本申请公开了一种疫苗佐剂体系，所述疫苗佐剂体系中包含可电离磷脂和环二核苷酸；所述可电离磷脂分子包裹所述环二核苷酸分子。进行递送效果和疫苗佐剂应用实验。借助于二者之间的氢键相互作用，IP9能够通过简单混合高效包裹环二核苷酸，构建出佐剂体系ipSTING。不同于传统的带电或不带电磷脂，IP9在中性和酸性pH下具有不同的分子构型，因而可以响应内涵体酸性环境并破坏内涵体膜，促进环二核苷酸的胞质释放。释放。释放。
【技术实现步骤摘要】
一种疫苗佐剂体系及其在新冠和猴痘病毒疫苗中的应用
[0001]本申请涉及一种疫苗佐剂体系及其在新冠和猴痘病毒疫苗中的应用，属于病毒疫苗领域。
技术介绍
[0002]继新冠疫情后，由猴痘病毒(monkeypox virus)引发的流行疫情近期被世界卫生组织宣布为“国际关注的突发公共卫生事件”。面临新型病原体的不断出现，开发快速、高效的疫苗成为目前应对各类疫情传播的重要方向和策略。基于病毒重组蛋白为抗原的疫苗体系是目前疫苗开发的主流技术路线之一。然而，SARS
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CoV
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2和monkeypox virus的重组蛋白普遍存在免疫原性低的问题。目前广泛采用的铝佐剂一方面在诱导高水平抗体免疫反应方面效率不足，另一方面是在刺激抗原特异性T细胞免疫方面存在先天不足。因此开发对病原体蛋白抗原具有普适、高效佐剂活性的佐剂体系具有重要的战略意义和技术储备价值。
[0003]模式识别受体(PRR)作为机体免疫系统的第一道防线，在识别和清除病原体方面发挥重要作用。模式识别受体可以通过识别病原相关分子模式和损伤相关分子模式，来启动固有免疫基因的转录反应，表达干扰素等细胞因子，促进体液和细胞免疫应答，最后清除细菌、病毒和肿瘤等。基于该机制，通过注射PRR刺激剂可以提高疫苗的免疫反应效率。作为PRR刺激剂的代表之一，环二核苷酸后可以高效诱导I型干扰素分泌，进而在疫苗佐剂体系制备方面展现出突出的潜力。然而，环二核苷酸跨膜性差、稳定性差的特性极大地阻碍其进一步生物医药应用。
技术实现思路
[0004]为解决上述问题，本专利技术设计了一种基于可电离磷脂IP9的脂质体递送体系，用于负载和递送免疫刺激剂环二核苷酸。本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种疫苗佐剂体系，所述疫苗佐剂体系中包含可电离磷脂和环二核苷酸；所述可电离磷脂分子包裹所述环二核苷酸分子。
[0006]可选地，所述可电离磷脂具有如下结构式：
[0007][0008]可选地，所述可电离磷脂的制备方法包括如下步骤：
[0009]步骤1)将2
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氯
‑2‑
氧
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1,3,2
‑
二氧磷杂环戊烷与正壬醇反应，得到反应产物P3；
[0010]步骤2)将反应产物P3与二辛胺反应，得到所述可电离磷脂。
[0011]可选地，所述步骤1)中将2
‑
氯
‑2‑
氧
‑
1,3,2
‑
二氧磷杂环戊烷加入到正壬醇和三乙胺的混合溶液中，在室温下反应10
‑
20h；
[0012]可选地，所述步骤1)的反应完成后，过滤除去盐酸三乙胺盐，蒸发浓缩得到反应产物P3；
[0013]可选地，所述步骤2)中将反应产物P3与二辛胺溶于二甲基亚砜中在65
‑
75下反应48
‑
96h，制备得到所述可电离磷脂。
[0014]可选地，所述步骤2)反应完成后蒸发去除二甲基亚砜，再使用二氯甲烷和甲醇梯度洗脱得到所述可电离磷脂。
[0015]所述环二核苷酸的结构通式如下：
[0016][0017]其中：B1/B2＝A，G，I；
[0018]X＝H，OH，F；
[0019]Y＝OH，SH。
[0020]可选地，所述环二核苷酸具有如下结构式：
[0021][0022]可选地，所述疫苗佐剂体系中可电离磷脂和环二核苷酸的质量比为1：0.05
‑
0.5。
[0023]可选地，所述疫苗佐剂体系中还包含双十烷基二甲基溴化铵、胆固醇、二肉豆蔻酰甘油
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聚乙二醇2000；
[0024]可选地，所述可电离磷脂与双十烷基二甲基溴化铵、胆固醇、二肉豆蔻酰甘油
‑
聚乙二醇2000的摩尔比为1:0.25
‑
4：0.25
‑
4：0.003
‑
0.02。
[0025]本申请还提出了上述疫苗佐剂体系在疫苗中的应用。
[0026]一种新冠病毒疫苗，所述新冠病毒疫苗中包含上述的疫苗佐剂体系以及新冠病毒抗原蛋白；
[0027]可选地，
[0028]所述新冠病毒疫苗中所述新冠病毒抗原蛋白的浓度为0.05
‑
0.5mg/mL；
[0029]所述新冠病毒疫苗中环二核苷酸的浓度为0.05
‑
0.5mg/mL。
[0030]可选地，所述新冠病毒抗原为SARS
‑
CoV
