抗体组合物制造技术

本发明专利技术的目的在于，提供对共表达彼此不同的两种抗原的靶细胞更特异性地发挥效应功能并进行杀伤、并且可使对各靶抗原的亲和性维持得充分高的抗体组合物。本发明专利技术涉及包含第一IgG半分子和第二IgG半分子且针对彼此不同的第一抗原和第二抗原的抗体组合物、以及构成抗体组合物的第一IgG半分子和第二IgG半分子。体组合物的第一IgG半分子和第二IgG半分子。体组合物的第一IgG半分子和第二IgG半分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体组合物


[0001]本专利技术涉及抗体组合物和其制造方法、IgG半分子以及包含该IgG半分子的试剂盒。

技术介绍

[0002]已知目前已获得批准的抗体药物具有各种作用机制(非专利文献1)。作为其代表性机制，包括抑制生长因子等配体与受体的结合的中和活性、活化所结合的受体的激动剂活性、以及抗体依赖性细胞杀伤(antibody
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dependent cellular cytotoxicity：以下ADCC)活性和补体依赖性细胞杀伤(complement
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dependent cytotoxicity：以下CDC)活性等IgG类抗体分子所具有的效应功能等。其中，由利妥昔单抗、曲妥珠单抗的临床试验的生物标志物分析表明，ADCC活性是抗体药物的临床上的重要作用机制(非专利文献2、3)。
[0003]抗体是由两分子的免疫球蛋白重链(H链)和两分子的免疫球蛋白轻链(L链)总计4分子的多肽链构成的约150KDa的四聚体蛋白。如图1所示，抗体可分为可变区(V)和恒定区，所述可变区包含直接参与抗原结合且在各抗体克隆中氨基酸序列不同的互补决定区(CDR)，所述恒定区包含负责控制上述效应功能和血液半衰期的Fc区(以下也简称为Fc)。Fc包含CH1～CH3结构域和铰链结构域。
[0004]人抗体根据H链恒定区的序列而分为功能不同的IgG、IgA、IgM、IgD、IgE这5类。进而，人IgG类分为IgG1至IgG4的4个亚类。
[0005]其中，已知IgG1亚类的抗体具有最高的ADCC活性、CDC活性(非专利文献4)，包括利妥昔单抗、曲妥珠单抗在内的多种抗体药物为IgG1。
[0006]另一方面，已知IgG4亚类具有如下特征：与其它亚类相比效应功能弱，另外具有固有的铰链区的氨基酸序列；两个CH3结构域间的相互作用比其它亚类弱，由此在体内发生被称为“Fab臂交换”的、两个H链的可逆性结合/分离；等(非专利文献5、6)。
[0007]ADCC活性是一种细胞杀伤机制，自然杀伤细胞(以下记作NK细胞)等借助Fc受体之一的FcγRIIIA(以下也简记为CD16a)来识别结合于癌细胞表面的膜抗原的IgG型抗体的Fc并使其活化，结果，表达穿孔素、颗粒酶、Fas之类的分子，从而引起该细胞杀伤机制(非专利文献1)。
[0008]通过X射线晶体结构分析阐明了CD16a与人IgG1的结合模式(非专利文献7、8)。由于Fc结构的点对称性，存在两处在IgG1的Fc上的CD16a结合区，实际上Fc与IgG以1：1的数量比(化学计量比)结合。并且，在构成Fc的两个CH2结构域中，各自以不同的区域(以下称为CD16a结合区)进行接触。
[0009]具体而言，CD16a与IgG1的一个CH2结构域上的L235、G236、G237、P238、S239、D265、V266、S267、H268、E269、E294、Q295、Y296、N297、S298、T299、R301、N325、A327、I332等进行相互作用。另一方面，CD16a同时与IgG1的另一个CH2结构域上的L235、G236、G237、K326、A327、L328、P329、A330等进行相互作用(编号表示基于EU编号的CH2结构域上的氨基酸位置)(非专利文献7、8、9、10)。
[0010]通过人为地改造抗体药物的CH2结构域、提升与CD16a的结合能力，能够增强ADCC活性。事实上，已知很多通过改造CH2结构域的氨基酸来增强ADCC活性的例子(非专利文献11)。已知在IgG1的一条H链的CH2结构域和另一条H链的CH2结构域中引入不同的氨基酸改造且2条H链通过二硫键结合的IgG1抗体具有高的ADCC活性(专利文献1)。
[0011]另外，还已知通过改造与Fc结合的N
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结合型复合型糖链的糖链可增强ADCC活性(非专利文献12)。特别地，通过改造糖链来增强ADCC活性的技术已被应用于莫格利珠单抗(mogamulizumab)(非专利文献13)、奥妥珠单抗(obinutuzumab)(非专利文献14)这些已获得批准的抗体药物。
[0012]双特异性抗体与天然抗体不同，是能够与两种不同种类的抗原结合的人工改造抗体分子，已报道了多种分子形态(非专利文献15)。
[0013]图2A示出双特异性抗体的结构的示意图。作为双特异性抗体在药物中的应用，可列举例如：与癌细胞和T细胞表面的CD3进行结合(以下称为CD3双特异性抗体)而将两者交联，从而杀伤癌细胞；通过中和两种功能分子而增强药效(非专利文献15)。
[0014]在癌症、自身免疫疾病的治疗中，为了去除作为致病细胞的癌细胞、自身反应性淋巴细胞，使用发挥IgG型抗体的效应功能、CD3双特异性抗体的T细胞募集功能的抗体药物。
[0015]但是，这些致病细胞原本来自于正常的细胞，通常，能够通过单一的表面标志物分子正确地与正常细胞区分开的情况很少见。因此，在利用效应功能等去除致病细胞时，大多担心表达同一抗原分子的正常细胞也被攻击而导致副作用。
[0016]例如，用于治疗淋巴瘤、各种自身免疫疾病的利妥昔单抗的靶抗原CD20在正常B细胞中也表达，用于治疗乳腺癌的曲妥珠单抗的靶抗原HER2在心肌细胞中也表达。因此，这些抗体药物破坏正常细胞而引起的副作用令人担忧。
[0017]另一方面，Mazor等报道了对各靶抗原的亲和性减弱的双特异性抗体对双阳性细胞发挥相对强的效应功能的例子(非专利文献16)。
