一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定技术

本发明专利技术公开了一种基于UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种基于UPLC
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Q
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定


[0001]本专利技术涉及一种中药化学成分的分析方法，尤其是一种基于UPLC
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Q
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，属于药物分析领域。

技术介绍

[0002]圣愈汤是一种中药，主治诸恶疮血出过多、心烦不安、不得睡眠等，用法为水煎服。圣愈汤出自金代李东垣《兰室密藏》，被收录于《古代经典名方目录(第一批)》中。方中人参、黄芪补气，生地黄、熟地黄、当归身、川芎补血活血，全方补行结合，补而不滞，行而不伤，配伍成方，共奏补气养血之效。圣愈汤为国家中医药管理局发布的第一批中药经典名方，是未来经典名方研究的重点方剂之一，经典名方研究指导原则规定经典名方的现代开发是遵古创新的研究思路，在不改变原方组成的情况下进行现代标准煎液和制剂的研究。
[0003]随着中药及复方制剂的质量控制技术的提升，指标成分的含量测定已不能体现中药及复方制剂的质量优劣。特征图谱/指纹图谱是现代分析技术中展现中药及复方制剂的整体质量的有效方法，2020版《中国药典》部分中药品种也增加了特征图谱的检测。
[0004]现有技术中有公开对圣愈汤中部分有效成分的含量进行检测分析，如专利CN114487137A中公开了一种圣愈汤标准煎液的特征图谱、特征图谱构建方法和鉴别方法，可以有效鉴定出圣愈汤中含有中药材生地黄、熟地黄、川芎、当归、黄芪。但是圣愈汤中还含有很多未知且复杂的成分尚未公开，不为公众所知。因此，目前公开的圣愈汤检测方法不能够全面地对圣愈汤的化学成分进行有效的分析及鉴定。