‑
2RBD蛋白。
[0031]一种猴痘病毒疫苗，所述新冠病毒疫苗中包含上述的疫苗佐剂体系以及猴痘病毒抗原蛋白；
[0032]可选地，
[0033]所述猴痘病毒疫苗中所述猴痘病毒抗原蛋白的浓度为0.05
‑
0.5mg/mL；
[0034]所述猴痘病毒疫苗中环二核苷酸的浓度为0.05
‑
0.5mg/mL。
[0035]可选地，所述猴痘病毒抗原为猴痘病毒表面膜蛋白A35R。
[0036]本申请能产生的有益效果包括：
[0037]本专利技术选择环二核苷酸CDG作为刺激剂的代表构建佐剂体系，并进行递送效果和疫苗佐剂应用实验。借助于二者之间的氢键相互作用，IP9能够通过简单混合高效包裹CDG，构建出佐剂体系ipSTING。不同于传统的带电或不带电磷脂，IP9在中性和酸性pH下具有不同的分子构型，因而可以响应内涵体酸性环境并破坏内涵体膜，促进CDG的胞质释放。后续抗原提呈细胞激活实验证明ipSTING能够显著促进CDG进入胞质，诱导干扰素分泌及CD86活化蛋白的表达。并且，以上激活特性显著高于商业化转染试剂(Lipo)以及膜穿孔蛋白(PFO)带来的激活水平。此外，进一步的小鼠免疫实验证明“ipSTING+重组蛋白抗原”疫苗体系可以显著提高SARS
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CoV
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2RBD蛋白抗原和monkeypox virus A35R膜蛋白抗原的免疫原性，诱导产生高滴度的抗原特异性抗体和高水平T细胞免疫反应，显著优于游离CDG和商业化铝佐剂等对照组。基于此，“ipSTING+重组蛋白抗原”体系可以作为制备新冠病毒、猴痘病毒等病毒疫苗的快速、高效策略。
附图说明
[0038]图1为ipSTING细胞层面刺激巨噬细胞诱导干扰素分泌表征图(Lipo：商业化阳离子脂质体(Lipofectmine 3000)；PFO：穿孔蛋白)。***：p<0.001；
[0039]图2为ipSTING及对照组刺激RAW264.7巨噬细胞CD86表达的流式分析图(CDG浓度1μg/mL)；***：p<0.001；
[0040]图3为疫苗免疫完成后，基于ELISA测定各组血清抗体滴度。**：p<0.01，*：p<本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种疫苗佐剂体系，其特征在于，所述疫苗佐剂体系中包含可电离磷脂和环二核苷酸；所述可电离磷脂分子包裹所述环二核苷酸分子。2.根据权利要求1所述的疫苗佐剂体系，其特征在于，所述可电离磷脂具有如下结构式：3.根据权利要求1所述的疫苗佐剂体系，其特征在于，所述可电离磷脂的制备方法包括如下步骤：步骤1)将2
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氯
‑2‑
氧
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1,3,2
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二氧磷杂环戊烷与正壬醇反应，得到反应产物P3；步骤2)将反应产物P3与二辛胺反应，得到所述可电离磷脂。4.根据权利要求3所述的疫苗佐剂体系，其特征在于，所述步骤1)中将2
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氯
‑2‑
氧
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1,3,2
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二氧磷杂环戊烷加入到正壬醇和三乙胺的混合溶液中，在室温下反应10
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20h；优选地，所述步骤1)的反应完成后，过滤除去盐酸三乙胺盐，蒸发浓缩得到反应产物P3；优选地，所述步骤2)中将反应产物P3与二辛胺溶于二甲基亚砜中在65
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75下反应48
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96h，制备得到所述可电离磷脂。优选地，所述步骤2)反应完成后蒸发去除二甲基亚砜，再使用二氯甲烷和甲醇梯度洗脱得到所述可电离磷脂。5.根据权利要求1所述的疫苗佐剂体系，其特征在于，所述环二核苷酸具有如下结构式：6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴军军，欧阳松应，范陈媛，陈冠杰，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：
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