桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体提供了桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用，该桃叶珊瑚苷是一种提取于草药中的环烯醚萜苷，其纯度为98.36％以上；通过HEI

【技术实现步骤摘要】
桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用
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][0001]本专利技术属于医药
，具体地说是桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用。
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技术介绍
][0002]顺铂是第一代以铂为基础的细胞毒性药物，广泛用于各种实体瘤(如头颈癌、肺癌、膀胱癌和卵巢癌)的治疗。顺铂的应用极大地提高了患者的生存率，然而，耳蜗、肾脏、神经细胞和许多其他非肿瘤细胞也极易受到顺铂的损伤，导致患者出现耳毒性、肾毒性、肝毒性和心脏毒性的副作用。顺铂对毛细胞和Corti器的损伤导致的听力损失是不可逆转的，在临床上，顺铂耳毒性的发生率高达60％，这严重限制了顺铂的临床应用。对于顺铂耳毒性的机制基础、治疗策略以及预防措施的探索研究很有必要。然而，目前没有一种药物被批准用于顺铂耳毒性的预防和治疗。因此，开发有效的顺铂耳毒性防治药物具有现实意义。
[0003]多年以来，已进行了巨大的努力来探索消除顺铂耳毒性的耳保护策略，旨在保护内耳免受药物毒性伤害的同时不干扰顺铂的抗肿瘤作用。在针对顺铂耳毒性的机制基础研究中，耳保护策略主要涉及抗氧化机制、抗凋亡机制、抗炎机制以及自噬的调节机制。许多疗法已经在临床前工作中取得了成功，但是只有少数疗法在临床上显示出一定的保护作用，并且都没有获得FDA的批准。
[0004]植物化学物质在保护人体免受各种疾病和抵抗药物毒性方面具有重要作用。近期，传统草药中广泛存在的天然化合物桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)被广泛用于的治疗领域的研究。桃叶珊瑚苷(β
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D
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吡喃葡萄糖苷)，是环烯醚萜苷家族的成员，广泛存在于植物中，其具有广泛的药理特性，包括抗氧化、抗衰老、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤和保肝。目前尚无在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用。
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技术实现思路
][0005]本专利技术的目的就是针对现有顺铂耳毒性缺少有效保护药的问题，发现了一种新的高效抗顺铂耳毒性药物，提供一种桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案是：
[0007]桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用。
[0008]所述桃叶珊瑚苷是一种提取于草药中的环烯醚萜苷，其化学结构式为：
caspase 3的表达，提高了抗凋亡蛋白Bcl
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2的表达；在基底膜体外培养条件下，桃叶珊瑚苷减少了顺铂诱导的毛细胞缺失，且减轻了顺铂诱导的毛细胞的凋亡。同时，桃叶珊瑚苷减轻了顺铂诱导HEI
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OC1细胞和基底膜体外培养的细胞氧化应激；在小鼠在体实验中，保证小鼠注射前左右耳听力均正常且相似的情况下，统计了鼓室注射术后听力与术前听力阈值的差值，发现8k、16k和20k处听功能被显著保护，同时其他频率也有不同程度保护；取小鼠基底膜进行染色后发现，桃叶珊瑚苷显著保护了顺铂鼓室注射小鼠毛细胞及突触。
[0021]综上：本专利技术针对现有顺铂耳毒性缺少有效保护药的问题，发现了一种新的高效抗顺铂耳毒性药物，提供了一种桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用，值得推广应用。
[附图说明][0022]图1为6W C570BL/六小鼠在治疗后3天左耳和右耳分别ABR测量的听力结果与初始听力结果的差值，n＝6；与对照组相比，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001；
[0023]图2为用肌球蛋白7A(绿色)和DAPI(蓝色)对基底膜进行染色，n＝3，标尺＝10μm；
[0024]图3为(e)对(d)中顶回、中回和底回存活的毛细胞进行定量分析；与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
[具体实施方式][0025]本专利技术提供了一种新的应用，即，桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用，该桃叶珊瑚苷是一种提取于草药中的环烯醚萜苷，其纯度为98.36％以上，该桃叶珊瑚苷的化学结构式为：
