一种达格列净的有关物质的分析方法技术

本发明专利技术属于药物分析的技术领域，具体涉及一种达格列净的有关物质的分析方法。采用高效液相色谱法，以高密度辛烷基修饰的有机杂化硅胶为填充剂的反相色谱柱，以醋酸铵缓冲液、甲醇和乙腈的混合溶液为流动相，进行梯度洗脱，对达格列净中间体及其有关物质进行分离；采用紫外检测器分析检测。提供了一种简单有效、稳定可靠的高效液相色谱分析方法，从而实现达格列净中间体及其有关物质的有效分离和测定，有效控制达格列净中间体的质量，提高达格列净及其制剂的用药安全。其制剂的用药安全。其制剂的用药安全。

【技术实现步骤摘要】
一种达格列净的有关物质的分析方法


[0001]本专利技术属于药物分析的
，具体涉及一种达格列净的有关物质的分析方法。

技术介绍

[0002]达格列净（Dapagliflozin），化学名为(2S, 3R, 4R, 5S, 6R)
‑2‑
[4
‑
氯
‑3‑
（4
‑
乙氧基苄基）苯基]‑6‑
（羟基甲基）四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三醇，是由美国百时美施贵宝公司和阿斯利康公司联合开发的一种2型钠离子依赖型葡萄糖协同转运蛋白（SGLT2）抑制剂，通过抑制肾脏对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖排泄，进而降低糖尿病患者已升高的血糖水平。分子式为C
21
H
25
ClO6•
C3H8O2•
H2O，其结构式为：甲基
‑1‑
碳
‑
[4
‑
氯
‑3‑
[(4
‑
乙氧基苯基)甲基]‑
苯基]‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷，是达格列净合成过程中的关键中间体，其结构式为：其合成工艺路线如下：
在甲基
‑1‑
碳
‑
[4
‑
氯
‑3‑
[(4
‑
乙氧基苯基)甲基]‑
苯基]‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷的合成工艺过程中，因起始原料、合成工艺、降解等因素会产生多个杂质，其中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E因较易产生，作为特定杂质在甲基
‑1‑
碳
‑
[4
‑
氯
‑3‑
[(4
‑
乙氧基苯基)甲基]‑
苯基]‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷有关物质检查项中进行控制。
[0003]杂质A为未反应完全的起始原料1，其结构式为： ；杂质B为起始原料1的脱溴产物中间态，其结构式为：；杂质C为未反应完全的起始原料2在酸性条件下TMS脱保护而产生，其结构式为：；
杂质D为未反应完全的半缩酮中间态3，其结构式为：；杂质E为半缩酮中间态2在酸性条件下，TMS脱保护的糖环结构上C
‑
O键断裂产生的缩酮杂质，其结构式为：。
[0004]为了控制达格列净中间体甲基
‑1‑
碳
‑
[4
‑
氯
‑3‑
[(4
‑
乙氧基苯基)甲基]‑
苯基]‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷的质量，提高达格列净及其制剂的用药安全，有必要提供一种简单有效、稳定可靠的分析方法，以实现甲基
‑1‑
碳
‑
[4
‑
氯
‑3‑
[(4
‑
乙氧基苯基)甲基]‑
苯基]‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷及其有关物质的分离、检测，但是目前，关于上述达格列净中间体及其有关物质的分析方法尚未见有公开的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种简单有效、稳定可靠的高效液相色谱分析方法，从而实现达格列净中间体及其有关物质的有效分离和测定，有效控制达格列净中间体的质量，提高达格列净及其制剂的用药安全。
[0006]本专利技术的技术方案如下：一种达格列净的有关物质的分析方法，所述的有关物质包括达格列净中间体及其有关物质；所述的分析方法，包括以下步骤：采用高效液相色谱法，以高密度辛烷基修饰的有机杂化硅胶为填充剂的反相色谱柱，以醋酸铵缓冲液、甲醇和乙腈的混合溶液为流动相，进行梯度洗脱，对达格列净中间体及其有关物质进行分离；采用紫外检测器分析检测。
