用于检测海马萎缩的试剂盒或器件以及方法技术

本发明专利技术涉及海马萎缩检测用试剂盒或器件，包含能够与作为海马萎缩标志物的规定的miRNA或其互补链特异性地结合的核酸；以及海马萎缩的检测方法，包含体外(in vitro)测定该miRNA的步骤。的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测海马萎缩的试剂盒或器件以及方法


[0001]本专利技术涉及能够用于受检体的脑的海马萎缩的检查的、包含能够与特定的miRNA或其互补链特异性地结合的核酸的海马萎缩的检测用试剂盒或器件，和包括测定该miRNA的表达量的海马萎缩的检测方法。

技术介绍

[0002]海马是存在于大脑边缘系统的被称为海马体的区域的一部分，是位于大脑皮质颞叶的深处的脑的器官。海马的生理学功能与认知功能、记忆、空间掌握能力有关。海马在新的记忆(近似记忆)作为长期记忆固定之前的期间，具有储存记忆的作用。因此如果海马萎缩或损伤，则会给记忆的形成带来妨碍，发生认知记忆障碍。
[0003]海马萎缩由构成海马的神经细胞的脱落引起。年龄增长包括海马在内脑整体地萎缩，但作为由于除了年龄增长以外的原因而海马特别显著地萎缩的疾病，可列举阿尔茨海默型痴呆、额颞叶变性症、抑郁症、创伤后应激障碍、综合失调症等。
[0004]海马区域的萎缩度的检查结果被作为阿尔茨海默型痴呆的诊断的一个信息(N：神经退化，Neurodegeneration)被处理。作为检查海马的一般的方法，可列举利用脑MRI等图像诊断。另外，测定脑中的糖代谢的图像诊断法FDG
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PET，可以作为测定成为海马萎缩的原因的神经细胞死亡的方法利用(非专利文献1)。
[0005]为了以海马萎缩作为特征的疾病阿尔茨海默型痴呆的诊断，也进行了标志物检查的开发。例如，报告了通过免疫沈降法和质量分析法从少量的血浆中低侵袭地测定被认为是阿尔茨海默型痴呆的发病原因的β
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淀粉样蛋白的方法(非专利文献2)。另外，有报告称，通过作为血液检查测定血清样本中的451种(hsa
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5p、hsa
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6088、hsa
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4525、hsa
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4741等)miRNA表达量，能够以灵敏度81％、特异度79％检测阿尔茨海默病患者(专利文献1)。
[0006]同样地，作为使用核酸的阿尔茨海默型痴呆等神经变性疾病的生物化学的诊断方法，有报告称，通过测定血液成分中所含的hsa
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miR
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486
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3p等miRNA表达量，能够检测阿尔茨海默病患者(专利文献2)。
[0007]另外，有报告称，通过血液样本中的hsa
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6805
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5p等的测定，能够检测阿尔茨海默病患者(专利文献3)。
[0008]有报告称，通过血液样本中的hsa
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320b等的测定，能够检测阿尔茨海默病和轻度痴呆患者(专利文献4)。
[0009]同样地，有报告称，血清中所含的hsa
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miR
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663a等miRNA表达量与健常人相比，在阿尔茨海默病患者中有意义地减少(非专利文献3)。
[0010]有报告称，通过脑脊液中所含的hsa
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760、hsa
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887
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3p等的测定能够检测(专利文献5)。
[0011]有报告称，通过样本中的hsa
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4463等的测定，能够检测痴呆患者(专利文献6)。
[0012]同样地，有报告称，以阿尔茨海默型痴呆等神经变性疾病的诊断为目的，通过测定体液中的微泡中所含的hsa
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5p等miRNA表达量，能够检测阿尔茨海默病患者(专利文献7)。
[0013]同样地，有报告称，脑组织中所含的hsa
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4674、hsa
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miR
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3p等miRNA表达量在阿尔茨海默病患者中有意义地变动(非专利文献4)。
[0014]进而，关于核酸对神经细胞的影响，有报告称，hsa
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204
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3p参与对神经细胞的形成重要的蛋白质的表达(非专利文献5)。
[0015]另外，关于与β
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淀粉样蛋白同样地显示与阿尔茨海默型痴呆的关联的τ蛋白，有报告称，脑脊液中的总τ蛋白量与将用MRI拍摄的图像用软件(FreeSurfer)定量而得的海马/杏仁核区域的体积显示高的相关性(p＜0.001)(非专利文献6)。
