REG家族蛋白在诊断、筛查或评估动脉粥样硬化中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种REG家族蛋白在诊断、筛查或评估动脉粥样硬化中的应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术在动脉粥样硬化造模大鼠中发现Reg家族基因在mRNA转录水平、蛋白水平以及血清游离水平，均呈现出显著的上调表达。并进一步发现在动脉粥样硬化患者的血清中REG家族蛋白也呈现出上调表达，为动脉粥样硬化临床诊断以及病程评估提供更加便捷、准确而灵敏的检测指标，从而完善动脉粥样硬化临床检验手段与评估方案。评估方案。评估方案。

【技术实现步骤摘要】
REG家族蛋白在诊断、筛查或评估动脉粥样硬化中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
具体地，涉及再生基因REG家族蛋白在诊断、筛查或评估动脉粥样硬化中的应用。

技术介绍

[0002]心血管疾病是目前人类发病率最高、危害最大的疾病之一，动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是其最主要病因。AS的形成表现为管腔内脂质积累形成粥样斑块，造成动脉腔隙变窄甚至堵塞，从而导致动脉供应的组织器官缺血、坏死；病理进程主要包括血管内皮细胞损伤和功能障碍、平滑肌细胞异常增殖和迁移、泡沫细胞形成。目前AS的诊断主要依靠影像学来实现。与影像学相比，血清学检测具有简便、快速、易于操作和结果判读等优点，并且AS的生物学表现先于影像学表现，可以根据血清学检测结果进行早期干预减少并发症的产生。传统的AS血清学检测指标，包括炎性标志物、氧化应激指标、凝血功能指标、脂质相关标志物等，在辅助诊断AS方便发挥了一定的作用，但特异性较差，临床急需更加特异、有效的血清生物标志物用于AS的诊断、斑块稳定性评估、风险分层管理以及预后评估；同时，新型生物表标志物的研发有助于深入揭示AS的发生发展机制。
[0003]再生基因REG家族蛋白最早在研究胰腺炎和胰岛增殖过程中被发现的，在人和啮齿类动物中高度保守。每种REG家族蛋白由信号肽和一个C型凝集素结构域构成，根据蛋白质一级结构分为四组：(i)REG1：大鼠和小鼠为Reg1，人有两个同源类似物REG1A和REG1B；(ii)REG2，仅存在于小鼠中；(iii)REG3：大鼠和小鼠为Reg3α、Reg3β、Reg3γ和Reg3δ，人有两个同源类似物REG3A和REG3G；(iv)Reg4。人类表达的五个REG家族蛋白REG1A、REG1B、REG3A、REG3G和REG4具有促进细胞增值、抗凋亡、免疫调节等功能；已有研究表明REG家族蛋白在糖尿病、阿尔茨海默病和消化道肿瘤等疾病中发挥着重要作用，具有成为潜在生物标志物的价值。尚未有关于再生基因Reg或REG家族基因或其编码的REG家族蛋白与动脉粥样硬化是否有关的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种用于动脉粥样硬化诊断、筛查、评估的生物标志物及其应用。特别是REG家族蛋白作为生物标志物在诊断、筛查或评估动脉粥样硬化中的应用。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种用于动脉粥样硬化诊断、筛查、评估的生物标志物，所述生物标志物为REG家族蛋白。具体的，所述REG家族蛋白为REG1A(NCBI中的蛋白序列号为P05451)，REG1B(NCBI中的蛋白序列号为P48304)，REG3A(NCBI中的蛋白序列号为Q06141)或REG3G(NCBI中的蛋白序列号为Q6UW15)。
[0007]利用APOE敲除(APOE
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)大鼠合并高脂饮食构建了AS模型，大体O油红染色显示AS大鼠主动脉斑块形成显著，利用Image J软件分析斑块面积约30％；相比之下，对照组大鼠(APOE
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、普通饮食)主动脉基本上无斑块形成(图1)。对AS模型大鼠主动脉进行了转录组
