一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法，属于药物分析领域。所述方法包括以下步骤：供试品溶液的制备、混合对照品溶液的制备、阳性样品溶液的制备、HPLC检测；所述六种成分为芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6

【技术实现步骤摘要】
一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法


[0001]本专利技术属于药物分析领域，涉及一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法。

技术介绍

[0002]黄芪桂枝五物汤由黄芪、桂枝、芍药、生姜、大枣五味中药材制成，主要用于治疗以肢体麻木，自汗浮肿为特征的疾病。适用于肌肉疏松，虚胖，皮肤缺乏弹性，腹部松软，下肢多有浮肿的患者，一般会伴有乏力，头晕，胸闷，气短，心悸等症状。
[0003]经典名方的物质基准是经典名方复方制剂的研究与开发中的关键环节，承接了经典名方的古法制备工艺和现代制剂工艺，含量测定是控制物质基准质量的主要方法。目前没有针对黄芪桂枝五物汤物质基准进行多成分含量测定的报道或专利，大多是黄芪桂枝五物汤汤剂或颗粒的多成分含量测定。
[0004]文献(HPLC法同时测定黄芪桂枝五物汤中6种有效成分的含量[J].沈阳药科大学学报,2022,39(7):791
‑
797)报道了黄芪桂枝五物汤汤剂同时测定六种成分含量的方法，以上六种成分具体是黄芪、桂枝、白芍中所含的芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、肉桂酸和刺芒柄花素。
[0005]中国专利CN 109521106 A公开了一种同时检测黄芪桂枝五物颗粒中四种成分含量的方法，所述四种成分为芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、桂皮醛、6
‑
姜辣素，该方法包括将待测样品用提取溶剂30～80％甲醇提取，提取液过滤后直接上高效液相色谱仪进行检测的步骤。以上专利能同时检测出黄芪桂枝五物颗粒中四种物质的含量，但同时测定的指标成分较少，难以全面表征黄芪桂枝五物颗粒物质基准的质量。
[0006]因此，有必要探索一种重复性、稳定性、精密度高，专属性强的检测黄芪桂枝五物汤物质基准中各成分含量的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种重复性、稳定性、精密度高、专属性强的可同时检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0009]提供了一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备、混合对照品溶液的制备、阳性样品溶液的制备、HPLC检测；所述六种成分为芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6
‑
姜辣素。
[0010]进一步地，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：
[0011](1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣煎煮；
[0012](2)将步骤(1)中得到的煎煮液过滤，滤液浓缩、冻干，即得黄芪桂枝五物汤物质基准样品；
[0013](3)取步骤(2)中得到的样品，加入甲醇，称重、超声、补重、过滤，取续滤液，即得供
试品溶液。
[0014]进一步地，步骤(1)中所述黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣的重量比为8
‑
9：8
‑
9：8
‑
9：16
‑
17：6
‑
8。
[0015]进一步地，步骤(1)中所述煎煮包括以下步骤：加水1100
‑
1300mL，煮至出液350
‑
450mL；优选地，加水1200mL，煮至出液400mL。
[0016]进一步地，步骤(3)中所述样品、甲醇的用量比为0.5
‑
1.5g：20
‑
30mL。
[0017]进一步地，所述HPLC检测中流动相为乙腈和甲酸溶液，所述甲酸溶液中甲酸的体积分数为0.1％
‑
0.3％。
[0018]进一步地，所述HPLC检测的梯度洗脱程序为：0
‑
7min，5％
→
12％乙腈；7
‑
20min，12％
→
19％乙腈；20
‑
30min，19％
→
30％乙腈；30
‑
45min，30％
→
70％乙腈；45
‑
50min，70％乙腈。
[0019]进一步地，所述HPLC检测中流速为0.5
‑
1.5mL
·
min
‑1，柱温为20
‑
30℃，进样量为15
‑
25μL，检测波长为250
‑
280nm。
[0020]进一步地，所述混合对照品溶液的制备包括以下步骤：取芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6
‑
姜辣素对照品，加入甲醇溶解，即得混合对照品溶液。
[0021]进一步地，所述混合对照品溶液中芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6
‑
姜辣素的重量比为1.1
‑
1.2：6.0
‑
6.1：0.07
‑
0.08：0.02
‑
0.03：0.10
‑
0.11：0.2
‑
0.3。
[0022]上述步骤中所用到的甲醇体积分数均为50％。
[0023]在具体的实施方式中：
[0024](1)供试品溶液的制备：
[0025]根据《金匮要略》原文记载，进行处方考证，根据考证结果及国家中医药管理局发布的《古代经典名方关键信息表(7首方剂)》，将一两折算为13.8g，大枣一枚为3g。取黄芪41.4g、桂枝41.4g、白芍41.4g、生姜82.8g、大枣36g，加水1200mL，煮至出液400mL，200目尼龙滤布趁热滤过，70℃减压浓缩，冻干，即得黄芪桂枝五物汤物质基准样品。精密称取冻干粉约1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加体积分数为50％甲醇25mL，称重，超声(功率250W，频率40kHz)30分钟，补重，滤过，取续滤液，即得。
[0026](2)混合对照品溶液的制备：
[0027]取芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6
‑
姜辣素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，用体积分数为50％甲醇溶解稀释并定容，得浓度分别为1.168、6.044、0.07320、0.02861、0.1012、0.2463mg
·
mL
‑1的混合对照品溶液。
[0028](3)阴性样品溶液的制备：
[0029]按供试品溶液的制备方法，分别制备缺黄芪、缺桂枝、缺白芍、缺生姜的阴性样品溶液。
[0030](4)HPLC检测：
[0031]Thermo Hypersil GOLD C18(4.6mm
×
250mm，5μm)色谱柱；以乙腈(A)
‑
0.2％甲酸溶液(B)为流动相，梯度洗脱(0
‑
7min，5％
→
12％A；7
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：供试品溶液的制备、混合对照品溶液的制备、阳性样品溶液的制备、HPLC检测；所述六种成分为芍药内酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、肉桂酸和6
‑
姜辣素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：(1)取黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣煎煮；(2)将步骤(1)中得到的煎煮液过滤，滤液浓缩、冻干，即得黄芪桂枝五物汤物质基准样品；(3)取步骤(2)中得到的样品，加入甲醇，称重、超声、补重、过滤，取续滤液，即得供试品溶液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣的重量比为8
‑
9：8
‑
9：8
‑
9：16
‑
17：6
‑
8。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述煎煮包括以下步骤：加水1100
‑
1300mL，煮至出液350
‑
450mL。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述样品、甲醇的用量比为0.5
‑
1.5g：20
‑
30mL。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC检测中流动相为乙腈和甲酸溶液，所述甲酸溶液中甲酸的体积分数为0.1％
‑
0.3％。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述HPLC检测的梯度洗脱程序...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明，詹家辉，黎柳冰，卢其福，陈世斌，周立，
申请(专利权)人：广州白云山潘高寿药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：