联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法技术

本发明专利技术提供一种联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法。本发明专利技术采用第一缓冲液处理第一玻璃纤维膜制得样本垫，采用第二缓冲液处理心磷脂抗原

【技术实现步骤摘要】
联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法


[0001]本专利技术属于免疫荧光检测
，具体涉及联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法。

技术介绍

[0002]抗心磷脂抗体（anti
‑
phospholipid antibody，APA）是一类自身免疫性抗体，与多种自身免疫性疾病有关，也是抗磷脂抗体综合征（anti
‑
phospholipid antibody syn
‑
drome，APS）的标志性抗体。抗心磷脂抗体的靶抗原主要是带负电荷的心磷脂，主要是血小板和内皮细胞膜中的心磷脂。抗心磷脂抗体包括IgG型和IgM型。研究表明IgG型抗心磷脂抗体与血小板减少症密切相关，还与中晚期流产相关，IgM型抗心磷脂抗体和溶血性贫血密切相关，持续中高梯度的IgG/IgM型抗心磷脂抗体与血栓密切相关。
[0003]目前临床及实验室的抗心磷脂抗体测定方法多为酶联免疫法和化学发光法。酶联免疫法精密度和灵敏度线性均较差，且有操作步骤较多，检测耗时长等问题。化学发光法虽然灵敏度和精确性更好，但是目前相关化学发光法检测试剂盒一次只能检测一种抗心磷脂抗体的分型，且该技术依赖昂贵的检测设备，不能进行实时床旁检测，局限性较多。荧光免疫层析可以实现一次同时检测IgG和IgM两种抗体分型且操作简单方便，但是针对不同抗原抗体，需要不断调整试纸条制备方法，以同时保证灵敏度、准确度、稳定性等，因此荧光免疫层析试纸的开发难度较高。目前未见同时检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的相关报道及产品上市。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法。
[0005]本专利技术另外还提供采用上述制备方法制备的用于联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条。
[0006]本专利技术另外还提供IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的联合定量检测系统。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，所述制备方法包括：采用第一缓冲液处理第一玻璃纤维膜制得样本垫；分别采用第二缓冲液处理心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物和DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物，然后将处理后的心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物和处理后的DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物分别结合到第二玻璃纤维膜上制得结合垫；将所述样本垫、所述结合垫与硝酸纤维素膜、吸水纸以及底板组装得到所述荧光免疫层析试纸条，其中，所述第一缓冲液含有0.5wt%~1.5wt%的吐温
‑
20，0.5wt%~1.5wt%的PEG20000，3wt%~8wt%的海藻糖和0.1wt%~0.6wt%的酪蛋白，所述第一缓冲
液的pH值为8.0~9.0，所述第二缓冲液含有100mmol/L~200mmol/L的氯化钠，8wt%~12wt%的海藻糖，0.4wt%~0.6wt%的吐温
‑
20和0.4wt%~0.6wt%的酪蛋白，所述第二缓冲液的pH值为8.0~9.0，所述硝酸纤维素膜上设有IgG检测线、IgM检测线和质控线。
[0008]优选地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液分别独立地选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液或柠檬酸缓冲液。
[0009]进一步优选地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液分别独立地为Tris缓冲液。
[0010]再进一步优选地，所述Tris缓冲液的浓度为25mmol/L~70mmol/L，例如25mmol/L，30mmol/L，35mmol/L，40mmol/L，45mmol/L，50mmol/L，55mmol/L，60mmol/L，65mmol/L，70mmol/L。
[0011]优选地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的pH值分别独立地为8.5~9.0，例如8.5，8.6，8.7，8.8，8.9，9.0。
[0012]进一步优选地，所述第一缓冲液为pH值为8.0~9.0，浓度为45mmol/L~55mmol/L的Tris缓冲液，其含有0.5wt%~1.5wt%的吐温
‑
20，0.5wt%~1.5wt%的PEG20000，3wt%~8wt%的海藻糖和0.1wt%~0.6wt%的酪蛋白。
[0013]再进一步优选地，所述第一缓冲液为pH值为8.4~8.6，浓度为45mmol/L~55mmol/L的Tris缓冲液，其含有0.8wt%~1.2wt%的吐温
‑
20，0.8wt%~1.2wt%的PEG20000，4wt%~6wt%的海藻糖和0.4wt%~0.6wt%的酪蛋白。