[0016]痴呆一般是进行性的，伴有脑神经细胞的不可逆的变性，因而在痴呆诊断中海马萎缩度的测定成为重要的检查项目。为了根据患者的症状进行医疗介入以治疗痴呆，基于病理所见对于各个痴呆型进行患者的分层是重要的，因此要求能够客观且定量地测定海马萎缩度的诊断标志物。然而，专利文献1～7和非专利文献1～6中记载的手法如下所述那样，不能说作为海马萎缩度的诊断手法具有充分的性能。
[0017]首先，作为一般的脑的图像检查的MRI检查由于其拍摄装置、拍摄方法、以及诊断的医师而产生定量值的误差，因而没有对于海马体积的定量值进行了一般化的海马萎缩指标值。另外虽然MRI检查广泛普及，但也存在缺乏脑MRI拍摄的环境的设施，此外体内有磁性金属的人、幽闭恐惧症患者接受MRI诊断困难，所以还具有并不是普遍地谁都可以接受诊断、在简便性上欠缺这样的缺点。在非专利文献1中，作为脑图像检查介绍了FDG
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PET检查，但能够实施FDG
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PET检查的设施有设备上的限定，另外安全性虽然被保障但有使用放射性物质这样的危险性。如以上那样，在检测海马萎缩、突触变性的脑图像诊断法中，主要对于患者而言的简便性、安全性、定量性存在问题。
[0018]非专利文献2中记载的检查法限于利用质量分析仪器的测定，因而需要高度的测定手法。另外，所测定的APP669
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771(β
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淀粉样蛋白)通过怎样的作用机制变动是不明的，不能发现与海马萎缩的直接关联性。
[0019]在专利文献1中，将基于患者的临床所见通过医师的诊断区分的阿尔茨海默病患者作为阳性，因而不能进行分层的检查，由此不能发现与海马萎缩的直接关联性。专利文献2～4、专利文献6～7和非专利文献3也同样，没有公开能够直接检测海马本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.海马萎缩的检测用试剂盒，包含能够与作为海马萎缩标志物的选自由miR
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3p组成的组中的至少1种多核苷酸、或该多核苷酸的互补链特异性地结合的核酸。2.根据权利要求1所述的试剂盒，所述核酸是选自由下述(a)～(e)的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(a)由序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(b)包含序列号1～109的任一项所示的碱基序列的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(c)由与序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(d)包含与序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，和(e)与所述(a)～(d)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述试剂盒还包含能够与作为其他海马萎缩标志物的选自由miR
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4463组成的组中的至少1种多核苷酸、或该多核苷酸的互补链特异性地结合的核酸。4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述核酸是选自由下述(f)～(j)的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(f)由序列号110～200的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(g)包含序列号110～200的任一项所示的碱基序列的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(h)由与序列号110～200的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(i)包含与序列号110～200的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，和(j)与所述(f)～(i)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。5.海马萎缩的检测用器件，包含能够与作为海马萎缩标志物的选自由miR
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‑
5p、miR
‑
6780b
‑
5p、miR
‑
6768
‑
5p、miR
‑
5100、miR
‑
6724
‑
5p、miR
‑
6879
‑
5p、miR
‑
7108
‑
5p、miR
‑
4649
‑
5p、miR
‑
4739、miR
‑
6089、miR
‑
1908
‑
5p、miR
‑
4516、miR
‑
2861、miR
‑
4492、miR
‑
4294、miR
‑
6791
‑
5p、miR
‑
1469、miR
‑
6752
‑
5p、miR
‑
4730、miR
‑
6126、miR
‑
6869
‑
5p、miR
‑
1268a、miR
‑
6799
‑
5p、miR
‑
8069、miR
‑
3621和miR
‑
4763
‑
3p组成的组中的至少1种多核苷酸、或该多核苷酸的互补链特
异性地结合的核酸。6.根据权利要求5所述的器件，所述核酸是选自由下述(a)～(e)的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(a)由序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(b)包含序列号1～109的任一项所示的碱基序列的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(c)由与序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(d)包含与序列号1～109的任一项所示的碱基序列或在该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸、该多核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏村智织，须藤裕子，吉本真纪子，新饭田俊平，伊藤健吾，重水大智，加藤隆司，中村昭范，
申请(专利权)人：国立研究开发法人国立长寿医疗研究中心，
类型：发明
国别省市：