DNaseⅠELISA检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及G01N33/68领域，具体为DNase

【技术实现步骤摘要】
DNase
ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及G01N33/68领域，具体为DNase
ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]DNase
ꢀⅠ
是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。在mRNA疫苗、mRNA预防以及治疗药物中，需要添加DNase
ꢀⅠ
，在药物申报中需要对工艺中添加物进行残留检测，以保证产品的质量。免疫分析法(ELISA)是检测DNase
ꢀⅠ
残留的首选方法。
[0003]常规的ELISA实验操作需要提前一天进行板子包被，以及其他检验试剂的配制，时间周期长，且提前准备工作复杂，工作量大；且ELISA检测实验受环境、人员操作影响较大，常规操作，整个物料准备、检测过程复杂，且出错率高，常常会因为样品数量大而出现样品与样品之间混淆，出现加样时孔与孔之间重复或者跳孔等错误操作。
[0004]基于目前市场无相关DNase
ꢀⅠ
残留检测试剂盒，本专利技术目的在于提供一种 DNase
ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒，该试剂盒包含已包被好的板子，配置好的试剂，可改善现有实验检测操作中存在的复杂操作，出错率高等不足，解决前期准备工作繁琐的技术问题，便于实验的顺利开展，得到更可靠、准确的数据。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种DNase<br/>ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒，至少包括包被酶标板、检测抗体、酶结合物、标准品、样品稀释液、抗体稀释液、酶结合物稀释液、20
×
PBST洗液、显色液、终止液、封板膜、说明书。
[0006]作为一种优选的技术方案，所述包被酶标板的制备方法，至少包括以下步骤：
[0007]a包被：使用包被缓冲液CB将包被抗体稀释，进行注孔，之后置于3
‑
5℃下包被过夜；
[0008]b洗板：弃去各孔内液体，将20xPBST洗液稀释制备1
×
PBST洗涤液后，注满微孔，静置25
‑
35秒后弃去孔内液体；重复2
‑
3次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干；
[0009]c封闭：每孔中加入BSA
‑
PBS溶液，恒温静置1
‑
2h；
[0010]d洗板：弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液注满微孔，静置25
‑
35秒后弃去孔内液体；重复1
‑
2次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干；
[0011]e保护：每孔中加入蔗糖溶液进行室温温育，之后弃去各孔内液体，在面巾纸上拍干后置于干燥环境进行干燥即得。
[0012]作为一种优选的技术方案，所述步骤a中缓冲液CB的配制方法为：将 Na2CO3、NaHCO3加入纯水中，调节pH至9
‑
10，之后采用滤膜过滤后保存。
[0013]作为一种优选的技术方案，所述步骤a中包被抗体选自PRJ
‑
DI001
‑
1ab、 PRJ
‑
DI001
‑
2ab、PRJ
‑
DI001
‑
3ab、PRJ
‑
DI001
‑
4ab、PRJ
‑
DI001
‑
6ab、PRJ
‑
DI001
‑
8ab、 PRJ
‑
DI001
‑
11ab，优选的，所述包被抗体为PRJ
‑
DI001
‑
8ab，型号为NBP2
‑
90240，浓度为1mg/mL。
[0014]作为一种优选的技术方案，所述步骤b中20xPBST洗液的制备方法为：将 NaCl、Na2HPO4.12H2O、KCl、KH2PO4加入容器中，用纯水定容，控制溶液pH 为7.4～7.6，之后加入表面活性剂搅拌混匀并采用滤膜过滤即得，所述20
×
PBST 洗液来源于北京索莱宝科技有限公司。
[0015]本专利技术另一方面提供了DNase
ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒的使用方法，至少包括以下步骤：
[0016](1)进行试剂配制；
[0017](2)根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回含干燥剂的铝箔袋，密封。
[0018](3)将标准品工作液、样品工作液、阴性对照按照加入至相应孔中，采用封板膜封板后置于恒温震荡培养箱中，在200
‑
300rpm的条件下温育50
‑
60分钟；
[0019](4)弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液注入微孔，静置20