[0014]进一步优选地，所述第二缓冲液的pH值为8.0~9.0，浓度为45mmol/L~55mmol/L的Tris缓冲液，其含有100mmol/L~200mmol/L的氯化钠，8wt%~12wt%的海藻糖，0.4wt%~0.6wt%的吐温
‑
20和0.4wt%~0.6wt%的酪蛋白。
[0015]再进一步优选地，所述第二缓冲液的pH值为8.4~8.6，浓度为45mmol/L~55mmol/L的Tris缓冲液，其含有140mmol/L~160mmol/L的氯化钠，8wt%~12wt%的海藻糖，0.4wt%~0.6wt%的吐温
‑
20和0.4wt%~0.6wt%的酪蛋白。
[0016]优选地，采用第一缓冲液浸润第一玻璃纤维膜1min~3min，然后在30℃~60℃下烘干，制得所述样本垫。
[0017]进一步优选地，所述烘干的温度为30℃~40℃。
[0018]进一步优选地，所述烘干在湿度小于30%、温度为18℃~28℃的环境下进行。
[0019]优选地，将所述心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物与所述第二缓冲液混合得到微球含量为0.05wt%~0.5wt%的心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物溶液，将所述DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物与所述第二缓冲液混合得到微球含量为0.05wt%~0.5wt%的DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物溶液，然后将所述心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物溶液和所述DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物溶液按照体积比为（15~18）:1混合后喷涂到所述第二玻璃纤维膜上，在30℃~60℃下烘干，制得所述结合垫。
[0020]进一步优选地，所述心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物溶液中微球含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：采用第一缓冲液处理第一玻璃纤维膜制得样本垫；分别采用第二缓冲液处理心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物和DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物，然后将处理后的心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物和处理后的DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物分别结合到第二玻璃纤维膜上制得结合垫；将所述样本垫、所述结合垫与硝酸纤维素膜、吸水纸以及底板组装得到所述荧光免疫层析试纸条，其中，所述第一缓冲液含有0.5wt%~1.5wt%的吐温
‑
20，0.5wt%~1.5wt%的PEG20000，3wt%~8wt%的海藻糖和0.1wt%~0.6wt%的酪蛋白，所述第一缓冲液的pH值为8.0~9.0，所述第二缓冲液含有100mmol/L~200mmol/L的氯化钠，8wt%~12wt%的海藻糖，0.4wt%~0.6wt%的吐温
‑
20和0.4wt%~0.6wt%的酪蛋白，所述第二缓冲液的pH值为8.0~9.0，所述硝酸纤维素膜上设有IgG检测线、IgM检测线和质控线。2.根据权利要求1所述的联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液分别独立地选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液或柠檬酸缓冲液。3.根据权利要求2所述的联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液分别独立地为25mmol/L~70mmol/L的Tris缓冲液。4.根据权利要求1所述的联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的pH值分别独立地为8.5~9.0。5.根据权利要求1所述的联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，采用第一缓冲液浸润第一玻璃纤维膜1min~3min，然后在30℃~60℃下烘干，制得所述样本垫。6.根据权利要求1所述的联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，将所述心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物与所述第二缓冲液混合得到微球含量为0.05wt%~0.5wt%的心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物溶液，将所述DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物与所述第二缓冲液混合得到微球含量为0.05wt%~0.5wt%的DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物溶液，然后将所述心磷脂抗原
‑
荧光微球偶联物溶液和所述DNP
‑
BSA
‑
荧光微球偶联物溶液按照体积比为（15~18）:1混合后喷涂到所述第二玻璃纤维膜上，在30℃~60℃下烘干，制得所述结合垫。7.根据权利要求1所述的联合检测I...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚辉，张瑜，陶慧云，
申请(专利权)人：迪亚莱博张家港生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：