本发明专利技术公开了一种生物碱类抗氧化剂及其制备方法和应用，属于生物碱类化合物提取技术领域。具体的制备方法为：将宽叶独行菜全草用乙醇加热回流提取，得到粗提物；之后用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相高压液相制备色谱分离、反相制备柱纯化，得到所述生物碱类抗氧化剂。本发明专利技术分离制备的生物碱类抗氧化剂具有显著的总抗氧化能力。而且，本发明专利技术原料宽叶独行菜来源广泛，乙醇加热回流提取等方法均可实现规模化操作，且高压液相制备色谱分离可以保证产品的纯度大于98％。品的纯度大于98％。品的纯度大于98％。
【技术实现步骤摘要】
一种生物碱类抗氧化剂及其制备方法和应用
[0001]本专利技术属于生物碱类化合物提取
，具体涉及一种生物碱类抗氧化剂及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]氧化应激(Oxidative Stress，OS)，是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种状态，倾向于氧化，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。
[0003]宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)，为十字花科(Brassicaceae)独行菜属(Lepidium)植物，又称大辣、辣辣根、止痢草。宽叶独行菜生于田边、地埂、沟边、河谷，分布于甘肃、青海、宁夏等地，分布广泛，资源丰富，具有一定的开发和利用价值。《中国沙漠地区药用植物》中记载，宽叶独行菜具有清热燥湿，治菌痢，肠炎的作用。现代药物研究表明，宽叶独行菜还具有一定的抗氧化、抗衰老作用，因此从宽叶独行菜中分离鉴定抗氧化剂并将其应用于抗氧化、抗衰老以及相关药物合成方面具有重要的应用价值。
技术实现思路
[0004]为解决现有技术中的上述问题，本专利技术提供了一种生物碱类抗氧化剂及其制备方法和应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]本专利技术技术方案之一：一种生物碱类抗氧化剂，分子式为C
16
H
12
N2O2，结构式为：
[0007][0008]本专利技术技术方案之二：所述一种生物碱类抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)将宽叶独行菜用乙醇回流提取，之后将提取液浓缩，得到粗提物；
[0010](2)将步骤(1)得到的粗提物依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；
[0011](3)将步骤(2)得到的正丁醇部位利用正相硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷
‑
甲醇混合流动相梯度洗脱，并将洗脱液浓缩、干燥，依次得到组分Fr.1～Fr.4；
[0012](4)将步骤(3)得到的组分Fr.4利用微孔树脂开放柱色谱进行分离，用甲醇
‑
水混合流动相梯度洗脱，并将洗脱液浓缩，依次得到组分Fr.4
‑
1～Fr.4
‑
10；
[0013](5)将步骤(4)得到的组分Fr.4
‑
2利用反相高压液相色谱柱进行分离，用甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相洗脱，洗脱液经紫外检测器检测，收集色谱峰馏分，干燥，得到组分
Fr.4
‑2‑
1；
[0014](6)将步骤(5)得到的组分Fr.4
‑2‑
1利用反相制备柱进行纯化，用甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相洗脱，洗脱液经紫外检测器检测，收集色谱峰馏分，干燥，得到组分Fr.4
‑2‑1‑
2，即为所述生物碱类抗氧化剂。
[0015]进一步地，步骤(1)中，所述宽叶独行菜为宽叶独行菜粉末，具体的制备方法为将宽叶独行菜全草阴干，粉碎后过40目筛。
[0016]进一步地，步骤(1)中，所述乙醇的体积分数为95％，所述宽叶独行菜与所述乙醇的料液比为1kg：(5～50)L；所述回流提取的温度为70℃，时间为2～4h，次数为2～4次；所述浓缩的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0017]进一步地，步骤(2)中，所述粗提物与所述石油醚、乙酸乙酯或正丁醇的体积比为1：1；所述萃取的次数为2～4次；所述浓缩的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0018]进一步地，步骤(3)中，所述正相硅胶柱色谱分离前还需将正丁醇部位用200～300目硅胶拌样，所述正丁醇部位与硅胶的料液比为1g：1～3mL；所述二氯甲烷
‑
甲醇混合流动相梯度洗脱中二氯甲烷与甲醇的体积比依次为15：1、10：1、5：1、1：1；所述干燥的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0019]进一步地，步骤(4)中，所述微孔树脂开放柱色谱的固定相为MCI微孔树脂；所述利用微孔树脂开放柱色谱进行分离前还需将组分Fr.4溶于水中，并过0.45微米微孔滤膜，所述Fr.4与水的质量体积比为1：1；所述甲醇
‑
