用于培养BHK21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用制造技术

本申请提出了用于培养BHK21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用。根据本申请的实施例，本申请的发明专利技术人提出了一种用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，该培养基添加剂可以添加至DMEM/F12培养基，从而获得化学限定培养基，该化学限定培养基能够用于对BHK21细胞进行悬浮培养，并且意外地实现了培养结团率的降低、增殖倍数的提高。低、增殖倍数的提高。

【技术实现步骤摘要】
用于培养BHK21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体的，本申请涉及针对特定细胞的培养基添加剂及其用途。

技术介绍

[0002]BHK
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21细胞系（Baby hamster kidney cell line）是从叙利亚幼鼠肾组织中分离培养获得的成纤维型贴壁细胞系，其可连续传代。BHK
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21细胞系可以用于多种病毒的增殖和纯化，如口蹄疫病毒（Foot
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and
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mouth disease virus，FMDV）、脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus，EMCV）、呼肠孤病毒（Reovirus）、水疱性口炎病毒（Vesicularstomatitis virus，VSV）、新城疫病毒（Newcastle Disease Virus）等。目前，BHK
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21细胞系已被广泛应用于口蹄疫疫苗的生产。
[0003]然而，目前针对BHK21细胞的培养手段，尤其是针对应用于疫苗领域的BHK21细胞的培养手段仍有待改进。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种能够有效地用于对BHK21细胞进行培养的化学限定培养基添加剂。
[0005]本申请是基于专利技术人的下列发现而完成的：BHK21细胞在应用于病毒的培养时，通常采用DMEM/F12添加血清作为培养基。然而，专利技术人在细胞培养领域的长期研发过程中，发现在采用血清作为添加剂与DMEM/F12培养基配合对BHK21细胞进行悬浮培养时，会存在一些不可克服的缺陷，例如细胞的48小时存活率偏低、细胞结团率偏高，同时在应用于动物时，血清中的成分会不可避免地引发不必要的免疫反应。为此本申请的专利技术人致力于开发出一款新型的化学限定培养基，即不存在任何蛋白质成分，在应用于疫苗领域时，以避免引发不必要的免疫反应。为此目的，专利技术人结合之前在细胞培养领域积累的丰富经验，进行了大量的筛选和优化工作，意外地获得了一组配方，可以作为BHK21细胞的化学限定培养基，该培养基能够有效地对BHK21细胞进行悬浮培养，同时能够在多项指标上获得比血清培养更优异的表现。
[0006]由此，在本专利技术的第一方面，本申请提出了一种用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，该化学限定培养基添加剂用于与DMEM/F12配合，并且化学限定培养基添加剂包括：成分重量份（mg/L）L
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盐酸精氨酸230~240L
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天门冬氨酸320~330L
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门冬酰胺495~500L
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半胱氨酸盐酸盐一水155~165L
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胱氨酸二盐酸盐14~16
L
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谷氨酸108~112L
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谷氨酰胺435~440甘氨酸138~142L
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盐酸组氨酸一水28~32L
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羟脯氨酸270~280L
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异亮氨酸380~400L
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亮氨酸320~330L
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盐酸赖氨酸100~105L
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甲硫氨酸145~150L
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苯丙氨酸160~170L
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脯氨酸365~375L
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丝氨酸180~185L
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苏氨酸95~100L
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色氨酸220~240L
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缬氨酸190~210还原型谷胱甘肽大约0.427七水硫酸亚铁大约0.373七水硫酸锌大约0.387维生素C大约2.533D
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泛酸钙大约2.133叶酸大约2.800肌醇大约26.000烟酰胺大约2.267维生素B6大约2.200维生素B1大约2.267维生素B12大约5.187L
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酪氨酸二钠盐无水大约70.667五水硫酸铜大约0.002六水氯化镁大约46.943D
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生物素大约0.133氯化胆碱大约30.667次黄嘌呤大约2.173亚油酸大约0.081硫辛酸大约0.2071，4
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丁二胺二盐酸盐大约0.733维生素B2大约0.457胸苷大约0.380对氨基苯甲酸大约0.453柠檬酸铁大约15.000
氢化可的松大约0.050亚硒酸钠大约0.003重组人胰岛素大约2.000F68大约1000HEPES大约3000钼酸铵大约0.001二水氯化铜大约0.001氯化锂大约0.002氯化铝大约0.020九水偏硅酸钠大约0.073维生素E醋酸酯大约0.016肉豆蔻酸大约0.002油酸大约0.002棕榈酸大约0.002硬脂酸大约0.002吐温80大约0.490
