使用广谱抗炎药甲氨蝶呤治疗并不能降低动脉硬化性心血管疾病的死亡率。因此，寻找靶向和调控巨噬细胞的药物可以作为新的突破口，引领未来AS防治研究的新方向，具有重要的科学价值和社会意义。
[0005]纳米颗粒在过去几十年里被广泛用于肿瘤的治疗，由于动脉粥样硬化斑块部位表现出类似于实体瘤的高通透性和滞留性效应，因此以纳米颗粒为基础的解决方案为动脉粥样硬化的治疗提供了新思路。广泛的研究表明，纳米粒子显著改善了药物治疗剂的药代动力学特征和化学稳定性，例如小分子药物、多肽等。与单独的游离药物相比，纳米治疗剂还可以减少脱靶和全身副作用。
[0006]细胞外囊泡已被证明是理想的纳米载体，目前已进入多项临床试验。不同来源的细胞外囊泡具有不同的功能，益生菌来源的囊泡(OMV)被认为具有抗炎功能和免疫调节特性，如OMV可调节肠道免疫细胞抑制炎症性肠病。此外，一些研究初步阐明了OMV可以调节巨噬细胞抑制炎症。具体来说，OMV诱导抗炎细胞因子IL
‑
10以及免疫调节细胞因子IL
‑
1β和GM
‑
CSF的分泌，纠正M1和M2巨噬细胞之间的失衡，从而改善过敏性皮肤炎。与普通的炎症性疾病不同，动脉粥样硬化疾病中的巨噬细胞通常存在脂质代谢障碍，OMV在动脉粥样硬化巨噬细胞中扮演的角色尚不清楚。

技术实现思路

[0007]本专利技术使用来自益生菌菌株鼠李糖乳杆菌的囊泡(OMV)，探讨了OMV作为载体在动脉粥样硬化中的应用及功能。体外实验和NIRF成像用于检测OMV靶向巨噬细胞的能力，生物信息学和分子生物学实验初步解释了OMV调控巨噬细胞抑制动脉粥样硬化的机制。本专利技术将为动脉粥样硬化疾病的诊治提供新的载体和思路。
[0008]本专利技术提供了益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
[0009]优选地，所述益生菌囊泡来自于益生菌。
[0010]更优选地，所述益生菌为鼠李糖乳杆菌。
[0011]更优选地，所述益生菌囊泡的制备过程如下：鼠李糖乳杆菌48hMRS肉汤培养物离心后，将上清液在PBS中洗涤，获得的囊泡在PBS中再次悬浮、过滤，并储存在
‑
80℃的PBS中。
[0012]更优选地，所述鼠李糖乳杆菌48hMRS肉汤培养物在600g离心30min，后100000
×
g离心70min。
[0013]更优选地，所述PBS中洗涤条件为：4℃、100000
×
g。
[0014]更优选地，所述过滤是利用0.22μm过滤器过滤。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术证实了OMV具备良好的泡沫巨噬细胞靶向能力及调节能力，并进一步阐述了调节巨噬细胞的机制：
①
上调转录因子NR1H3，促进ABCA1表达，促进脂质流出；
②
促进巨噬细胞向M2型极化。总之，OMV所提供的泡沫巨噬细胞靶向能力与巨噬细胞功能调控相结合，对动脉粥样硬化具有显著的治疗作用，本专利技术为治疗动脉粥样硬化提供了理想的纳米载体和新方法。
附图说明
[0017]图1为实施例1中OMV的特征图，其中(A)分离益生菌囊泡的示意图。(B)OMV的透射电镜图像和水合粒径。(C)7天内OMV在生理盐水中的平均水合粒径(n＝3)。(D)7天内OMV在生理盐水中的平均zeta电位(n＝3)。(E)OMV装载ICG示意图。(F
‑
I)流式分析OMV@ICG以不同浓度与THP
‑
1+PMA或THP
‑
1+PMA+oxLDL孵育不同时间。(J)OMV@ICG分别与THP
‑
1+PMA、THP
‑
1+PMA+oxLDL孵育后的共聚焦成像图。(n＝3，比例尺＝50μm)。
[0018]图2为实施例1中OMV在动脉粥样硬化小鼠中的靶向递送多个检测结果，其中(A)动脉粥样硬化小鼠的成像示意图。(B)尾静脉注射ICG或OMV@ICG后各组织的近红外荧光(NIRF)成像。(C)尾静脉注射ICG或OMV@ICG后主动脉的近红外荧光成像。(D)动脉粥样硬化病变的HE染色和油红O染色，以及动脉粥样硬化斑块中累积ICG的荧光图像。(E)动脉粥样硬化斑块中累积ICG的荧光信号与FITC标记的巨噬细胞共定位图像。
[0019]图3为实施例1中OMV对动脉粥样硬化小鼠的疗效结果图，其中(A)动脉粥样硬化小鼠的分组及治疗过程示意图。(B)治疗后主动脉组织的体外NIRF图像。(C)注射后2小时主动脉中积累的ICG荧光信号的定量数据。(D)主动脉窦部位油红O染色。(E
‑
F)主动脉窦粥样硬化病变的HE染色和油红O染色。(G)油红染色定量分析。(H)小鼠模型主动脉根部切片动脉粥样硬化斑块中累积ICG的荧光图像。(I)主动脉切片的masson染色。(J)不同处理后小鼠血液中T
‑
CHO、TG、HDL
‑
C和LDL
‑
C的变化。(n＝5，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001)。
[0020]图4为实施例1中OMV治疗的体内安全性检测结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.益生菌囊泡在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述益生菌囊泡来自于益生菌。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述益生菌为鼠李糖乳杆菌。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述益生菌囊泡的制备过程如下：鼠李糖乳杆菌48h MRS肉汤培养物离心后，将上清液在PBS中洗涤，获得的囊泡在PBS中再次悬浮、过滤，并储存在
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：景伯萍，谢明星，张丽，郭丰，谢雨霁，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：