治疗癌症的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及嵌合结合剂和包含所述嵌合结合剂的组合物。本发明专利技术还涉及编码嵌合结合剂的多核苷酸以及包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及使用嵌合结合剂介导上皮癌细胞的抗体依赖性细胞毒性的方法和治疗上皮细胞癌的方法。细胞癌的方法。细胞癌的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗癌症的组合物和方法
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求2020年4月23日提交的美国临时申请第63/014,550号的权益，其全部内容通过引用并入本文中。


[0003]本专利技术涉及嵌合结合剂和包含所述嵌合结合剂的组合物。本专利技术还涉及编码嵌合结合剂的多核苷酸以及包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术还涉及使用嵌合结合剂介导上皮癌细胞的抗体依赖性细胞毒性的方法和治疗上皮细胞癌的方法。

技术介绍

[0004]抗体是与特定抗原结合的蛋白质。被批准用于癌症治疗的单克隆抗体(mAb)和基于mAb的试剂包括针对以下的一些：恶性B细胞和浆细胞(CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD52、CD79B、SLAMF7)、上皮癌细胞(EpCAM、EGFR、HER2、VEGFR2、结合素
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4)、急性骨髓性白血病(CD33)、皮肤T细胞淋巴瘤(CCR4)、神经母细胞瘤(GD2)和肉瘤(PDGFRA)上表达的抗原，以及免疫检查点靶标(PD
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1、PD
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L1、CTLA
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4)(Gasser,2016；Carter,2018)。目前共有42种基于抗体的癌症疗法获得FDA批准并上市。治疗性抗体对癌症的疗效可能受到多种机制的综合影响(Chiavenna,2017)。与癌细胞上选择性表达的抗原结合的抗体可以通过直接阻断促进肿瘤细胞生长或生存途径的抗原的功能而产生抗肿瘤效应。抗体还可以充当桥梁，将肿瘤细胞与可间接诱导肿瘤细胞破坏的免疫效应细胞结合在一起。
[0005]可以使用不断增长的糖工程和Fc工程方法或通过创建双特异性或三特异性抗体来修饰治疗性抗体的特性，以增强或抑制与某些类型的免疫效应细胞的接合(Saxena,2016；Rader,2020)。这些工具可用于合理设计“抗原
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效应物匹配”，为癌症治疗创造个性化的药物途径。
[0006]专注于改善单核细胞或自然杀伤(NK)细胞接合的抗体工程策略包括大量糖工程和Fc工程变体，这些变体可促进治疗性抗体的Fc部分与FcγRIIIA(CD16A)的结合，后者是唯一在NK细胞上表达的Fc受体(Lazar,2006)。尽管不太常见，但几种策略已经产生了与巨噬细胞结合增强的抗体变体，包括促进与FcγRIIA(CD32A)结合的G236AFc突变体(Richards,2008)或通过FcαRI(CD89)募集巨噬细胞的双特异性抗体(Li,2017)。
[0007]选择用于抗体治疗的抗原需要解决随时间演变的癌症表型。针对表达高水平标志物(如EpCAM、EGFR、HER2或VEGFR2)的上皮癌已开发出一类抗体治疗剂。虽然靶向此类抗原的抗体可能对早期肿瘤有效，但已知上皮癌会经历上皮至间充质转化(EMT)，这不仅涉及上皮标志物的丢失和间充质标志物的增加(Karacosta,2019)，而且还会发生肿瘤微环境与免疫细胞浸润的变化(Dongre,2019)。因此，靶向转化为间充质状态的上皮肿瘤可能需要不同的抗原效应细胞组合。
[0008]EMT是一个动态过程，它描述了与肿瘤基质成分串扰的肿瘤细胞表型(Dongre,2019)。癌症相关的成纤维细胞、巨噬细胞及其他免疫细胞分泌多种细胞因子和因子，这些
细胞因子和因子与肿瘤细胞接合以激活诱导EMT的转录因子的表达。间充质样癌细胞也将肿瘤的免疫成分转化为免疫功能低下的状态，这会排除抗肿瘤免疫细胞类型并招募促肿瘤巨噬细胞。
[0009]因此，用抗体治疗剂靶向通常“免疫冷”的间充质肿瘤可能需要与针对通常“免疫热”的上皮肿瘤开发的抗原效应细胞组合不同的抗原效应细胞组合。已经开发和优化了识别上皮标志物如EpCAM、EGFR、HER2或VEGFR2的抗体，以接合外周血单核细胞(PBMC)或NK细胞上的受体。对于上皮样肿瘤，许多已批准的治疗性抗体为此类抗原效应组合提供了很好的匹配。相比之下，识别在间充质样肿瘤细胞表面上表达的抗原且能够将巨噬细胞作为效应细胞的抗体代表了实体瘤的治疗性抗体开发领域未满足的需求。经历过EMT的癌症往往更具侵袭性、转移性和耐药性。因此，拥有一种攻击经历过EMT的肿瘤细胞的药物可能会降低肿瘤进展和耐药性。
[0010]因此，需要新的组合物和使用此类组合物的方法来治疗癌症，尤其包括已经经历EMT的晚期上皮癌。