[0026][0027]桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)是一种广泛存在于传统草药中的天然化合物，被广泛用于治疗领域的研究。桃叶珊瑚苷(β
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D
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吡喃葡萄糖苷)，是环烯醚萜苷家族的成员，广泛存在于植物中。具有广泛的药理特性，包括抗氧化、抗衰老、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤和保肝。
[0028]如下通过HEI
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OC1细胞培养和C57小鼠基底膜培养，可验证桃叶珊瑚苷在体外培养的耳蜗基底膜的毛细胞和毛细胞系中的保护作用。另外，通过鼓室注射C57小鼠，可验证桃叶珊瑚苷的在体作用。具体为：
[0029]细胞培养
[0030]HEI
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OC1(House Ear Institute organ of Corti 1)细胞在含10％胎牛血清和50μg/mL氨苄西林的高糖DMEM中培养，环境控制为33℃，且含10％CO2；在培养基中溶解桃叶珊瑚苷成150μM浓度，将细胞在桃叶珊瑚苷溶液中预处理4小时，再将在培养基中加入顺铂配
成20μM顺铂溶液处理24小时；24小时后更换正常培养基，恢复细胞4小时。
[0031]基底膜培养
[0032]从出生后第3天的C57BL/6小鼠上解剖耳蜗基底膜于基底膜培养皿中，在37℃，5％CO2/95％空气环境中进行培养；培养过夜后，实验组耳蜗外植体预处理24h；去除处理后的培养基，耳蜗外植体在正常培养基中恢复48h。
[0033]鼓室注射
[0034]将8周听力正常C56BL/6小鼠麻醉，在显微镜下右侧鼓室注射1mg/ml顺铂溶液，左侧鼓室注射顺铂溶液和150μM桃叶珊瑚苷溶液；观察3天后测量ABR。
[0035]可见：桃叶珊瑚苷在体外培养的耳蜗基底膜的毛细胞和毛细胞系中的保护作用，以及桃叶珊瑚苷的在体作用。
[0036]下面结合具体实施例对本专利技术作以下进一步说明，但是，本专利技术不限于该实施例：
[0037]实施例1
[0038]桃叶珊瑚苷用于小鼠顺铂耳毒性的研究
[0039]1.试验方法
[0040]1.1小鼠顺铂耳毒性模型的建立和实验分组：
[0041]将6
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8周龄，健康雄性C57BL/6小鼠6只，测量闭合声场下双耳听力正常；每只小鼠右耳为顺铂组，左耳为顺铂加桃叶珊瑚苷组；小鼠麻醉后，右耳鼓室注射顺铂溶液(1mg/ml)，左耳注射溶于顺铂溶液的桃叶珊瑚苷溶液(150mM)；测量鼓室注射3天双耳闭合声场听力。
[0042]1.2检测指标：
[0043]检测小鼠鼓室注射前正常听力，检测小鼠鼓室注射后3天听力；测听力后，使用3％戊巴比妥麻醉，取耳蜗组织于4％多聚甲醛固定，取基底膜进行Myosin7a和CtBP2染色，进行存活毛细胞和突触的计数。
[0044]1.3统计方法：
[0045]采用GraphPad Prism 8.2和SPSS 25.0进行绘图与统计分析；实验数据以Mean
±
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.桃叶珊瑚苷在预防或治疗顺铂耳毒性中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述桃叶珊瑚苷是一种提取于草药中的环烯醚萜苷。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述桃叶珊瑚苷纯度为98.36％以上。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述桃叶珊瑚苷用于细胞培养包括以下步骤：将HEI
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OC1细胞在含10％胎牛血清和50μg/mL氨苄西林的高糖DMEM中培养，环境控制为33℃，且含10％CO2；在培养基中溶解桃叶珊瑚苷成150μM浓度，将细胞在桃叶珊瑚苷溶液中预处理4小时，再将在培养基中加入顺铂配成20μM顺铂溶液处理24小时；24小时后更换正常培养基，恢复细胞4小时，可见桃叶珊瑚苷在HEI
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OC1细胞系中保护了细胞免受顺铂毒性作用。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述桃叶珊瑚苷用于基底膜培养包括以下步骤：从出生后第3天的C57BL/6小鼠上解剖耳蜗基底膜于基底膜培养皿中，在37℃、5％CO2/95％空气环境中进行培养；培养过夜后，实验组耳蜗外植体预处理24h；去除处理后的培养基，耳蜗外植体在正常培养基中恢复48h，可见桃叶珊瑚苷减少了顺铂诱导的毛细胞缺失以及减轻了顺铂诱导的毛细胞凋亡。6.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述桃叶珊瑚苷用于鼓室注射包括以下步骤：将8周听力正常C56BL/6小鼠麻醉，在显微镜下右侧鼓室注射1mg/ml顺铂溶液，左侧...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜雨萌，于栋祯，殷善开，李壮壮，姚青秀，
申请(专利权)人：上海市第六人民医院，
类型：发明
国别省市：