[0007]根据本申请的实施例，本申请的专利技术人提出了一种用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，该培养基添加剂可以添加至DMEM/F12培养基，从而获得化学限定培养基，该化学限定培养基能够用于对BHK21细胞进行悬浮培养，并且意外地实现了培养结团率的降低、增殖倍数的提高。
[0008]根据本申请的一些具体实施例，化学限定培养基添加剂包括：成分重量份（mg/L）L
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盐酸精氨酸235L
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天门冬氨酸325.6L
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门冬酰胺497.5L
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半胱氨酸盐酸盐一水160L
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胱氨酸二盐酸盐15L
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谷氨酸110L
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谷氨酰胺438.5甘氨酸140L
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盐酸组氨酸一水30L
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羟脯氨酸275L
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异亮氨酸390L
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亮氨酸325L
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盐酸赖氨酸103L
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甲硫氨酸147L
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苯丙氨酸165L
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脯氨酸370L
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丝氨酸182.5
L
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苏氨酸97.5L
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色氨酸230L
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缬氨酸200还原型谷胱甘肽0.427七水硫酸亚铁0.373七水硫酸锌0.387维生素C2.533D
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泛酸钙2.133叶酸2.800肌醇26.000烟酰胺2.267维生素B62.200维生素B12.267维生素B125.187L
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酪氨酸二钠盐无水70.667五水硫酸铜0.002六水氯化镁46.943D
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生物素0.133氯化胆碱30.667次黄嘌呤2.173亚油酸0.081硫辛酸0.2071，4
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丁二胺二盐酸盐0.733维生素B20.457胸苷0.380对氨基苯甲酸0.453柠檬酸铁15.000氢化可的松0.050亚硒酸钠0.003重组人胰岛素2.000F681000HEPES3000钼酸铵0.001二水氯化铜0.00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，其特征在于，所述化学限定培养基添加剂用于与DMEM/F12配合，所述化学限定培养基添加剂包括：230~240重量份的L
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盐酸精氨酸，320~330重量份的L
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天门冬氨酸，495~500重量份的L
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门冬酰胺，155~165重量份的L
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半胱氨酸盐酸盐一水，14~16重量份的L
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胱氨酸二盐酸盐，108~112重量份的L
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谷氨酸，435~440重量份的L
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谷氨酰胺，138~142重量份的甘氨酸，28~32重量份的L
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盐酸组氨酸一水，270~280重量份的L
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羟脯氨酸，380~400重量份的L
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异亮氨酸，320~330重量份的L
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亮氨酸，100~105重量份的L
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盐酸赖氨酸，145~150重量份的L
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甲硫氨酸，160~170重量份的L
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苯丙氨酸，365~375重量份的L
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脯氨酸，180~185重量份的L
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丝氨酸，95~100重量份的L
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苏氨酸，220~240重量份的L
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色氨酸，190~210重量份的L
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缬氨酸，0.427 重量份的还原型谷胱甘肽，0.373 重量份的七水硫酸亚铁，0.387 重量份的七水硫酸锌，2.533 重量份的维生素C，2.133 重量份的D
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泛酸钙，2.800 重量份的叶酸，26.000 重量份的肌醇，2.267 重量份的烟酰胺，2.200 重量份的维生素B6，2.267 重量份的维生素B1，5.187 重量份的维生素B12，70.667 重量份的L