技术实现思路

[0011]本专利技术部分基于对上皮癌细胞和EMT过程的理解，包括肿瘤微环境中免疫细胞群的变化。这一转化过程的核心是上皮肿瘤细胞在其细胞表面获得avβ3整合素的表达，变得耐药，表型更类似于干细胞，并且对缺氧或其他环境压力不敏感。上皮癌细胞上avβ3的表达是由微环境内各种形式的细胞应激或应用广泛的抗癌药物引发的。因此，在标准护理治疗上取得进展并因此表达avβ3的患者是靶向avβ3抗原的治疗的候选者。鉴于avβ3对于耐药性是必要和充分的，通过选择性靶向avβ3阳性肿瘤细胞，可能预防或逆转癌症获得性耐药性。
[0012]本专利技术提供了用于接合合适的免疫效应细胞以有效介导针对已经经历EMT并获得细胞表面标志物avβ3的上皮癌细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的组合物和方法。
[0013]专利技术人已经确定ADCC是由巨噬细胞而不是NK细胞介导的，这会导致抗体靶向的癌细胞的死亡。此外，细胞死亡不涉及抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或仅通过抗体的直接杀伤。以前人们认为，巨噬细胞作为效应细胞的抗体接合通常会促进ADCP。专利技术人惊奇地确定本专利技术的嵌合结合剂不诱导ADCP，而是仅促进人细胞靶标的巨噬细胞依赖性ADCC。这一出乎意料的发现，除其他好处外，还有利地允许治疗通常对吞噬作用或ADCP具有抗性的CD47阳性肿瘤细胞。仅促进ADCC的结合剂会杀伤它遇到的每个细胞，而促进ADCP的结合剂将无法杀伤CD47阳性细胞。因此，本专利技术的嵌合结合剂有望更有效。不受理论束缚，认为本专利技术的优点是基于嵌合结合剂(例如，IgG4结构域)和/或被识别的抗原(例如，整合素αvβ3)的结构使表达该抗原的细胞对ADCC而不是ADCP特别敏感。
[0014]间充质肿瘤通过抑制上皮标志物(包括E
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钙粘蛋白、EpCAM、occludin、claudin和细胞角蛋白)并促进间充质标志物(包括细胞粘附
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相关蛋白N
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钙粘蛋白、波形蛋白、纤连蛋白、β1和β3整合素以及MMP)的表达的转录因子(ZEB、SNAIL、SLUG和TWIST1)的表达而被鉴别(Dongre，2019)。用于间充质样肿瘤的理想肿瘤细胞抗原将是在肿瘤细胞上高水平表达但在所有其他正常细胞类型上低水平表达的细胞表面标志物。由于EMT与癌症干细胞表型(Marie
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Egyptienne,2013；Singh,2010；Ye,2015)和耐药性密切相关，因此癌症干细胞标志物可能代表另一种类型的靶向间充质肿瘤的抗原，尽管这些通常因肿瘤类型而异。
[0015]在潜在的细胞表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合结合剂，其包含第一结构域和第二结构域，所述第一结构域与表达至少一种间充质细胞标志物的上皮癌细胞上的整合素αvβ3特异性结合，所述第二结构域通过接合间充质肿瘤中积累的巨噬细胞来介导抗体导向的细胞毒性(ADCC)。2.根据权利要求1所述的嵌合结合剂，其中所述上皮癌细胞是晚期上皮癌细胞。3.根据权利要求2所述的嵌合结合剂，其中所述上皮癌细胞已至少部分转化为间充质细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述上皮癌细胞是化疗耐药性或难治性的。5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域是抗体结构域。6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域是抗体结构域。7.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域是人源化抗体结构域或人类抗体结构域。8.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域是人源化抗体结构域或人类抗体结构域。9.根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合结合剂，其为嵌合抗体或其抗原结合片段。10.根据权利要求1至9中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域包含抗体的Fab结构域。11.根据权利要求10所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域包含IgG抗体的Fab结构域。12.根据权利要求11所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域包含IgG4抗体的Fab结构域。13.根据权利要求12所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域包含hLM609
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hIgG4
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S228P的轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)或与其至少90％相同的序列以及hLM609
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hIgG4
