无血清全悬浮培养型BHK-21-C细胞株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了无血清全悬浮培养型BHK

【技术实现步骤摘要】
无血清全悬浮培养型BHK
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21
‑
C细胞株及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及无血清全悬浮培养型BHK
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21
‑
C细胞株及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]呼肠孤病毒病(ARV)是由禽呼肠孤病毒引起的一种传染病。禽呼肠孤病毒可分为鸡源呼肠孤病毒和水禽源呼肠孤病毒。水禽源呼肠孤病毒又分为番鸭呼肠孤病毒(基因1型，MDRV)及新型鸭呼肠孤病毒(基因2型，NDRV)，其中以新型鸭呼肠孤病毒感染为主。新型鸭呼肠孤病毒病又称为番鸭、半番鸭(6～25日龄)“新肝病”，会导致肝脏出现不同程度的点、斑块状出血和坏死，脾脏肿大坏死、心脏和法氏囊出血等，也可导致鹅发生出血性坏死性肝炎和樱桃谷鸭、麻鸭发生鸭脾坏死病。该病无明显季节性，一年四季均可发生，冬春季节多发，同时分布广泛。此外，由于其垂直传播的特点，雏鸭出壳后即携带该病毒，除造成发病外，还会造成严重的免疫抑制，导致雏鸭后期死淘率增加，危害巨大。
[0003]目前国内兽用疫苗市场仅有青岛易邦生物工程有限公司取得了番鸭呼肠孤病毒活疫苗(CA株)的批准文号，而新型鸭呼肠孤病毒相关疫苗尚无批准文号及生产厂家。因此，筛选一株合适的对新型鸭呼肠孤病毒敏感的无血清悬浮细胞、以之作为载体生产新型鸭呼肠孤病毒疫苗，是控制新型鸭呼肠孤病毒的关键。

技术实现思路

[0004]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种无血清全悬浮培养型BHK
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21r/>‑
C细胞株。
[0005]本专利技术第二方面的目的，在于提供第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株的构建方法。
[0006]本专利技术第三方面的目的，在于提供第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株的应用。
[0007]本专利技术第四方面的目的，在于提供一种培养病毒的方法。
[0008]本专利技术第五方面的目的，在于提供一种病毒疫苗的制备方法。
[0009]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种病毒疫苗。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0011]本专利技术的第一个方面，提供一种无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株，名称为乳仓鼠肾细胞BHK
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21
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C悬浮细胞，于2022年1月11日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202216。
[0012]本专利技术的第二个方面，提供本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株的构建方法，包括如下步骤：1)对BHK
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21贴壁细胞进行单克隆驯化，得到生长良好的无血清全悬浮培养的BHK
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21单克隆细胞株；2)将新型鸭呼肠孤病毒接种至生长良好的无血清全悬浮培养的BHK
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21单克隆细胞株，筛选对新型鸭呼肠孤病毒敏感的BHK
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21单克隆细胞株，命名为BHK
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21
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C。
[0013]优选地，所述新型鸭呼肠孤病毒为NDRV
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CM株。
[0014]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株的应用：
[0015]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在培养病毒中的应用；
[0016]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在制备培养病毒的产品中的应用；
[0017]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在分离病毒中的应用；
[0018]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在制备分离病毒的产品中的应用；
[0019]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在非诊断治疗目的地检测病毒中的应用；
[0020]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株在制备检测病毒的产品中的应用；
[0021]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株在制备疫苗中的应用；
[0022]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株在药物筛选中的应用，所述药物为用于预防或治疗病毒感染所致的疾病的药物。
[0023]优选地，所述病毒包含新型鸭呼肠孤病毒、新城疫病毒、狂犬病毒中的至少一种；进一步包含新型鸭呼肠孤病毒；更进一步包含新型鸭呼肠孤病毒弱毒株(NDRV
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CM株)。
[0024]本专利技术的第四个方面，提供一种培养病毒的方法，将病毒接种至本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株的细胞悬液，培养。
[0025]优选地，所述病毒包含新型鸭呼肠孤病毒、新城疫病毒、狂犬病毒中的至少一种；进一步包含新型鸭呼肠孤病毒；更进一步包含新型鸭呼肠孤病毒弱毒株(NDRV
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CM株)。
[0026]优选地，所述病毒的接毒量为0.5v/v
‰
～5v/v
‰
，即为无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞株的细胞悬液的0.5v/v
‰
～5v/v
‰
；进一步为0.5v/v
‰
～2v/v
‰
；更进一步为1v/v
‰
～2v/v
‰
。
[0027]优选地，所述无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞悬液通过无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞悬液母液与无血清悬浮培养基混合得到。
[0028]优选地，所述无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞悬液母液与无血清悬浮培养基的体积比为1：1～2：1；进一步为1：1。
[0029]优选地，所述无血清全悬浮培养型BHK
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C细胞悬液母液的密度为5
×
106～6
×
106cell s/mL；进一步为5.3
×
106～6...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株，名称为乳仓鼠肾细胞BHK
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21
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C悬浮细胞，于2022年1月11日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202216。2.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在(1)～(4)中任一项中的应用；(1)培养病毒；(2)制备培养病毒的产品；(3)分离病毒；(4)制备分离病毒的产品。3.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在(5)～(6)中任一项中的应用；(5)非诊断治疗目的地检测病毒；(6)制备检测病毒的产品。4.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型BHK
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21
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C细胞株在(7)～(8)中任一项中的应用；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张梓鸿，邵宝顺，朱辉，盛圆贤，许芬芬，
申请(专利权)人：广东省华晟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：