本发明专利技术属于植物内生真菌及其代谢产物生物防治技术领域，具体涉及一株龙胆内生真菌促生抗病发酵液及其制备方法和应用。本发明专利技术所述发酵液是由龙胆内生真菌木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp.)3711菌种活化和发酵培养的步骤制备得到的。经抑菌和促生实验证明，本发明专利技术所述发酵液具有显著的广谱抗植物病原菌和促进植物(特别是农作物)生长的两方面作用。此外，本发明专利技术所述以从龙胆中分离得到的木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp.)3711为基础制备得到的发酵液制备方法简单、制备成本低廉，具有良好的经济价值和广阔的市场前景。良好的经济价值和广阔的市场前景。良好的经济价值和广阔的市场前景。
【技术实现步骤摘要】
一株龙胆内生真菌促生抗病发酵液及其制备方法和应用
[0001]本专利技术属于植物内生真菌及其代谢产物生物防治
，具体涉及一株龙胆内生真菌促生抗病发酵液及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]目前，化学农药和化肥大量使用存在诸多弊端，如环境污染日益严重、病害虫抗性显著提高、人畜安全受到威胁等等，产生的生态问题层出不穷，且目前公众对保障食品安全的呼声越来越高。因此，开发安全高效绿色环保的新型农药和肥料迫在眉睫。
[0003]微生物发酵工艺简单、成本相对低廉、不易使病虫害产生抗性、对人和环境温和，已经成为开发新型生物农药和肥料中的热点。作为微生物之一的植物内生菌在开发新型农药和肥料方面因具有极为广阔的前景而备受瞩目。植物内生菌是指与宿主植物具有协同进化作用且与宿主植物已经形成互惠共生关系的一类真菌。植物内生真菌与宿主植物的互惠共生关系表现为：宿主植物产生的光合产物可为内生真菌提供营养；内生真菌产生的代谢产物可以刺激宿主植物的生长发育，同时可以提高植物的抗逆性。因此，植物内生菌的代谢产物为发现新化合物、筛选新药物等，提供丰富的原料和广阔的空间，因此植物内生菌已成为多领域多学科的研究热点。
[0004]龙胆是龙胆科植物条页龙胆Gentiana manshurica Kitag.、龙胆Gentianascabra Bge.、三花龙胆Gentiana trifloral Pall.或坚龙胆Gentiana rigescens Franch. 的干燥根和根茎。国内外研究者从龙胆中分离得到了多种成分，比如：裂环烯醚萜苷类、多糖类、生物碱类等。龙胆味苦、性寒，为清肝胆湿热，泻下焦郁火之常用中药。在临床上，龙胆常用于利胆、健胃、保肝、中枢兴奋等作用，其抗炎、抗菌作用也是很明显。根据此前的研究结果推测，在龙胆中可能存在具有较强的抗植物病原菌活性的内生真菌，并且其次生代谢产物可能具有促生作用。因此，研究龙胆内生真菌对新时期农药和肥料的开发和使用具有理论和实际上的参考价值。
[0005]但是，目前尚无来自龙胆内生真菌的同时具有促生和抗病作用的农药和植物生长助剂。
技术实现思路
[0006]为了解决上述技术问题以及填补相关领域的技术空白，本专利技术以从龙胆中分离得到的木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp.)3711为基础，通过发酵培养得到的代谢物，并将其开发成主要用于广谱抗植物病原菌和促进植物生长的产品。
[0007]具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本专利技术：
[0008]在第一个方面中，本专利技术提供了一种龙胆内生真菌，所述龙胆内生真菌用于制备具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液，所述龙胆内生真菌是木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp.3711)，所述木霉(Trichoderma sp.3711) 的微生物保藏号为CCTCC NO:M 20211203，保藏时间为2021年9月24日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保
藏单位地址为中国武汉武汉大学。
[0009]在第二个方面中，本专利技术提供了一种具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液，所述发酵液由上述第一个方面所述的龙胆内生真菌制备得到。
[0010]作为可选的方式，在所述发酵液中，所述植物病原菌包括以下一种或多种：瓜果腐霉病原菌(FM)(Pythium aphanidermatum)、水稻纹枯病原菌(WK) (Rhizoctonia solani K
ü
hn)、黄瓜枯萎病原菌(KW)(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)。
[0011]在第三个方面中，本专利技术提供了上述第二个方面所述的具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0012](1)菌种活化：在无菌条件下，将龙胆内生真菌的菌种，转接在已灭菌的PDA培养基平板中，置培养箱内温度24
