一种鹿茸脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种鹿茸脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用，属于生物技术领域；包括如下步骤：S1采集梅花鹿二杠茸或三叉茸，切取顶端1.0

【技术实现步骤摘要】
一种鹿茸脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是一种鹿茸脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]鹿茸作为哺乳动物中唯一能够周期性再生的哺乳动物器官，其具有令人惊讶的生长速度，每天可以生产2cm左右，而这种超快的生长速度主要是由其尖部的间充质组织所引起的，间充质组织主要由干细胞及其分泌物组成，所以其中含有丰富的生物活性物质。
[0003]同时，鹿茸内部组织在以2cm/天的速度生长的同时，其外部的皮肤组织也在以20
‑
30cm2的速度扩展，这种扩展速度主要有两方面的因素：其一是机械力，其二是鹿茸内部组织，即间充质组织中的活性物质作用。
[0004]目前一般的脱细胞基质水凝胶都是采用皮、膀胱等组织作为原料制得，这些组织都是成年动物的组织，相较于具有干细胞特性的鹿茸间充质组织而言，含有较少的生物活性物质，其在促皮肤伤口愈合中发挥的作用较差。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种鹿茸脱细胞基质水凝胶及其制备方法和应用；通过对鹿茸间充质组织进行切块、冲洗、研磨、消化、震荡等处理制得纯度高、透明度好的鹿茸脱细胞基质水凝胶；将该鹿茸脱细胞基质水凝胶应用于皮肤伤口治疗中，取得了极为显著的疗效。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种鹿茸脱细胞基质水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
[0008]S1采集梅花鹿二杠茸或三叉茸，切取顶端1.0
‑<br/>1.5cm的组织，并拨去组织上的茸皮，得到鹿茸间充质组织；
[0009]S2将所述鹿茸间充质组织切成小块，用生理盐水冲洗，并于液氮中研磨，获得鹿茸间充质组织粉末；
[0010]S3将所述鹿茸间充质组织粉末和胃蛋白酶加入0.01M HCl中并持续振荡46
‑
50h，其后添加0.1M NaOH直至使溶液pH＞7，最后向溶液中添加10
×
PBS并静置，得到所述鹿茸脱细胞基质水凝胶。
[0011]本专利技术通过对鹿茸间充质组织进行切块、冲洗、研磨、消化、震荡等处理制得鹿茸脱细胞基质水凝胶；通过本专利技术制备的鹿茸脱细胞基质水凝胶成胶效果以及品质极好，且细胞脱出程度高，极大程度降低细胞用于伤口治疗时发生免疫反应；此外，制得的脱细胞基质水凝胶中含有很多鹿茸间充质组织中的活性物质，其对于促进伤口愈合发挥积极的作用。
[0012]作为本专利技术的优选方案，所述步骤S2中的小块边长为0.8
‑
1.2毫米。本方案中，通过进一步限定组织小块的边长，能够提高组织小块冲洗以及研磨效率，进而提高鹿茸脱细
胞基质水凝胶的制备效率。
[0013]作为本专利技术的优选方案，所述步骤S3中，持续震荡时间为48h。本方案中，进一步限定震荡时间为48h，该时间能够使鹿茸间充质组织粉末消化完全，避免消化时间过长对鹿茸间充质组织中的生物活性因子产生影响以及降低水凝胶制备效率。
[0014]作为本专利技术的优选方案，所述步骤S3中，持续震荡的温度为25℃，速度为200rpm。本方案中，通过将温度设为25℃，能够使间充质组织的生物活性因子始终保持活性，避免温度过高导致其失活，从而降低鹿茸脱细胞基质水凝胶中的生物活性因子，导致鹿茸脱细胞基质水凝胶对皮肤伤口的愈合能力降低。优选的，所述步骤S3中，加入NaOH后，溶液pH为7.4。本方案中，通过将pH限定为7.4，能够使溶液更好成胶，且提高鹿茸脱细胞基质水凝胶的透明度，进而提高鹿茸脱细胞基质水凝胶的品质。