[0018]另外，报道了一种抗原结合分子的组合，其含有第一抗原结合分子和第二抗原结合分子，所述第一抗原结合分子具有与第一抗原结合的第一抗原结合区以及包含第一CH2和第一CH3中的任一者或两者的第一多肽，所述第二抗原结合分子具有与第二抗原结合的第二抗原结合区以及包含第二CH2和第二CH3中的任一者或两者的第二多肽，上述第一抗原结合分子和上述第二抗原结合分子不通过共价键结合，并且在液体中混合时，与形成同源二聚体相比，更容易形成异源二聚体(专利文献2)
[0019]现有技术文献
[0020]专利文献
[0021]专利文献1：国际公开第2013/002362号
[0022]专利文献2：国际公开第2018/155611号
[0023]非专利文献
[0024]非专利文献1：Carter P.Nat Rev Cancer 2001；1:118
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[0025]非专利文献2：Cartron G,Dacheux L,Salles G,et al.Blood 2002；99:754
‑8[0026]非专利文献3：Weng WK,Levy R.J Clin Oncol 2003；21:3940
‑7[0027]非专利文献4：Birch,J.R.,Lennox,E.S.(Eds.),Monoclonal Antibodies:Principles and Applications本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体组合物，其是包含第一IgG半分子和第二IgG半分子且针对彼此不同的第一抗原和第二抗原的抗体组合物，其满足以下的(1A)～(6A)，(1A)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自由1个免疫球蛋白轻链(以下简记为L链)和1个免疫球蛋白重链(以下简记为H链)构成，所述H链包含H链可变区、铰链结构域、CH1结构域、CH2结构域和CH3结构域，所述CH2结构域中具有彼此不同的第一Fcγ受体IIIA(以下记作CD16a)结合区和第二CD16a结合区，(2A)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含根据EU索引表示的C226A和C229A的氨基酸残基置换，(3A)所述第一IgG半分子包含与所述第一抗原结合的抗原结合结构域且所述第一CD16a结合区中包含根据EU索引表示的D265A的氨基酸残基置换，(4A)所述第二IgG半分子包含与所述第二抗原结合的抗原结合结构域且所述第二CD16a结合区中包含根据EU索引表示的P329Y的氨基酸残基置换，(5A)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含根据EU索引表示的(a)S239D和K326T的氨基酸残基置换，或者所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含根据EU索引表示的(b)S239D、S298A、E333A、L242C和K334C的氨基酸残基置换，(6A)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子中的至少一者包含所述CH3结构域中的氨基酸残基置换作为使CH3结构域间相互作用与IgG1亚类的CH3结构域间相互作用相比减弱的改造。2.根据权利要求1所述的抗体组合物，其中，与针对仅表达所述第一抗原的靶细胞和仅表达所述第二抗原的靶细胞的效应功能相比，对共表达所述第一抗原和所述第二抗原的靶细胞特异性地发挥效应功能并进行杀伤。3.根据权利要求1或2所述的抗体组合物，其中，所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含选自根据EU索引表示的Y349A、L351A、T366A、L368A、D399A、F405A、Y407A、K409A和K409R中的至少1个氨基酸残基置换作为使CH3结构域间相互作用与IgG1亚类的CH3结构域间相互作用相比减弱的改造。4.根据权利要求3所述的抗体组合物，其中，所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含根据EU索引表示的K409R的氨基酸残基置换作为使CH3结构域间相互作用与IgG1亚类的CH3结构域间相互作用相比减弱的改造。5.根据权利要求1～4中任一项所述的抗体组合物，其中，所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自包含所述(a)S239D和K326T的氨基酸残基置换。6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体组合物，其中，所述第一IgG半分子的H链恒定区(以下简记为CH)包含序列号248所示的氨基酸序列，所述第二IgG半分子的CH包含序列号252所示的氨基酸序列。7.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体组合物，其中，所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子中的、与Fc区结合的全部N
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糖苷结合型糖链中糖链还原末端的N
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乙酰葡糖胺上未结合岩藻糖的糖链的比例为20％以上。8.根据权利要求1～7中任一项所述的抗体组合物，其中，
所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子的免疫球蛋白亚类为IgG1。9.一种第一IgG半分子，其是特征在于与第二IgG半分子缔合的第一IgG半分子，其中，所述第一IgG半分子和第二IgG半分子满足以下的(1B)～(7B)，(1B)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子形成针对彼此不同的第一抗原和第二抗原的抗体组合物，(2B)所述第一IgG半分子和所述第二IgG半分子各自由1个L链和1个H链构成，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹羽伦平，宇佐美克明，
申请(专利权)人：协和麒麟株式会社，
类型：发明
国别省市：