‑
40秒后弃去孔内液体，重复2
‑
4次，每一次洗板完成后在滤纸上拍干；
[0020](5)每孔加入检测抗体工作液，用封板膜封板后置于恒温震荡培养箱中在 200
‑
300rpm的条件下温育50
‑
60分钟；
[0021](6)弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液入微孔，静置20
‑
40秒后弃去孔内液体，重复2
‑
4次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干；
[0022](7)每孔中加入酶结合物工作液，用封板膜封板后置于恒温震荡培养箱中在 200
‑
300rpm的条件下温育50
‑
60分钟；
[0023](8)弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液注入微孔，静置20
‑
40秒后弃去孔内液体，重复2
‑
4次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干；
[0024](9)每孔中加入显色液，轻微振荡混匀后用封板膜封板置于20
‑
30℃条件下显色8
‑
12分钟；
[0025](10)每孔中加入终止液，轻微混匀，采用酶标仪测定各孔吸光值；
[0026](11)采用四参数的拟合方式进行线性拟合及计算，判定检测结果。
[0027]作为一种优选的技术方案，所述步骤(1)中试剂配制至少包括以下步骤：
[0028]S1、将所需试剂移到18
‑
25℃室温环境下平衡20
‑
40分钟；
[0029]S2、配制1
×
PBST洗涤液，按照20
×
PBST洗液与去离子水质量比为1:20 进行稀释制备；配制检测抗体工作液，按照检测抗体与抗体稀释液质量比为 1：(80
‑
120)进行稀释制备；配制酶结合物工作液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DNase
ꢀⅠꢀ
ELISA检测试剂盒，其特征在于，至少包括包被酶标板、检测抗体、酶结合物、标准品、样品稀释液、抗体稀释液、酶结合物稀释液、20
×
PBST洗液、显色液、终止液、封板膜、说明书。2.根据权利要求1所述的DNaseⅠELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被酶标板的制备方法，至少包括以下步骤：a包被：使用包被缓冲液CB将包被抗体稀释，进行注孔，之后置于3
‑
5℃下包被过夜；b洗板：弃去各孔内液体，将20xPBST洗液稀释制备1
×
PBST洗涤液后，注满微孔，静置25
‑
35秒后弃去孔内液体；重复2
‑
3次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干；c封闭：每孔中加入BSA
‑
PBS溶液，恒温静置1
‑
2h；d洗板：弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液注满微孔，静置25
‑
35秒后弃去孔内液体；重复1
‑
2次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干；e保护：每孔中加入蔗糖溶液进行室温温育，之后弃去各孔内液体，在面巾纸上拍干后置于干燥环境进行干燥即得。3.根据权利要求2所述的DNaseⅠELISA检测试剂盒，其特征在于，所述步骤a中包被抗体选自PRJ
‑
DI001
‑
1ab、PRJ
‑
DI001
‑
2ab、PRJ
‑
DI001
‑
3ab、PRJ
‑
DI001
‑
4ab、PRJ
‑
DI001
‑
6ab、PRJ
‑
DI001
‑
8ab、PRJ
‑
DI001
‑
11ab。4.根据权利要求2所述的DNase
Ⅰꢀ
ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述步骤b中20xPBST洗液的制备方法为：将NaCl、Na2HPO4.12H2O、KCl、KH2PO4加入容器中，用纯水定容，控制溶液pH为7.4～7.6，之后加入表面活性剂搅拌混匀并采用滤膜过滤即得。5.一种根据权利要求1
‑
4任一项所述的DNase
Ⅰꢀ
ELISA检测试剂盒使用方法，至少包括以下步骤：(1)进行试剂配制；(2)根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回含干燥剂的铝箔袋，密封；(3)将标准品释工作液、样品工作液、阴性对照按照加入至相应孔中，采用封板膜封板后置于恒温震荡培养箱中，在200
‑
300rpm的条件下温育50
‑
60分钟；(4)弃去各孔内液体，用1
×
PBST洗涤液注入微孔，静置20
‑
40秒后弃去孔内液体，重复2
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽美，李查，张天扬，凡鹏程，郑孟韬，蔡宇卿，
申请(专利权)人：江苏谱新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：