技术实现思路

[0005]本专利技术需要解决的技术问题是提供一种基于UPLC
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，可以对圣愈汤中的化学成分进行全面的有效分析及鉴定，该方法能够快速分析及准确鉴定出多个复杂化合物，灵敏度高，分离度好。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]一种基于UPLC
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Q
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC
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Q
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TOF
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MS)对圣愈汤基准样品中的化学成分进行表征。
[0008]进一步地，包括以下UPLC色谱条件：色谱柱为Waters ACQUITY UPLC
TM HSS T3色谱柱(2.1mm
×
100mm,1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸乙腈，流动相B为0.1％甲酸水，柱温为40℃，进样室温度为4℃，进样量为2μl，流速为0.4ml/min，梯度洗脱。
[0009]进一步地，梯度洗脱程序为0
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5min，1％
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10％A；5
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11min，10％
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28％A；11
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18min，28％
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48％A；18
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20min，48％
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70％A；20
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22min，70％
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100％A；22
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24min，100％
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100％A；24
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24.5min，100％
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1％A；24.5
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27min，1％
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1％A。
[0010]进一步地，包括以下Q
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TOF
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MS质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正、负离子检测模式
(ESI+、ESI
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)，扫描模式为全扫描；MS参数：质量范围m/z50
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1500Da，扫描时间0.2s，雾化气和锥孔气为氮气，毛细管电压2.8kv，锥孔采样电压40v，锥孔气流量50L/h，离子源温度110℃，碰撞能15
‑
45eV，脱溶剂气温度350℃，脱溶剂气流量800L/h；准确质量校正采用亮氨酸脑啡肽([M+H]+556.2771，[M
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H]‑
554.2615)溶液，质量浓度为1μg/L，流速5μL/min，校正频率为5s。
[0011]进一步地，包括以下步骤：
[0012]S1.圣愈汤基准样品的制备：取圣愈汤各组分物质，加水，浸泡，煎煮，滤过；待滤液冷却后将其转至冻干瓶中，冷冻干燥，得圣愈汤基准样品；
[0013]S2.供试品溶液的制备：取圣愈汤基准样品，置于瓶中，加入甲醇溶解，超声处理，然后进行离心处理，取上清液，即得供试品溶液；
[0014]S3.对照品溶液的制备：精密称取梓醇、咖啡酸、阿魏酸、绿原酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、异阿魏酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、藁本内酯、川芎嗪、汉黄芩素、地黄苷D、刺芒柄花素、各对照品0.2g，加甲醇使溶解并定容10ml，摇匀，得浓度均为20μg/ml的混合对照品溶液；
[0015]S4.将供试品溶液和对照品溶液分别采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC
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Q
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TOF
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MS)进行检测，得到供试品溶液的色谱图和对照品溶液的色谱图；
[0016]S5.收集有关圣愈汤各单味药的化学成分信息，建立全方化学成分信息库，将信息库的数据集导入UNIFI 1.8软件中，与所采集的质谱数据进行自动匹配，选择误差在
±
5ppm以内的化合物；
[0017]S6.通过对照品色谱图比对、裂解规律分析并结合相关文献报道，进一步对化合物结构进行鉴定。
[0018]进一步地，步骤S1中，圣愈汤基准样品的制备具体操作为：取当归、黄芪各6.0g，生地黄、熟地黄、人参、川芎各3.6g，加水1200mL，浸泡60min，武火加热至沸腾后，转为文火保持微沸，35min后煎煮至600mL，药液趁热用120目尼龙滤布滤过，待滤液冷却后将其转至冻干瓶中，置于冷冻干燥机内预冻再冷冻干燥，冷冻干燥结束得圣愈汤基准样品。
[0019]进一步地，预冻的温度为
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80℃，时间为12h；冷冻干燥的温度为
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45℃，压力为29Pa，时间为24h。
[0020]进一步地，步骤S2中，供试品溶液的制备具体操作为：取圣愈汤基准样品0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50％甲醇10mL溶解，密塞，称定重量，超声处理后放冷至室温，称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，转移至离心管中，然后进行离心处理，然后静置，取上清液，即得供试品溶液。
[0021]进一步地，步骤S2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于UPLC
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，其特征在于：采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC
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MS)对圣愈汤基准样品中的化学成分进行表征。2.根据权利要求1所述的一种基于UPLC
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，其特征在于，包括以下UPLC色谱条件：色谱柱为Waters ACQUITY UPLC
TM HSS T3色谱柱(2.1mm
×
100mm,1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸乙腈，流动相B为0.1％甲酸水，柱温为40℃，进样室温度为4℃，进样量为2μl，流速为0.4ml/min，梯度洗脱。3.根据权利要求2所述的一种基于UPLC
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，其特征在于：梯度洗脱程序为0
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5min，1％
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10％A；5
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11min，10％
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28％A；11
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18min，28％
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48％A；18
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20min，48％
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70％A；20
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22min，70％
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100％A；22
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24min，100％
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100％A；24
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24.5min，100％
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1％A；24.5
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27min，1％
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1％A。4.根据权利要求1所述的一种基于UPLC
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，其特征在于，包括以下Q
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TOF
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MS质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正、负离子检测模式(ESI+、ESI
‑
)，扫描模式为全扫描；MS参数：质量范围m/z 50
‑
1500Da，扫描时间0.2s，雾化气和锥孔气为氮气，毛细管电压2.8kv，锥孔采样电压40v，锥孔气流量50L/h，离子源温度110℃，碰撞能15
‑
45eV，脱溶剂气温度350℃，脱溶剂气流量800L/h；准确质量校正采用亮氨酸脑啡肽([M+H]+556.2771，[M
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H]
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554.2615)溶液，质量浓度为1μg/L，流速5μL/min，校正频率为5s。5.根据权利要求1所述的一种基于UPLC
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Q
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TOF
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MS技术的圣愈汤化学成分分析方法及鉴定，其特征在于，包括以下步骤：S1.圣愈汤基准样品的制备：取圣愈汤各组分物质，加水，浸泡，煎煮，滤过；待滤液冷却后将其转至冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丹，王喜军，闫广利，张喜武，侯金才，
申请(专利权)人：京津冀联创药物研究北京有限公司，
类型：发明
国别省市：