[0015]作为本专利技术的优选方案，所述鹿茸间充质组织粉末、胃蛋白酶和0.01M HCl三者的比例为10:1:1(w:w:v)。本方案中，10:1:1(w:w:v)为鹿茸间充质组织粉末、胃蛋白酶和0.01M HCl三者之间的最佳比例，其能够进一步促进鹿茸间充质组织消化，提高细胞脱出效率，提高鹿茸脱细胞基质水凝胶的制备效率以及品质。
[0016]本专利技术还提供了一种鹿茸脱细胞基质水凝胶在制备促皮肤伤口愈合药物中的运用。
[0017]本专利技术的有益效果是：
[0018]1.鹿茸间充质干细胞组织是一种干细胞组织，具有很多的生物活性因子，本专利技术首次采用该组织制备鹿茸脱细胞基质水凝胶，通过优化反应参数以及反应步骤，在制备过程中极大程度降低了生物活性因子的损失，使制得的水凝胶中含有大量的生物活性因子，对皮肤伤口的愈合发挥极为重要的的作用。
[0019]2.本专利技术的制备方法能够较为完全的将鹿茸干细胞脱出，使制得的水凝胶纯度较高，极大程度降低了水凝胶在治疗伤口愈合过程中因残留细胞而产生免疫反应，对伤口产生不利影响；此外，本专利技术制备的鹿茸脱细胞基质水凝胶成胶效果以及透明度极好，品质极佳。
[0020]3.本专利技术制备的鹿茸脱细胞基质水凝胶在治疗伤口愈合方面的效果优于商用HydroMatrix(Sigma
‑
Aldrich，USA)与表皮生长因子(EGF)组合后产生的作用效果；此外，商用HydroMatrix(Sigma
‑
Aldrich，USA)价钱较贵(约3000元/5ml)，导致其难以大范围应用，而本专利技术的水凝胶制备方法简单，成本较低，有利于市场推广；同时因鹿茸干细胞增值速度快，因此其获取极为便利，可以大量制备水凝胶，并能够广泛运用于市场，提高鹿茸脱细胞基质水凝胶的商业价值，并进一步提高鹿茸的科技产值及促进鹿茸价值的深度开发。
附图说明：
[0021]图1：鹿茸脱细胞基质水凝胶(ARMH)的表征；
[0022]其中，1a.ARMH制备过程；1b.ARMH(右)和冻干ARMH(左)；1c.扫描电镜结果；
[0023]其中，
[0024]图2：细胞培养中ARMH最佳浓度的筛选；
[0025]图3：HARM对全层皮肤缺损大鼠伤口愈合率和疤痕形成的影响；
[0026]其中，3a.实验流程设计；3b.伤口愈合过程的形态观察；3c.使用Image J软件对伤
口区域进行量化；DPW，受伤后天数，n＝10；平均值
±
SEM；*p&lt;0.05，***p&lt;0.001；
[0027]图4：ARMH对大鼠创伤愈合过程中皮肤附属器再生水平的影响；
[0028]其中，4a.15DPW和30DPW时愈合组织的HE和Masson染色结果；15DPW(4b，4c)和30DPW(4d，4e)时皮肤附属器数量和胶原纤维水平的统计数据；n＝3；平均值
±
SEM；在*p&lt;0.05，**p&lt;0.01，***p&lt;0.001，ns：无显著性。
[0029]图5：ARMH对大鼠皮肤伤口愈合中血管生成的影响；
[0030]其中：5a
‑
5c.15DPW时愈合组织CD31和FGF2免疫荧光染色及统计结果；5d
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鹿茸脱细胞基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1采集梅花鹿二杠茸或三叉茸，切取顶端1.0
‑
1.5cm的组织，并拨去组织上的茸皮，得到鹿茸间充质组织；S2将所述鹿茸间充质组织切成小块，用生理盐水冲洗，并于液氮中研磨，获得鹿茸间充质组织粉末；S3将所述鹿茸间充质组织粉末和胃蛋白酶加入0.01M HCl中并持续振荡46
‑
50h，其后添加0.1M NaOH直至使溶液pH＞7，最后向溶液中添加10
×
PBS并静置，得到所述鹿茸脱细胞基质水凝胶。2.根据权利要求1所述的一种鹿茸脱细胞基质水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的小块边长为0.8
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：张国坤，李春义，任晶，王东旭，王胜楠，李吉萍，
申请(专利权)人：长春科技学院，
类型：发明
国别省市：