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S228P的重链的Fab部分的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)或与其至少90％相同的序列。14.根据权利要求13所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域包含LM609_7的重链的Fab部分的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)或与其至少90％相同的序列以及LM609_7的轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)或与其至少90％相同的序列、JC7U的重链的Fab部分的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)或与其至少90％相同的序列以及JC7U的轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:8)或与其至少90％相同的序列。15.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域进一步特异性结合第二抗原。16.根据权利要求15所述的嵌合结合剂，其中所述第一结构域是双特异性抗体结构域。17.根据权利要求15或16所述的嵌合结合剂，其中所述第二抗原是免疫检查点分子，例如PD
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1、PD
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L1或CTLA
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4。18.根据权利要求15或16所述的嵌合结合剂，其中所述第二抗原是癌症干细胞标志物，例如CD133、CD44、CD90、CD117、CD166或CD105，或效应细胞抗原。19.根据权利要求15或16所述的嵌合结合剂，其中所述第二抗原是效应细胞抗原。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域不显著接合自然杀伤细胞。21.根据权利要求1至20中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域不显著接合淋巴细胞。22.根据权利要求1至21中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域特异性地结合髓源性细胞的表面上的蛋白质。23.根据权利要求22所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域特异性结合Fc
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γ受体。24.根据权利要求22所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域特异性结合Fc
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γ受体I(FcγRI，CD64)。25.根据权利要求1至24中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域包含抗体的Fc结构域。26.根据权利要求25所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域包含IgG抗体的Fc结构域。27.根据权利要求26所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域包含IgG4抗体的Fc结构域。28.根据权利要求26所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域包含IgA或IgE抗体的Fc结构域。29.根据权利要求25至28中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域进一步包含抗体的铰链结构域。30.根据权利要求29所述的嵌合结合剂，其中所述第二结构域包含hLM609
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hIgG4
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S228P的重链Fc结构域和铰链结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)或与其至少90％相同的序列。31.根据权利要求1至30中任一项所述的嵌合结合剂，其中所述氨基酸序列在铰链区包含S228P突变(Eu编号系统)。32.根据权利要求31所述的嵌合结合剂，其包含hLM609
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hIgG4
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S228P重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)和轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)或与其至少90％相同的序列。33.根据权利要求31或32所述的嵌合结合剂，其中所述氨基酸序列包含选自以下的突变：a)S239D/A330L/I332E；b)I332E；c)G236A/S239D/I332E；d)G236A；e)N297A/E382V/M428I；f)M252Y/S254T/T256E；g)Q295R/L328W/A330V/P331A/I332Y/E382V/M428I；h)L234A/L235A/P329G；i)M428L/N434S；j)L234A/L235A/P331S；k)L234A/L235A/P329G/M252Y/S254T/T256E；
l)S298A/E333A/K334/A；m)S...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：阿尔法贝塔控股有限责任公司，
类型：发明
国别省市：