水混合流动相梯度洗脱中甲醇的体积比依次为0、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％；所述浓缩的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0020]进一步地，步骤(5)中，所述反相高压液相色谱柱柱长为250mm，直径为20mm，固定相为5μm的Dubhe C18；所述甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相中乙腈的体积分数为14％，所述甲酸溶液中甲酸的体积分数为0.2％；所述洗脱时间为55min，所述洗脱流速为19mL/min；所述紫外检测器的波长为254nm；所述干燥的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0021]进一步地，步骤(6)中，所述反相制备柱柱长为250mm，直径为10mm，固定相为5μm的Unitary分析柱；所述甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相中乙腈的体积分数为5％，所述甲酸溶液中甲酸的体积分数为0.2％；所述洗脱时间为60min，所述洗脱流速为5.0mL/min；所述紫外检测器的波长为254nm；所述干燥的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。
[0022]本专利技术技术方案之三：所述生物碱类抗氧化剂在制备抗氧化药物中的应用。
[0023]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0024](1)本专利技术分离制备的生物碱类抗氧化剂具有显著的总抗氧化能力；
[0025](2)本专利技术分离制备的生物碱类抗氧化剂的纯度能够达到98％；
[0026](3)本专利技术原料宽叶独行菜来源广泛，且提取、萃取、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高压液相色谱等方法均可实现规模化操作。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获
得其他的附图。
[0028]图1为本专利技术实施例1制备得到的生物碱类抗氧化剂的1H
‑
NMR谱；
[0029]图2为本专利技术实施例1制备得到的生物碱类抗氧化剂的
13
C
‑
NMR谱；
[0030]图3为本专利技术实施例1制备得到的生物碱类抗氧化剂与维生素C溶液、槲皮素溶液抗氧化活性对照图。
具体实施方式
[0031]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种生物碱类抗氧化剂，其特征在于，分子式为C
16
H
12
N2O2，结构式为：2.一种权利要求1所述一种生物碱类抗氧化剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将宽叶独行菜用乙醇回流提取，之后将提取液浓缩，得到粗提物；(2)将步骤(1)得到的粗提物依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并将萃取液浓缩，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；(3)将步骤(2)得到的正丁醇部位利用正相硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷
‑
甲醇混合流动相梯度洗脱，并将洗脱液浓缩、干燥，依次得到组分Fr.1～Fr.4；(4)将步骤(3)得到的组分Fr.4利用微孔树脂开放柱色谱进行分离，用甲醇
‑
水混合流动相梯度洗脱，并将洗脱液浓缩，依次得到组分Fr.4
‑
1～Fr.4
‑
10；(5)将步骤(4)得到的组分Fr.4
‑
2利用反相高压液相色谱柱进行分离，用甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相洗脱，洗脱液经紫外检测器检测，收集色谱峰馏分，干燥，得到组分Fr.4
‑2‑
1；(6)将步骤(5)得到的组分Fr.4
‑2‑
1利用反相制备柱进行纯化，用甲酸溶液
‑
乙腈混合流动相洗脱，洗脱液经紫外检测器检测，收集色谱峰馏分，干燥，得到组分Fr.4
‑2‑1‑
2，即为所述生物碱类抗氧化剂。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述宽叶独行菜为宽叶独行菜粉末，具体的制备方法为将宽叶独行菜全草阴干，粉碎后过40目筛。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇的体积分数为95％，所述宽叶独行菜与所述乙醇的料液比为1kg：(5～50)L；所述回流提取的温度为70℃，时间为2～4h，次数为2～4次；所述浓缩的真空度为0.07～0.09MPa，温度为50～60℃。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述粗提物与所述石油醚、乙酸乙酯或正丁醇的...
【专利技术属性】
技术研发人员：于瑞涛，王秀，曹静亚，陈静华，吴小可，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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