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酪氨酸二钠盐无水，0.002 重量份的五水硫酸铜，46.943 重量份的六水氯化镁，0.133 重量份的D
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生物素，30.667 重量份的氯化胆碱，2.173 重量份的次黄嘌呤，
0.081 重量份的亚油酸，0.207 重量份的硫辛酸，0.733 重量份的1，4
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丁二胺二盐酸盐，0.457 重量份的维生素B2，0.380 重量份的胸苷，0.453 重量份的对氨基苯甲酸，15.000 重量份的柠檬酸铁，0.050 重量份的氢化可的松，0.003 重量份的亚硒酸钠，2.000 重量份的重组人胰岛素，1000重量份的F68，3000重量份的HEPES，0.001 重量份的钼酸铵，0.001 重量份的二水氯化铜，0.002 重量份的氯化锂，0.020 重量份的氯化铝，0.073 重量份的九水偏硅酸钠，0.016 重量份的维生素E 醋酸酯，0.002 重量份的肉豆蔻酸，0.002 重量份的油酸，0.002 重量份的棕榈酸，0.002 重量份的硬脂酸，0.490 重量份的吐温80。2.根据权利要求1所述的用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂，其特征在于，所述化学限定培养基添加剂包括：235重量份的L
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盐酸精氨酸，325.6重量份的L
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天门冬氨酸，497.5重量份的L
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门冬酰胺，160重量份的L
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半胱氨酸盐酸盐一水，15重量份的L
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胱氨酸二盐酸盐，110重量份的L
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谷氨酸，438.5重量份的L
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谷氨酰胺，140重量份的甘氨酸，30重量份的L
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盐酸组氨酸一水，275重量份的L
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羟脯氨酸，390重量份的L
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异亮氨酸，325重量份的L
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亮氨酸，103重量份的L
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盐酸赖氨酸，147重量份的L
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甲硫氨酸，
165重量份的L
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苯丙氨酸，370重量份的L
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脯氨酸，182.5重量份的L
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丝氨酸，97.5重量份的L
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苏氨酸，230重量份的L
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色氨酸，200重量份的L
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缬氨酸，0.427重量份的还原型谷胱甘肽，0.373重量份的七水硫酸亚铁，0.387重量份的七水硫酸锌，2.533重量份的维生素C，2.133重量份的D
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泛酸钙，2.8重量份的叶酸，26重量份的肌醇，2.267重量份的烟酰胺，2.2重量份的维生素B6，2.267重量份的维生素B1，5.187重量份的维生素B12，70.667重量份的L
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酪氨酸二钠盐无水，0.002重量份的五水硫酸铜，46.943重量份的六水氯化镁，0.133重量份的D
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生物素，30.667重量份的氯化胆碱，2.173重量份的次黄嘌呤，0.081重量份的亚油酸，0.207重量份的硫辛酸，0.733重量份的1，4
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丁二胺二盐酸盐，0.457重量份的维生素B2，0.38重量份的胸苷，0.453重量份的对氨基苯甲酸，15重量份的柠檬酸铁，0.05重量份的氢化可的松，0.003重量份的亚硒酸钠，2重量份的重组人胰岛素，1000重量份的F68，3000重量份的HEPES，0.001重量份的钼酸铵，0.001重量份的二水氯化铜，0.002重量份的氯化锂，0.02重量份的氯化铝，
0.073重量份的九水偏硅酸钠，0.016重量份的维生素E 醋酸酯，0.002重量份的肉豆蔻酸，0.002重量份的油酸，0.002重量份的棕榈酸，0.002重量份的硬脂酸，0.49重量份的吐温80。3.一种用于培养BHK21细胞的培养基，其特征在于，包括：DMEM/F12培养基；和权利要求1或2所述的用于BHK21细胞的化学限定培养基添加剂。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述DMEM/F12培养基含有：含量为13.45mg/L的L
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丙氨酸，含量为147.5mg/L的L
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盐酸精氨酸，含量为22.5 mg/L的L
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门冬酰胺，含量为19.65mg/L的L
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天门冬氨酸，含量为17.5mg/L的L
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半胱氨酸盐酸盐一水，含量为31.3mg/L的L
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胱氨酸二盐酸盐，含量为22.35mg/L的L
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【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书七页说明书一四页，
申请(专利权)人：天信和苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：