一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，包括如下步骤，S1、外植体灭菌：取未成熟杂交种子内未发育成熟的胚或/和子叶作为外植体，接入胚拯救培养基中；S2、胚性愈伤组织诱导；S3、胚性愈伤组织增殖及体细胞胚胎分化：将胚性愈伤组织接种于增殖培养基中，分化出不易剥离子叶形胚的胚性材料；S4、成熟和萌发：将胚性材料接种于萌发培养基中，培养形成炼苗材料；S5、炼苗或生根：将炼苗材料培养得到组培苗；S6、移栽：将组培苗种培养得到山茶花新品种幼苗；本申请采用未成熟杂交种子种的胚或/和子叶作为外植体，培养得到山茶花新品种幼苗，避免了因种子败育或播种育苗失败造成的新品种种质资源流失。失败造成的新品种种质资源流失。失败造成的新品种种质资源流失。

【技术实现步骤摘要】
一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法


[0001]本专利技术涉及茶花繁殖
，具体涉及一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法。

技术介绍

[0002]山茶花为我国传统十大名花之一，目前山茶花新品种培育多采用传统杂交育种，对特定品种的繁殖多采用扦插、嫁接等方法。在传统杂交育种中，必须选取饱满、无病虫害的成熟杂交种子进行播种育苗；然而，受气候变化、亲本结实能力等因素的影响，部分山茶花品种杂交后种子很难自然发育成熟，无法进行播种育苗，这给山茶花的杂交育种造成很大困难；而且，这种杂交后产生的未成熟种子中可能蕴含了大量的新品种种质资源，现有技术中，该部分未成熟的种子常作为自然选择的结果，被扔掉或在传统育苗过程中腐烂坏死，这在很大程度上造成了山茶花新品种种质资源的流失。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法。
[0004]本专利技术所采用的技术方案是：一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，包括如下步骤，
[0005]S1、外植体灭菌：选取种皮完整未开裂的黑褐色未成熟杂交种子，灭菌处理后，取出未成熟杂交种子内未发育成熟的胚或/和子叶作为外植体，接入胚拯救培养基中进行培养；
[0006]S2、胚性愈伤组织诱导：将步骤S1拯救成活的外植体接种于胚性愈伤组织诱导培养基中，诱导形成胚性愈伤组织；
[0007]S3、胚性愈伤组织增殖及体细胞胚胎分化：将胚性愈伤组织接种于增殖培养基中培养，分化出不易剥离子叶形胚的胚性材料；
[0008]S4、成熟和萌发：将步骤S3分化出的不易剥离子叶形胚的胚性材料先接种于成熟培养基中，培养后，再将其接种于萌发培养基中，培养形成具有茎段、顶芽和功能叶的炼苗材料；
[0009]S5、炼苗或生根：将步骤S4培养得到的炼苗材料接种于培养基质中，培养得到能够主动吸收营养的组培苗；
[0010]S6、移栽：将生长健壮的组培苗种植于草炭土和珍珠岩的混合基质中培养，得到山茶花新品种幼苗。
[0011]进一步，所述步骤S4具体为：
[0012]将不易剥离子叶形胚的胚性材料接种于成熟培养基中，培养2
‑
3个月后，形成胚根连接生长的体细胞胚丛；将该体细胞胚丛切分为单个胚，接种于萌发培养基中，培养1
‑
2个月后，培养得到具有茎段、顶芽和功能叶的炼苗材料。
[0013]进一步，所述炼苗材料为具有1个肉质根的幼苗或/和无根的芽。
[0014]进一步，所述培养基质为疏松多孔无菌基质，基质：水的质量体积比为1:2.5～3。
[0015]进一步，所述步骤S5中，所述培养基质中还添加有NAA，所述NAA的含量为0～0.5mg
·
L
‑1。
[0016]进一步，当所述炼苗材料为具有完整根和芽的幼苗时，所述NAA的添加量为0。
[0017]进一步，当所述炼苗材料为芽或茎段生长旺盛而根系长势较差的幼苗时，所述NAA的添加量为0.5mg
·
L
‑1。
[0018]进一步，所述步骤S5的培养过程在无菌环境下进行，具体培养环境为：光照时间为16h
·
d
‑1，暗培养为8h
·
d
‑1，光照强度为50μmol
·
m
‑1·
s
‑1，温度为(25
±
2)℃。
[0019]进一步，所述步骤S6具体为，
[0020]将生长健壮组培苗种植于V
草炭土
：V
珍珠岩
为1:1或1:2的基质中，其中基质的pH值为5.9～7.0，1个月后，顶芽抽梢，根尖伸长生长，同时喷施NPK比例为1:1:1的水溶肥，促进组培苗壮苗生长。移栽期间，温度为17
‑
26℃，相对空气湿度不低于90％。
[0021]进一步，所述步骤S1具体为，
[0022]在无菌条件下，将未成熟种子置于无菌三角瓶中，用75％的乙醇溶液浸泡30s，无菌水冲洗3
‑
5次；然后用15％的次氯酸钠溶液浸泡20min，无菌水冲洗3
‑
