一种基于气相色谱-串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于气相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法


[0001]本专利技术涉及一种人血清中污染物及其代谢产物的检测方法，具体涉及一种基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法。

技术介绍

[0002]吸烟与健康是世界范围内最受关注的公共卫生问题之一。尼古丁(式Ⅰ，分子式：C
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H
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N2)及其代谢产物可替宁(式Ⅱ，分子式C
10
H
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N2O)的人体残留是反映个体吸烟状态的重要标志物。血清是测定尼古丁及可替宁残留的理想生物样本，但样本收集时取样量有限。
[0003][0004]血清中痕量尼古丁和可替宁的常用分析方法有气相色谱法、液相色谱法、液相色谱
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串联质谱法。气相色谱法和液相色谱法灵敏度低、定性能差，对血清样本的需求量大(约1～2mL)，且样本需经蛋白沉淀、液液萃取或固相萃取、氮吹浓缩等复杂的前处理；液相色谱
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串联质谱法灵敏度和准确度均较高，所需血清量小，但仪器设备昂贵。上述方法在吸烟筛查的应用中均普及困难。

技术实现思路

[0005]鉴于目前缺乏在微量人血清中高效、准确且低成本的检测尼古丁和可替宁的方法，本专利技术提供一种基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，本专利技术方法前处理非常简单，且检测快速、准确，省时、高效且成本低，非常适用于大样本人群的吸烟及其危害评估的研究，也可用于控烟成效的客观评价与分析。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0007]一种基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，包括：取15～100μL人血清，加入5～50μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入45～300μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱
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串联质谱检测；根据定性离子对和保留时间对尼古丁、可替宁进行定性；将尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积与氘代同位素内标的定量子离子的峰面积的比值分别代入尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线，获得尼古丁和可替宁的浓度；
[0008]其中，气相色谱检测条件：色谱柱为DB
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EUPAH毛细管柱，规格为：柱长15～30m，内径0.18～0.25mm，膜厚0.14～0.25μm；进样量为1～2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为200～280℃；色谱柱初始温度为35～100℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持
2min；
[0009]串联质谱检测条件：电子轰击电离源，70eV；离子源和传输线的温度均为300℃；检测模式为MS/MS检测模式。
[0010]优选的，取25μL人血清，加入5μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入70μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱
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串联质谱检测。
[0011]优选的，所述的氘代同位素内标为氘代苊；所述的氘代同位素内标溶液为氘代苊浓度为1μg/mL的甲醇溶液。
[0012]所述的离心条件为：在温度4～40℃下、以转速5000～12000rpm/min离心5～15min；优选为：在温度4℃下、以12000rpm/min离心10min。
[0013]优选的，所述的气相色谱检测条件：色谱柱为DB
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EUPAH毛细管柱，规格为：柱长20m，内径0.18mm，膜厚0.14μm；进样量为2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为220℃；色谱柱初始温度为60℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持2min。
[0014]所述的质谱为串联四级杆质谱。
[0015]优选的，尼古丁的定性离子对为162
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84m/z和162
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133m/z；可替宁的定性离子对为176
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98m/z和176
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68m/z；氘代苊的定性离子对为162
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160m/z和162
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158m/z。尼古丁、可替宁和氘代苊的定量离子对分别为162
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84m/z、176
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98m/z和162
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160m/z，即尼古丁、可替宁和氘代苊的定量子离子分别为84m/z、98m/z和160m/z，
[0016]响应越高，灵敏度越高，样本中目标物质的检出率越高。优选的，离子对162
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84m/z和176
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98m/z的碰撞能量为10eV；离子对162
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160m/z的碰撞能量为15eV；离子对176
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68m/z和162
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158m/z的碰撞能量为20eV；离子对162
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133m/z碰撞能量为35eV。
[0017]所述的尼古丁的保留时间为5.7～6.2min，可替宁的保留时间为9.0～9.5min；
[0018]优选的，所述的尼古丁的保留时间为5.92～5.93min，可替宁的保留时间为9.26～9.27min，氘代苊的保留时间为7.13～7.14min。
[0019]优选的，所述的尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线是由以下方法绘制的：取25μL混合人血清，与5μL氘代苊溶液以及尼古丁标准溶液或可替宁标准溶液中的至少一种混合，甲醇补齐至100μL，得到标准曲线溶液，涡旋，离心，取上清液进行气相色谱
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串联质谱检测；以尼古丁或可替宁的浓度为横坐标，以尼古丁或可替宁的定量子离子的校正峰面积与氘代苊的定量子离子的峰面积的比值为纵坐标，建立尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线；其中，所述的尼古丁或可替宁的定量子离子的校正峰面积为尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积减去基质本底中尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积；尼古丁的基质匹配内标标准曲线范围为0～25ng/mL；可替宁的基质匹配内标标准曲线范围为0～500ng/mL。
[0020]所述的混合人血清为：随机从100份人血清中各吸取50μL，混合均匀，制成混合血清基质。
[0021]所述的基质本底为：取25μL混合人血清，与5μL氘代苊溶液混合，甲醇定容至100μL。
[0022]本专利技术的有益效果为：
[0023]本专利技术仅需微量血清样品，基于特定的毛细管柱有效分离尼古丁和可替宁，利用优化的串联四级杆监测参数，就可以准确、灵敏、省时、高效的获得尼古丁和可替宁残留数
据，且成本低。
[0024]本专利技术方法适用于大样本人群的吸烟及其危害评估的研究及控烟成效的客观评价与分析。
附图说明
[0025]图1为可替宁分别在毛细管柱DB
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5和DB
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EUPAH上的响应效果图。
[0026]图2为尼古丁一级质谱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：包括：取15～100μL血清，加入5～50μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入45～300μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱
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串联质谱检测；根据定性离子对和保留时间对尼古丁、可替宁进行定性；将尼古丁或可替宁的定量子离子的峰面积与氘代同位素内标定量子离子的峰面积的比值分别代入尼古丁或可替宁的基质匹配内标标准曲线，获得尼古丁和可替宁的浓度；其中，气相色谱检测条件：色谱柱为DB
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EUPAH毛细管柱，规格为：柱长15～30m，内径0.18～0.25mm，膜厚0.14～0.25μm；进样量为1～2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为200～280℃；色谱柱初始温度为35～100℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持2min。2.根据权利要求1所述的基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：取25μL血清，加入5μL氘代同位素内标溶液混匀，再加入70μL甲醇，充分涡旋，离心，取上清液进行气相色谱
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串联质谱检测。3.根据权利要求1所述的基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的氘代同位素内标为氘代苊；所述的氘代同位素内标溶液为氘代苊浓度为1μg/mL的甲醇溶液。4.根据权利要求1所述的基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的离心条件为：在温度4～40℃下、以转速5000～12000rpm/min离心5～15min。5.根据权利要求1所述的基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：所述的气相色谱检测条件：色谱柱为DB
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EUPAH毛细管柱，规格为：柱长20m，内径0.18mm，膜厚0.14μm；进样量为2μL，进样方式为不分流进样，进样口温度为220℃；色谱柱初始温度为60℃，保持1min，以20℃/min升至280℃，保持2min。6.根据权利要求1所述的基于气相色谱
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串联质谱快速测定微量人血清中尼古丁和可替宁的方法，其特征在于：串联质谱检测条件：电子轰击电离源，70eV；离子源和传输线的温度均为300℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，王守林，袁安杰，李旭旭，李书书，王超，陈超，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：