一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水果中巴西棕榈蜡的检测方法，属于食品检测技术领域。检测操作如下：(1)将被检测水果去核匀浆；(2)在匀浆物中加入甲苯混匀，加入适量氯化钠超声、离心，旋转蒸发至近干，加入正己烷稀释复溶两次，获得待净化液；(3)将待净化液过固相萃取柱，将洗脱液用氮气吹至近干，加入十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容，得到待检测液；(4)定性分析操作：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，确定待检测液中是否含有巴西棕榈蜡；定量分析操作：将待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算并计算公式计算，得到试样中巴西棕榈蜡的含量。本发明专利技术填补了水果中巴西棕榈蜡检测的空白。发明专利技术填补了水果中巴西棕榈蜡检测的空白。发明专利技术填补了水果中巴西棕榈蜡检测的空白。

【技术实现步骤摘要】
一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法


[0001]本专利技术属于食品检测
，具体涉及应用固相萃取技术和气相色谱质谱检测技术对水果中巴西棕榈蜡的检测方法。

技术介绍

[0002]巴西棕榈蜡(Carnauba Wax)是从生长于南美洲巴西东北部的棕榈树叶上提取的天然植物蜡，由于其具有良好的防潮湿性和抗氧化性，因此在食品的加工和保存中大量使用，可作为新鲜水果、可可制品及糖果的被膜剂和拮抗剂。但是，动物实验表明，过量的巴西棕榈蜡会对肠道组织造成一定的损伤，并且可能还会引起一些过敏反应。在GB2760
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2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中，规定其在新鲜水果中用量为0.4mg/kg。国际方面，欧盟(EU)规定巴西棕榈蜡(E903)在水果如柑橘、梨、桃子等进行表面处理时，其限量为200mg/kg。CAC规定了巴西棕榈蜡在经表面处理的新鲜水果中限量为400mg/kg。美国FDA对巴西棕榈蜡也有相应的限量要求，将其归类为公认的安全(GRAS)产品，允许在几种食品中使用，但应控制在良好生产规范中规定的量的范围内。
[0003]目前市场上有些生产企业为了增加商品卖相，延长货架期，无视国家标准规定，超限量使用巴西棕榈蜡等被膜剂。尤其是一些水果，由于果皮薄，肉质多汁，易腐烂变质和受冷害，不易保存，运输成本高，因此添加被膜剂的现象更为常见。近几年来，受疫情影响，我国进口水果数量有所回落，但也维持在高达六七百万吨每年的进口量，据2021年的数据显示，中国水果进口额达134.7亿美元，同比增长30.9％；进口量达702.7万吨，同比增长11.5％，鲜榴莲、车厘子、芭蕉等水果每年会大量进口。因此对于巴西棕榈蜡的检测，以及如何确保食品用蜡的绿色安全也成为了一项重要的议题。目前我国还没有水果中巴西棕榈蜡的检测标准，因此造成了面临着市场流通和进出口监管都无法对其跟踪检验该指标的问题。我国每年进出口的大量水果，均有必要对该项目进行监管控制，但由于缺少相应的标准检测方法，因此该项目的监管还处于空白状态，给双边贸易和食品安全都带来了考验，因此迫切需要建立检测方法。现下食品用蜡主要包括巴西棕榈蜡、石蜡，其检测的主要方法有气相色谱法、气相色谱
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质谱法、液相色谱
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质谱法等，但缺乏对水果尤其是浆果中巴西棕榈蜡检测方面的研究。