[0007]优选地，所述达格列净中间体为；所述有关物质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E；具体杂质A为；杂质B为；杂质C为
；杂质D为；杂质E为。
[0008]优选地，所述反相色谱柱规格为4.6
×
150mm，3.5
µ
m。
[0009]优选地，所述流动相A为醋酸铵缓冲液
‑
甲醇
‑
乙腈（90:3:7），流动相B为醋酸铵缓冲液
‑
甲醇
‑
乙腈（10：25：65）。
[0010]优选地，所述醋酸铵缓冲液浓度为10～50mmol/L；pH值为3～6。
[0011]优选地，所述梯度洗脱的程序为：0
‑
10min，A相：B相体积比为65:35；10
‑
35min，A相：B相体积比为65:35～0:100；35
‑
45min，A相：B相体积比为10:90；45
‑
50min，A相：B相体积比为10:90～65:35；50
‑
55min，A相：B相体积比为65:35。
[0012]优选地，柱温为30℃～40℃，流速为1.0mL/min；检测波长为235nm，进样体积为10
µ
L。
[0013]优选地，所述的供试品溶液制备方法为：取达格列净中间体适量，用溶剂溶解并定量稀释制成每1mL中约含1mg的溶液；所述的对照溶液制备方法为：精密量取供试品溶液1mL，用溶剂定量稀释至100mL。
[0014]优选地，溶剂为体积比为50:15:35的水
‑
甲醇
‑
乙腈。
[0015]优选地，采用自身对照法计算供试品溶液中各杂质含量。
[0016]本专利技术通过对色谱柱、流动相、梯度洗脱程序的研究，在辅以流速、柱温等对分离检测的影响，最终确定了最优的分析条件，可以将达格列净中间体以及杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E在同一色谱条件进行有效的分离，能够快速、准确、可靠地检测出达格列净中间体的纯度及杂质的含量，从而有效的控制达格列净中间体的质量。
[0017]本专利技术的有益效果在于：1. 本专利技术采用高密度辛烷基修饰的有机杂化硅胶为填充剂的色谱柱，实现了极性差异较大的达格列净中间体及其有关物质在同一色谱条件下的洗脱和分离；采用醋酸盐缓冲盐
‑
甲醇
‑
乙腈的混合溶液作为流动相，改变了流动相对不同化合物的选择性，极大地实现了达格列净中间体及其有关物质的分离。
[0018]2. 本专利技术检测方法的专属性强，系统适用性溶液色谱图中，杂质C、杂质E、达格列净中间体、杂质D、杂质B和杂质A依次出峰，分离度分别为18.9、9.5、12.8、75.8、8.9。
[0019]3. 本专利技术检测方法的灵敏度高，可有效检出杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E，检测限浓度分别为8.55 ng/mL、11.58 ng/mL、6.87 ng/m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种达格列净的有关物质的分析方法，其特征在于，所述的有关物质包括达格列净中间体及其有关物质；所述的分析方法，包括以下步骤：采用高效液相色谱法，以高密度辛烷基修饰的有机杂化硅胶为填充剂的反相色谱柱，以醋酸铵缓冲液、甲醇和乙腈的混合溶液为流动相，进行梯度洗脱，对达格列净中间体及其有关物质进行分离；采用紫外检测器分析检测；所述达格列净中间体为；所述有关物质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E；具体杂质A为；杂质B为；杂质C为；杂质D为；杂质E为。2.根据权利要求1所述的达格列净的有关物质的分析方法，其特征在于，所述反相色谱柱规格为4.6
×
150mm，3.5μm。3.根据权利要求1所述的达格列净的有关物质的分析方法，其特征在于，所述流动相A为体积比90:3:7的醋酸铵缓冲液
‑
甲醇
‑
乙腈，流动相B为体积比10：25：65的醋酸铵缓冲液
‑
甲醇
‑
乙腈。4.根据权利要求3所述的达格列净的有关物质的分析方法，其特征在于，所述醋酸铵缓冲液浓度为10～50mmol/L；pH值为3～6。5.根据权利要求1所述的达格列净的有关物质的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：0

【专利技术属性】
技术研发人员：王维剑，丁勃，文松松，孙桐，向宇，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：