用于Vero细胞的化学限定培养基添加剂、及其在培养细胞和扩增病毒中的用途制造技术

本申请提出了一种能够有效地用于对Vero细胞进行培养的化学限定培养基添加剂，其不含血清和蛋白等成分，采用该添加剂与MEM培养基配合使用，可有效地实现细胞扩增或培养，可有效缩短倍增时间；并且，在进行Vero细胞或病毒扩增、尤其是病毒疫苗的扩增生产时，获得的产品不含有其他蛋白成分，可降低血清等动物源性添加物的安全风险，并减少生产过程中其他蛋白对病毒疫苗纯化制剂的压力，更适合工业化生产。产。

【技术实现步骤摘要】
用于Vero细胞的化学限定培养基添加剂、及其在培养细胞和扩增病毒中的用途


[0001]本申请涉及生物
，具体地，本申请涉及用于Vero细胞的化学限定培养基添加剂、及其在培养细胞和扩增病毒的方法中的用途，更具体地，本申请涉及用于培养Vero细胞的化学限定培养基添加剂、扩增Vero细胞或病毒的方法和疫苗。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎灭活疫苗（又称Vero细胞）是一种新型冠状病毒疫苗，适用于预防由新型冠状病毒感染引起的疾病。Vero细胞下培养过程中，常需要在培养基中添加类似胎牛血清(FCS)或来源于动物、植物或者酵母的蛋白质水解物等蛋白添加剂，导致获得的Vero细胞中含有其他蛋白成分（例如胎牛血清、蛋白质水解物等），将该Vero细胞注射到动物机体内，存在引发不必要的免疫反应的风险。并且，针对来源于动物、植物或者酵母的蛋白质水解物，不同批次间的蛋白质水解物差异较大，其不利于细胞的增殖以及各细胞的蛋白表达。因此，继续开发一种新型的用于培养Vero细胞的化学限定培养基添加剂。