技术实现思路

[0004]为了实现水果中巴西棕榈蜡的快速提取、净化及准确定性定量检测，本专利技术提供一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法。
[0005]一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测操作步骤如下：
[0006](1)被检测物前处理
[0007](1.1)用料理机将待检测水果制成均质的浆状物，即试样；
[0008](1.2)称取25.00g试样，分别用40mL甲苯提取两次，合并提取液，将提取液旋蒸，用正己烷复溶，制成待净化液；
[0009](1.3)将待净化液过固相萃取柱净化，将洗脱液用氮气吹至近干，再加入0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容至1ml，得到待检测液；
[0010]所述固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；
[0011](2)定性定量检测
[0012]将5μL巴西棕榈蜡标准系列溶液和待检测液分别先后注入气相色谱质谱联用仪，采用相同色谱条件与质谱条件进行测定，获得巴西棕榈蜡标准溶液和待检测液的色谱质谱图谱；
[0013]定性分析操作如下：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比；当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明待检测液中含有巴西棕榈蜡；
[0014]定量分析操作如下：使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度与测得的相应的峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，以校正后的巴西棕榈蜡标准系列溶液的浓度为横坐标，校正后的C56、C58、C60峰面积之和为纵坐标，作线性回归得到标准曲线方程；根据待检测液中添加的内标溶液的浓度和对应峰面积比值来校正测得的C56、C58、C60峰面积之和，最后，将校正后的待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算，得到待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，根据公式计算得待检测液中巴西棕榈蜡的含量，公式中X是试样中巴西棕榈蜡含量，单位为mg/kg；C为由标准曲线计算出定容后的待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，单位为μg/mL；M为试样的质量，单位为g；V为试样最后的定容体积，单位为mL。
[0015]进一步的技术方案如下：
[0016]步骤(1.2)中，称取25.00g试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
[0017]步骤(1.3)中，用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液；然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
[0018]所述固相萃取柱为过滤器式，柱管内由上至下依次设有上层筛板、氨丙基硅胶、中层筛板、硅胶和下层筛板；所述氨丙基硅胶的质量为1g，硅胶的质量为2g；所述氨丙基硅胶的厚度和硅胶的厚度相同，均为15
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25mm；上层筛板、中层筛板、下层筛板的结构和材料均相同。
[0019]所述巴西棕榈蜡标准系列溶液为质量体积浓度5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的标准系列溶液，其中代表质量的物质为巴西棕榈蜡，代表体积的物质为溶剂二氯甲烷。
[0020]步骤(2)中，高温气相色谱质谱联用仪检测条件为：30m
×
0.25mm
×
0.1μm的CD
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5HT
色谱柱；进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力500kPa，脉冲时间0.2min；升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min；传输线：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于，检测操作步骤如下：(1)被检测物前处理(1.1)用料理机将待检测水果制成均质的浆状物，即试样；(1.2)称取25.00g试样，分别用40mL甲苯提取两次，合并提取液，将提取液旋蒸，用正己烷复溶，制成待净化液；(1.3)将待净化液过固相萃取柱净化，将洗脱液用氮气吹至近干，再加入0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容至1ml，得到待检测液；所述固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；(2)定性定量检测将5μL巴西棕榈蜡标准系列溶液和待检测液分别先后注入气相色谱质谱联用仪，采用相同色谱条件与质谱条件进行测定，获得巴西棕榈蜡标准溶液和待检测液的色谱质谱图谱；定性分析操作如下：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比；当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明待检测液中含有巴西棕榈蜡；定量分析操作如下：使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度与测得的相应的峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，以校正后的巴西棕榈蜡标准系列溶液的浓度为横坐标，校正后的C56、C58、C60峰面积之和为纵坐标，作线性回归得到标准曲线方程；根据待检测液中添加的内标溶液的浓度和对应峰面积比值来校正测得的C56、C58、C60面积之和，最后，将校正后的待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算，得到待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，根据公式计算得试样中巴西棕榈蜡的含量，公式中X是试样中巴西棕榈蜡含量，单位为mg/kg；C为由标准曲线计算出定容后的待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，单位为μg/mL；M为试样的质量，单位为g；V为待检测液最后定容体积，单位为mL。2.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(1.2)中，称取25.00g试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕亚宁，韩芳，赵静娟，马海建，刘雯，刘宇欣，丁磊，赵敏，金玉娟，周典兵，
申请(专利权)人：合肥海关技术中心，
类型：发明
国别省市：