液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法技术

本发明专利技术公开了一种液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法，包括以下步骤：S1、配制盐酸雷尼替丁供试品溶液；S2、配制盐酸雷尼替丁对照品溶液，绘制标准曲线；S3、将S1中的盐酸雷尼替丁供试品溶液利用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法


[0001]本专利技术涉及盐酸雷尼替丁中基因毒性杂质的测定，特别是液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法。

技术介绍

[0002]盐酸雷尼替丁为强效的H2受体阻滞剂，能竞争性阻滞组胺与H2受体结合，抑制胃酸分泌。临床上用于治疗十二指肠溃疡、胃溃疡、消化道出血、食管反流、口腔溃疡等疾病。盐酸雷尼替丁结构式中含有的二甲胺和亚硝基结构，也是亚硝胺类化合物中的主要组成结构。亚硝胺类化合物，具有强基因毒性、强致畸性和强致癌性，能直接或间接损害DNA，导致基因突变或癌变的遗传毒性杂质。各国的法规机构EMA、FDA、ICH等都对遗传毒性杂质有了更明确的要求。2018年华海药业缬沙坦中含有遗传毒性杂质N
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亚硝基二甲胺事件发生后，N
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亚硝胺类遗传毒性杂质倍受关注。
[0003]公开号为CN114878707A的中国专利公开了一种测定雷尼替丁及其固体制剂中N
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亚硝基二甲胺的高效液相色谱法，利用色谱柱对处理后的供试品溶液和对照溶液分别进行色谱分析，高效液相色谱的条件为：波长为235nm，流速为1ml/min，柱温为30℃，进样20μl；高效液相色谱的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为碱性水性流动相，所述碱性水相流动相满足7＜pH≤10.5，所述流动相B为有机相。该专利技术流动相体系应呈碱性，实现雷尼替丁以稳定的分子态被固定相吸附，实现更好的分离度。用氨
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碳酸氢铵缓冲体系可满足体系碱性需要，基线噪音较小，且兼容质谱。该专利采用高效液相色谱法测定雷尼替丁中的杂质，但是通过目前测定方法仅能测定雷尼替丁中杂质N
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亚硝基二甲胺的含量，无法同时测定多种杂质。
[0004]盐酸雷尼替丁的化学结构中同时含有亚硝酸盐和二甲胺基团，可降解产生N
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亚硝基二甲胺(NDMA)、N
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亚硝基二乙胺(NDEA)和N
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亚硝基二异丙胺(NDIPA)等N
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亚硝胺类遗传毒性杂质亚硝胺类化合物并带入最终产品中，该方法只针对N
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亚硝基二甲胺这1种亚硝基类基因毒性杂质进行研究，适用性小，不能全面反映原料及制剂中N
‑
亚硝胺类遗传毒性杂质的控制情况。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供液质联用法测定盐酸雷尼替丁中多种遗传毒性杂质的方法，即可同时测定盐酸雷尼替丁中的十一种亚硝胺类杂质。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法，包括以下步骤：
[0008]S1、配制盐酸雷尼替丁供试品溶液；
[0009]S2、配制盐酸雷尼替丁对照品溶液，绘制标准曲线；
[0010]S3、将S1中的盐酸雷尼替丁供试品溶液利用液相色谱
‑
质谱联用法进行测定，液相
色谱条件为：以0.05
‑
0.15％甲酸的水溶液为流动相A，以0.05
‑
0.15％甲酸的甲醇溶液为流动相B，进行梯度洗脱，测得盐酸雷尼替丁供试品溶液中杂质的含量；
[0011]S3中质谱参数确定的方法为：采用流动注射法，通过全扫描确定待测遗传毒性杂质的母离子，再执行仪器优化程序确定MRM优化参数。
[0012]本专利技术可以同时对盐酸雷尼替胶囊中11种基因毒性杂质进行检测，能更加全面反映原料及制剂中N
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亚硝胺类遗传毒性杂质的控制情况，从而有效提高盐酸雷尼替胶囊用药安全性，为雷尼替丁胶囊合理设计生产工艺、贮存环境、运输条件和包装等提供参考，为保障雷尼替丁胶囊质量控制提供依据。
[0013]本专利技术采用水做溶剂时，各基因毒性杂质在质谱中的响应要优于采用甲醇做溶剂，各基因毒性杂质在质谱中的响应更好，且盐酸雷尼替丁在质谱中干扰更小，有利于11种基因杂质测定。
[0014]在本专利技术的一个优选的实施例中，S3中梯度洗脱时间、流动相A和流动相B的比例具体为：
[0015]时间(min)A％B％1:0093
‑
973
‑
72:0090
‑
946
‑
106:5090
‑
946
‑
1010:0060
‑
7030
‑
4011:0030