技术实现思路

[0003]本申请旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本申请的一个目的在于提出一种能够有效地用于对Vero细胞进行培养的化学限定培养基添加剂。
[0004]由此，在本申请的一个方面，本申请提出了一种用于培养Vero细胞的化学限定培养基添加剂，所述添加剂与MEM培养基配合，所述添加剂包括：41重量份的L
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丙氨酸，98重量份的L
‑/>盐酸精氨酸，32.5重量份的L
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天门冬氨酸，31重量份的L
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门冬酰胺，8重量份的L
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半胱氨酸盐酸盐一水，27.5重量份的L
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胱氨酸二盐酸盐，47.5重量份的L
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谷氨酸，292.5重量份的L
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谷氨酰胺，23.08重量份的甘氨酸，24.5重量份的L
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盐酸组氨酸一水，14重量份的L
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羟脯氨酸，36重量份的L
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异亮氨酸，39重量份的L
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亮氨酸，50重量份的L
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盐酸赖氨酸，15.5重量份的L
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甲硫氨酸，
21重量份的L
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苯丙氨酸，25.5重量份的L
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脯氨酸，42重量份的L
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丝氨酸，30重量份的L
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苏氨酸，7.5重量份的L
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色氨酸，32重量份的L
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缬氨酸，0.585 重量份的还原型谷胱甘肽，0.698 重量份的七水硫酸亚铁，0.765 重量份的七水硫酸锌，3.375 重量份的维生素C，39.713 重量份的氯化胆碱，3.668 重量份的D
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泛酸钙，3.544 重量份的叶酸，42.307 重量份的肌醇，0.056 重量份的九水硝酸铁，1.406 重量份的氯化锂，6.188 重量份的柠檬酸，0.563 重量份的盐酸吡哆醛，5.378 重量份的烟酰胺，2.909 重量份的维生素B6，3.173 重量份的维生素B1，7.178 重量份的维生素B12，0.203 重量份的D
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生物素，4.028 重量份的次黄嘌呤，0.140 重量份的亚油酸，0.473 重量份的硫辛酸，0.135 重量份的1，4
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丁二胺二盐酸盐，0.518 重量份的维生素B2，0.878 重量份的胸苷，0.585 重量份的对氨基苯甲酸，2.250 重量份的重组人胰岛素，0.008重量份的氢化可的松，1000 重量份的F68，2000 重量份的HEPES，3000 重量份的无水葡萄糖，0.000150056重量份的氯化铝，0.000431411重量份的乙酸钡，0.00018757重量份的六水氯化钴，1.50056E
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05重量份的四水氯化锰，
0.00056271重量份的氟化钠，0.000131299重量份的氯化亚锡，0.000131299重量份的氯化镉，5.6271E
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05重量份的二氧化锗，0.00375重量份的亚硒酸钠，0.00075028重量份的九水偏硅酸钠，1.8757E
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05重量份的氯化镍，3.7514E
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05重量份的偏钒酸铵，4.69E
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06重量份的溴化钾，1.50056E
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05重量份的碘化钾，7.50E
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07重量份的氯化铷，9.3785E
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06重量份的钼酸铵，5.63E
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07重量份的硝酸银。
[0005]专利技术人经过大量试验对培养Vero细胞的化学限定培养基添加剂（简称添加剂）进行优化和调整，未发现化学限定培养基添加剂各配方之间的规律，结果也是无法预测的。然而，当采用该添加剂和MEM培养基配合得到的化学限定培养基培养Vero细胞，可有效地实现细胞扩增或细胞培养，缩短倍增时间；并且，本申请的化学限定培养基添加剂中不含血清和蛋白，进行Vero细胞或病毒扩增、尤其是病毒疫苗的扩增生产，获得的产品不含有其他蛋白成分，可降低血清等动物源性添加物的安全风险，并减少生产过程中其他蛋白对病毒疫苗纯化制剂的压力，更适合工业化生产。
[0006]需要说明的是，本文中的“化学限定培养基”是指化学成分完全明确，组成和浓度固定的培养基。含有本申请添加剂的化学限定培养基具有批间差异小、可重复性强、结果稳定、无动物源风险等优点。
[0007]根据本申请的实施例，所述MEM培养基的配方如下所示：原料名称mg/LL
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丙氨酸8.9L
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盐酸精氨酸126L
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门冬酰胺13.2L
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天门冬氨酸13.2L
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胱氨酸二盐酸盐31L
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谷氨酸14.7L
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谷氨酰胺292甘氨酸7.5L
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盐酸组氨酸一水42L
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异亮氨酸52L
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亮氨酸52L
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盐酸赖氨酸73L
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甲硫氨酸15L
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苯丙氨酸32
L
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脯氨酸11.5L
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丝氨酸10.5L
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苏氨酸48L
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色氨酸10L
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酪氨酸二钠盐无水52L
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缬氨酸46苯酚红10二水氯化钙265氯化钾400无水硫酸镁98氯化钠6800一水磷酸二氢钠140D
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无水葡萄糖1000D
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泛酸钙1叶酸1氯化胆碱1肌醇2烟酰胺1盐酸吡哆醛1维生素B20.1维生素B11
[0008]在本申请的另一方面，本申请提出了一种扩增Vero细胞的方法，其包括：将Vero细胞接种在MEM培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于培养Vero细胞的化学限定培养基添加剂，所述添加剂与MEM培养基配合，其特征在于，所述添加剂包括：41重量份的L
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丙氨酸，98重量份的L
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盐酸精氨酸，32.5重量份的L
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天门冬氨酸，31重量份的L
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门冬酰胺，8重量份的L
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半胱氨酸盐酸盐一水，27.5重量份的L
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胱氨酸二盐酸盐，47.5重量份的L
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谷氨酸，292.5重量份的L
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谷氨酰胺，23.08重量份的甘氨酸，24.5重量份的L
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盐酸组氨酸一水，14重量份的L
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羟脯氨酸，36重量份的L
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异亮氨酸，39重量份的L
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亮氨酸，50重量份的L
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盐酸赖氨酸，15.5重量份的L
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甲硫氨酸，21重量份的L
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苯丙氨酸，25.5重量份的L
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脯氨酸，42重量份的L
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丝氨酸，30重量份的L
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苏氨酸，7.5重量份的L
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色氨酸，32重量份的L
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缬氨酸，0.585 重量份的还原型谷胱甘肽，0.698 重量份的七水硫酸亚铁，0.765 重量份的七水硫酸锌，3.375 重量份的维生素C，39.713 重量份的氯化胆碱，3.668 重量份的D
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泛酸钙，3.544 重量份的叶酸，42.307 重量份的肌醇，0.056 重量份的九水硝酸铁，1.406 重量份的氯化锂，6.188 重量份的柠檬酸，0.563 重量份的盐酸吡哆醛，5.378 重量份的烟酰胺，2.909 重量份的维生素B6，3.173 重量份的维生素B1，7.178 重量份的维生素B12，
0.203 重量份的D
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生物素，4.028 重量份的次黄嘌呤，0.140 重量份的亚油酸，0.473 重量份的硫辛酸，0.135 重量份的1，4
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丁二胺二盐酸盐，0.518 重量份的维生素B2，0.878 重量份的胸苷，0.585 重量份的对氨基苯甲酸，2.250 重量份的重组人胰岛素，0.008重量份的氢化可的松，1000 重量份的F68，2000 重量份的HEPES，3000 重量份的无水葡萄糖，0.000150056重量份的氯化铝，0.000431411重量份的乙酸钡，0.00018757重量份的六水氯化钴，1.50056E
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05重量份的四水氯化锰，0.00056271重量份的氟化钠，0.000131299重量份的氯化亚锡，0.000131299重量份的氯化镉，5.6271E
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05重量份的二氧化锗，0.00375重量份的亚硒酸钠，0.00075028重量份的九水偏硅酸钠，1.8757E
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05重量份的氯化镍，3.7514E
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05重量份的偏钒酸铵，4.69E
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06重量份的溴化钾，1.50056E
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05重量份的碘化钾，7.50E
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07重量份的氯化铷，9.3785E
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06重量份的钼酸铵，5.63E
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07重量份的硝酸银。2.一种扩增Vero细胞的方法，其特征在于，包括：将Vero细胞接种在MEM培养基中，所述MEM培养基添加权利要求1所述的添加剂；对所述Vero细胞进行培养，以便实现对所述Vero细胞的扩增。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以所述MEM培养基和所述添加剂的总体积计，所述L
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丙氨酸的终浓度为41mg/L，所述L
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盐酸精氨酸的终浓度为98mg/L，所述L
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天门冬氨酸的终浓度为32.5mg/L，所述L
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门冬酰胺的终浓度为31mg/L，所述L
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半胱氨酸盐酸盐一水的终浓度为8mg/L，所述L
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胱氨酸二盐酸盐的终浓度为27.5mg/L，所述L
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谷氨酸的终浓度为47.5mg/L，所述L
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谷氨酰胺的终浓度为292.5mg/L，所述甘氨酸的终浓度为23.08mg/L，所述L
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盐酸组...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文庆，赵洪磊，徐舸辰，王杰勇，浦勇，类成霞，
申请(专利权)人：天信和苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：