5次；灭菌完成后，剪破种皮，取出未发育成熟的胚或/和子叶作为外植体，将上述外植体接入胚拯救培养基中进行培养。
[0023]本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的步骤或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各步骤或部分并不一定按照实际的比例绘制。
[0025]图1为本申请实施例提供的灭菌后的未成熟杂交种子图；
[0026]图2为本申请实施例提供的胚拯救成活的未成熟杂交种子图；
[0027]图3为本申请实施例提供的体细胞胚胎的诱导图；
[0028]图4为本申请实施例提供的体细胞胚胎增殖图；
[0029]图5为本申请实施例提供的体细胞胚胎萌发图；
[0030]图6为本申请实施例提供的炼苗成活的幼苗图；
[0031]图7为本申请实施例提供的移栽成活的幼苗图。
具体实施方式
[0032]下面将结合附图对本专利技术技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0033]需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
[0034]本申请提供了一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法。
[0035]其中，未成熟杂交种子是指人工杂交授粉后自然生长形成的未成熟种子，具有嫩白色鲜活的子叶形胚和胚乳，但受自然环境或杂交亲和力影响，子叶形胚或者胚乳无法进一步发育至成熟状态，无法在传统育苗方法下萌发成苗。
[0036]新品种是指经过人工杂交授粉获得的，可能与杂交亲本有明显不同表现特征的新材料。
[0037]本申请方法适用于采用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗，以解决现有山茶花杂交育种技术中种子败育、无法播种育苗的问题。
[0038]下面对该方法的具体步骤进行详细说明，该方法具体包括如下步骤，
[0039]S1、外植体灭菌
[0040]选取种皮完整未开裂的黑褐色未成熟杂交种子，灭菌处理后，取出未成熟杂交种子内未发育成熟的胚和子叶，接入胚拯救培养基中。
[0041]具体的，在无菌条件下，将上述未成熟种子置于无菌三角瓶中，用75％的乙醇溶液浸泡30s，无菌水冲洗3
‑
5次；然后用15％的次氯酸钠溶液浸泡20min，无菌水冲洗3
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，其特征在于，包括如下步骤，S1、外植体灭菌：选取种皮完整未开裂的黑褐色未成熟杂交种子，灭菌处理后，取出未成熟杂交种子内未发育成熟的胚或/和子叶作为外植体，接入胚拯救培养基中进行培养；S2、胚性愈伤组织诱导：将步骤S1拯救成活的外植体接种于胚性愈伤组织诱导培养基中，诱导形成胚性愈伤组织；S3、胚性愈伤组织增殖及体细胞胚胎分化：将胚性愈伤组织接种于增殖培养基中培养，分化出不易剥离子叶形胚的胚性材料；S4、成熟和萌发：将步骤S3分化出的不易剥离子叶形胚的胚性材料先接种于成熟培养基中，培养后，再将其接种于萌发培养基中，培养形成具有茎段、顶芽和功能叶的炼苗材料；S5、炼苗或生根：将步骤S4培养得到的炼苗材料接种于培养基质中，培养得到能够主动吸收营养的组培苗；S6、移栽：将生长健壮的组培苗种植于草炭土和珍珠岩的混合基质中培养，得到山茶花新品种幼苗。2.根据权利要求1所述的利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，其特征在于，所述步骤S4具体为：将不易剥离子叶形胚的胚性材料接种于成熟培养基中，培养2
‑
3个月后，形成胚根连接生长的体细胞胚丛；将该体细胞胚丛切分为单个胚，接种于萌发培养基中，培养1
‑
2个月后，培养得到具有茎段、顶芽和功能叶的炼苗材料。3.根据权利要求2所述的利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，其特征在于，所述炼苗材料为具有1个肉质根的幼苗或/和无根的芽。4.根据权利要求1所述的利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，其特征在于，所述培养基质为疏松多孔无菌基质，基质：水的质量体积比为1:2.5～3。5.根据权利要求1所述的利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述培养基质中还添加有NAA，所述NAA的含量为0～0.5mg
·
L
‑1。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玲莉，邹世慧，汤丽红，
申请(专利权)人：重庆市风景园林科学研究院，
类型：发明
国别省市：