分析，研究发现再生基因Reg家族基因在粥样硬化的大鼠主动脉中显著高表达(图2)，mRNA转录水平、蛋白水平以及血清中游离蛋白浓度均得以体现(见图3至图5)。通过对临床AS患者与健康对照志愿者血清中四种REG家族蛋白(REG1A，REG1B，REG3A和REG3G)的评估，发现REG1A和REG3G在AS患者中显著高表达；REG1B和REG3A在AS患者也呈现升高趋势，与健康对照组相比具有统计学差异；ROC曲线分析揭示这四种REG家族蛋白在AS患者的临床诊断中具有较高的可靠性(见图6)，表明再生基因REG家族蛋白可作为潜在的AS生物标志物，为动脉粥样硬化临床诊断以及病程评估提供更加便捷、准确而灵敏的检测指标，完善动脉粥样硬化临床检验手段与评估方案。
[0008]第二方面，本专利技术提供了REG家族蛋白的检测试剂在制备如下任一产品中的应用：
[0009]1)在制备动脉粥样硬化诊断产品中的应用；
[0010]2)在制备动脉粥样硬化筛查产品中的应用；
[0011]3)在制备评估动脉粥样硬化风险产品中的应用；
[0012]4)在制备动脉粥样硬化预后评估产品中的应用。
[0013]进一步地，所述REG家族蛋白选自REG1A，REG1B，REG3A和/或REG3G。
[0014]进一步地，所述检测试剂为检测样本中REG家族蛋白的表达水平的试剂。
[0015]在上述应用中，所述产品可以通过但不限于免疫组化或酶联免疫吸附检测样本中的REG家族蛋白的表达水平。
[0016]进一步地，所述产品中含有与REG家族蛋白特异性结合的抗体。
[0017]进一步地，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体，优选的，所述抗体为单克隆抗体，该抗体可以采用本领域公知的方法制备得到或商业购买获得。
[0018]在上述应用中，所述检测样本可以优选为血清或尿液。例如，收集临床动脉粥样硬化患者血清样本来进行检测。
[0019]进一步的，所述产品可以为芯片、制剂、试纸条或试剂盒。
[0020]第三方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述检测样本中REG家族蛋白的表达水平的试剂；且，
[0021]所述试剂盒为应用于如下任一应用的试剂盒：
[0022]1)用于动脉粥样硬化诊断的试剂盒；
[0023]2)用于动脉粥样硬化筛查的试剂盒；
[0024]3)用于评估动脉硬化风险的试剂盒；
[0025]4)用于动脉粥样硬化预后评估的试剂盒。
[0026]本专利技术的有益效果如下：
[0027]本专利技术在动脉粥样硬化造模大鼠中发现Reg家族基因在mRNA转录水平、蛋白水平以及血清游离水平，均呈现出显著的上调表达。为检测Reg家族蛋白的血清浓度上调是否具有在临床中用于动脉粥样硬化诊断方面的作用，本专利技术采用ELISA方法测定30例冠状动脉粥样硬化患者行PCI术前以及29例健康体检者新鲜血液标本中REG1A、REG1B、REG3A和REG3G的浓度，检测结果如图6所示：动脉粥样硬化组REG1A、REG1B、REG3A和REG3G血清浓度均显著高于健康对照组。受试者工作特征曲线(ROC)分析显示：血清中REG1A、REG1B、REG3A和REG3G在动脉粥样硬化临床诊断的AUC值分别为0.739、0.678、0.695和0.892，结果表明REG家族蛋白可有效地作为动脉粥样硬化临床诊断的标志物。
附图说明
[0028]下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。
[0029]图1示出动脉粥样硬化造模大鼠主动脉油红O染色图。
[0030]图2示出动脉粥样硬化造模大鼠差异表达基因的火山图。
[0031]图3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.REG家族蛋白的检测试剂在制备如下任一产品中的应用：1)在制备动脉粥样硬化诊断产品中的应用；2)在制备动脉粥样硬化筛查产品中的应用；3)在制备评估动脉粥样硬化风险产品中的应用；4)在制备动脉粥样硬化预后评估产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述REG家族蛋白选自REG1A，REG1B，REG3A和/或REG3G。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为检测样本中REG家族蛋白的表达水平的试剂。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品通过免疫组化或酶联免疫吸附检测样本中的REG家族蛋白的表达水平。5.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟志雄，郭学敏，余志康，喻鹏，甘彩燕，张群吉，吴和明，肖婷，
申请(专利权)人：梅州市人民医院梅州市医学科学院，
类型：发明
国别省市：