一种不规则毛霉生长抑制剂的应用及实验方法技术

本发明专利技术提供了二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs)抑制剂的新的应用方式；并通过使用对DGK

【技术实现步骤摘要】
一种不规则毛霉生长抑制剂的应用及实验方法


[0001]本专利技术涉及一种不规则毛霉生长抑制剂的应用及实验方法，属于医学真菌学


技术介绍

[0002]二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs)在哺乳动物方面的研究已较为全面，目前主要发现有10个DGK同工酶，包括
‑
α，
ꢀ‑
β，
‑
γ，
‑
δ，
‑
ε，
‑
ζ，
‑
η，
‑
θ，
‑
ι和
‑
κ，在多种信号转导途径中发挥着关键作用，主要涉及细胞发育、神经和免疫反应、细胞骨架重组和肿瘤发生。目前有两种可用的商品化试剂有I型DGKs抑制剂(R59022)和I I型DGKs抑制剂(R59949)，对不同类型同工酶产生不同程度的抑制作用。同时，DGKs可参与调控脂质代谢，通过磷酸化二酰甘油(diacylglycerol，DAG)促进磷脂酸(phosphat i di c ac id，PA)的生成参与调节脂质水平，DAG和PA作为影响细胞转录、细胞膜增殖和生长的重要信号分子，在真核生物的合成生长中发挥着重要的作用。
[0003]申请人早期关于不规则毛霉对抗低氧压力的转录组分析也发现，脂质代谢在不规则毛霉菌株对抗低氧压力中同样发挥着重要作用。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的技术问题，本专利技术的目的是：提出了一种不规则毛霉生长抑制剂的应用及实验方法。
[0005]本专利技术的技术解决方案是这样实现的：一种不规则毛霉生长抑制剂的应用，将二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs)抑制剂应用于不规则毛霉的生长抑制。
[0006]一种不规则毛霉生长抑制剂的实验方法，包含以下步骤：
[0007]①
配置DGK抑制剂母液；
[0008]②
在不同浓度的的抑制剂环境中分别培养不规则毛霉菌株；
[0009]③
监测不规则毛霉菌株的生长情况；
[0010]④
检测不规则毛霉脂质代谢情况。
[0011]优选的，所述步骤
①
中，配置DGK抑制剂母液的过程为：
[0012]称取1mg二酰基甘油激酶抑制剂I(DGKi I)固体，分子质量为 459.58g/mol，加入108.79μl DMSO充分溶解至澄清透亮液体，即得 20mM DGKi I保存母液待用。
[0013]优选的，所述步骤
②
中，不同浓度的的抑制剂分别为15μM、30μM、 60μM和120μM的DGKi I。
[0014]优选的，所述步骤
③
中，当同一种菌株在同一温度下的任意一组孢子完全进入菌丝状态，则停止监测。
[0015]由于上述技术方案的运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：
[0016]本方案提供了二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs) 抑制剂的新的应用方式；并通过使用对DGK
‑
ε有抑制作用的I型DGK 抑制剂来实现对高温条件下不规则毛霉菌
株DGKs同工酶的抑制，比较分析不规则毛霉处理前后的生长情况，揭示DGKs在不规则毛霉生长差异性中的作用，证明DGK抑制剂有进一步开发为临床不规则毛霉感染患者所用的潜能；为DGK抑制剂在不规则毛霉的生长实验领域的应用提供了新的思路并打下基础。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对本专利技术实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据本专利技术实施例的内容和这些附图获得其他的附图。
[0018]附图1为DGKi I对不规则毛霉菌孢子的生长影响结果图；
[0019]附图2为不同浓度DGKi I对30℃生长环境中的不规则毛霉菌株孢子的生长影响结果图；
[0020]附图3为不同浓度DGKi I对35℃生长环境中的不规则毛霉菌株孢子的生长影响结果图；
[0021]附图4为菌株在不同条件下的脂肪酸水平含量图。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术解决的技术问题、采用的技术方案和达到的技术效果更加清楚，下面将结合附图对本专利技术实施例的技术方案作进一步的详细描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]本专利技术提出了一种不规则毛霉生长抑制剂的应用，具体是将二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs)抑制剂应用于不规则毛霉的生长抑制。
[0024]并提出一种不规则毛霉生长抑制剂的实验方法，包含以下步骤：
[0025]①
配置DGK抑制剂母液；
[0026]二酰基甘油激酶抑制剂I(美国Sigma
‑
aldr ich公司，D5919)：称取1mg二酰基甘油激酶抑制剂I(DGKi I)固体，分子质量为 459.58g/mol，加入108.79μl DMSO充分溶解至澄清透亮液体，即得 20mM DGKi I保存母液待用。
[0027]②
在不同浓度的的抑制剂环境中分别培养不规则毛霉菌株；
[0028]新鲜配置的无菌PDB液体培养基中加入不同浓度的DGKi I (15μM，30μM，60μM和120μM)，DMSO溶剂的最终浓度为0.6％，同时设置0.6％DMSO为对照组。96孔板中分别加入不同的培养基，均为200μl。在对应的实验孔中加入2μl菌悬液(孢子数量为104个)。
[0029]③
监测不规则毛霉菌株的生长情况；
[0030]在环境温度设置为30℃和35℃的微生物生长动态监测系统中，设置图像捕捉间隔为10分钟，同时预设100个间隔对孢子的生长进行动态监测。当同一种菌株在同一温度下的任意一组孢子完全进入菌丝状态，无法继续观察时结束重复，此时为其终止观测点，收集数据及图像，如图1
‑
3所示。
[0031]④
检测不规则毛霉脂质代谢情况；
[0032]不规则毛霉菌株在高温下产生更多脂肪酸，加入DGKs抑制剂后出现了脂肪酸含量
的进一步显著增多(图4)。同时，中性脂质测定结果显示菌株在不同的生长温度以及不同刺激物刺激下，中性脂质含量也有改变。通过实验发现，35℃环境中培养的菌株比在30℃环境中培养的菌株有更多的中性脂质(P值＝0.014)，另外在35℃的生长环境中，0.6％的DMSO对B50m菌株的生长没有明显影响，而加入120μM I型DGK抑制剂(溶剂为0.6％DMSO)培养的B50m菌株则出现了中性脂质含量的明显增多(P值＝0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种不规则毛霉生长抑制剂的应用，其特征在于:将二酰甘油激酶(diacylglycerol kinase，DGKs)抑制剂应用于不规则毛霉的生长抑制。2.一种不规则毛霉生长抑制剂的实验方法，其特征在于，包含以下步骤：
①
配置DGK抑制剂母液；
②
在不同浓度的的抑制剂环境中分别培养不规则毛霉菌株；
③
监测不规则毛霉菌株的生长情况；
④
检测不规则毛霉脂质代谢情况。3.根据权利要求2所述的不规则毛霉生长抑制剂的实验方法，其特征在于：所述步骤
①
中，配置DG...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁官钊，张美洁，刘维达，梅嬛，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病医院中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：