‑
5050
‑
7018:00010021:00010021:1093
‑
973
‑
726:0093
‑
973
‑7[0016]在本专利技术的一个优选的实施例中，S3中液相色谱柱的柱温35
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45℃，进样量为5
‑
10μl；流速是0.5
‑
1ml
·
min
‑1。
[0017]在本专利技术的一个优选的实施例中，S3中液相色谱柱的柱温40
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45℃，进样量为5μl；流速是0.5
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1ml
·
min
‑1。进样体积进样体积为5μL时，各杂质的响应已达到检验基本要求，即浓度为1ng/ml的对照溶液所得的信噪比大于10，且相对于进样体积10μL，盐酸雷尼替丁进样的量更小、在质谱中干扰更小、对质谱污染可能性更小，更有利于杂质测定。
[0018]在本专利技术的一个优选的实施例中，S3中质谱的参数如下：
[0019][0020]在本专利技术的一个优选的实施例中，S3中，液相色谱
‑
质谱联用法采用液相色谱仪和质谱仪联用，在质谱仪这端上配置有六通阀。
[0021]在本专利技术的一个优选的实施例中，六通阀控制每隔0.5min
‑
18min通入S1中的盐酸雷尼替丁供试品溶液，可排除盐酸雷尼替丁对质谱检测的干扰和因其浓度过大和制剂中杂质引起的质谱污染。
[0022]在本专利技术的一个优选的实施例中，S1中配制盐酸雷尼替丁供试品溶液需进行过滤，滤膜微孔直径为0.1
‑
0.5μm。
[0023]在本专利技术的一个优选的实施例中，滤膜微孔直径为0.1
‑
0.3μm。0.1
‑
0.3μm滤膜基本没有吸附作用且不影响杂质的测定。滤膜微孔直径大于0.3μm对盐酸雷尼替丁溶液有一定吸附作用，故本试验对离心后取上清液样品采用0.1
‑
0.3μm滤膜进行过滤，取续滤液作为供试品溶液。
[0024]与现有技术相比，本专利技术所具有的有益效果为：
[0025]本专利技术采用液相色谱
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大气压化学离子化
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三重四极杆质谱联用法(LC
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APCI
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MS/MS)测定雷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、配制盐酸雷尼替丁供试品溶液；S2、配制盐酸雷尼替丁对照品溶液，绘制标准曲线；S3、将S1中的盐酸雷尼替丁供试品溶液利用液相色谱
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质谱联用法进行测定，液相色谱条件为：以0.05
‑
0.15％甲酸的水溶液为流动相A，以0.05
‑
0.15％甲酸的甲醇溶液为流动相B，进行梯度洗脱，测得盐酸雷尼替丁供试品溶液中杂质的含量；S3中质谱参数确定的方法为：利用质谱仪采用流动注射法，通过全扫描确定待测遗传毒性杂质的母离子，再执行仪器优化程序确定MRM优化参数。2.根据权利要求1所述的液质联用法测定盐酸雷尼替丁中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，S3中梯度洗脱时间、流动相A和流动相B的比例具体为：时间(min)A％B％1:0093
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973
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72:0090
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946
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106:5090
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946
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1010:0060
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7030
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4011:0030
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7018:00010021:00010021:1093
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973
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726:0093
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973
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73.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李钰鑫，陈鸿玉，李帅，刘雁鸣，李昌亮，兰文，李昭，
申请(专利权)人：湖南省药品检验检测研究院，
类型：发明
国别省市：