‑
30℃恒温培养3
‑
6天，得到活化菌种；
[0013](2)发酵培养：在无菌条件下，用打孔器打取菌饼，接种到含PD培养基的锥形瓶中，封口膜包扎好，置于恒温振荡培养箱中，摇床培养4
‑
8天，所得发酵液经4层纱布过滤，即得到所述龙胆内生真菌的发酵液。
[0014]作为可选的方式，在上述制备方法中，在步骤(1)中使用的所述PDA培养基为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。
[0015]作为可选的方式，在上述制备方法中，在步骤(2)中使用的所述PD培养基为马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL。
[0016]作为可选的方式，在上述制备方法中，在步骤(1)中，置培养箱内温度 28℃恒温培养4天。
[0017]作为可选的方式，在上述制备方法中，在步骤(2)中，摇床培养4
‑
6天，优选地，摇床培养6天。
[0018]另外优选地，在步骤(2)中，所述打孔器的直径为1cm，所述摇床培养条件为pH＝4
‑
8，20
‑
32℃，120r/min，所述锥形瓶的装液量为50mL
‑
150mL/250 mL。
[0019]更优选地，在步骤(2)中，所述打孔器的直径为1cm，所述摇床培养条件为pH＝4
‑
6，24
‑
28℃，120r/min，所述锥形瓶的装液量为50mL
‑
100mL/250 mL。
[0020]最优选地，在步骤(2)中，所述打孔器的直径为1cm，所述摇床培养条件为pH＝6，28℃，120r/min，所述锥形瓶的装液量为50mL或100mL/250mL。
[0021]在第四个方面中，本专利技术提供了上述第二个方面所述的具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液或者采用上述第三个方面所述的制备方法制备得到的发酵液在制备农用助剂中的用途，所述农用助剂具有广谱抗植物病原菌和促进植物生长作用。
[0022]作为可选的方式，在上述用途中，所述农用助剂是农药和植物生长促进剂。
[0023]作为可选的方式，在上述用途中，所述农用助剂是药肥。
[0024]本专利技术相对于现有技术，具有以下有益效果：
[0025]目前市售农药和化肥一般含有十余种甚至更多种成分，并未存在以内生真菌发酵液为单一原料对抗植物病原菌进而促进植物生长的作用，而经抑菌和促生实验证明，本专利技术所述发酵液具有显著的广谱抗植物病原菌和促进植物(特别是农作物)生长的两方面作用。并且，本专利技术所述以从龙胆中分离得到的木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp.)3711为基础制备得到的发酵液制备方法简单、制备成本低廉，具有良好的经济价值和广阔的市场前景。
附图说明
[0026]图1：发酵温度对内生真菌3711发酵液抑菌率的影响。
[0027]图2：发酵天数对内生真菌3711发酵液抑菌率的影响。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种龙胆内生真菌，其特征在于：所述龙胆内生真菌用于制备具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液，所述龙胆内生真菌是木霉属内生菌木霉(Trichoderma sp. 3711)，所述木霉(Trichoderma sp. 3711)的微生物保藏号为CCTCC NO:M 20211203，保藏时间为2021年9月24日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址为中国武汉武汉大学。2.一种具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液，其特征在于：所述发酵液由权利要求1所述的龙胆内生真菌制备得到。3.根据权利要求2所述的发酵液，其特征在于：所述植物病原菌包括以下一种或多种：瓜果腐霉病原菌(FM)(Pythium aphanidermatum)、水稻纹枯病原菌(WK)(Rhizoctonia solani K
ü
hn)、黄瓜枯萎病原菌(KW)(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)。4.权利要求2或权利要求3所述的具有抗植物病原菌和促进植物生长作用的发酵液的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：(1)菌种活化：在无菌条件下，将龙胆内生真菌的菌种，转接在已灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(PDA培养基)平板中，置培养箱内温度24
‑
30℃恒温培养3
‑
6天，得到活化菌种...
【专利技术属性】
技术研发人员：王冬梅，刘晓秋，潘英妮，任舒蒙，郭瑞雪，胡天帅，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：
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